转耐辐射球菌irrE基因提高拟南芥盐胁迫耐受性的表型分析

耐辐射球菌中的irrE基因作为一种全局性调节因子,在抵御极端辐射照射时起着至关重要的作用。利用农杆菌介导的花序浸染法,将irrE基因转化拟南芥,筛选和鉴定出表达irrE的植株,并分析了转基因植株的盐胁迫耐受能力。结果显示,转irrE拟南芥表现出对盐胁迫的耐受性提高;在盐胁迫下,转基因拟南芥体内脯氨酸含量比野生型有明显的提高。RNA半定量分析显示转基因植株中AtNHX1表达水平升高。因此推测irrE基因在转基因拟南芥中调控了AtNHX1的表达,引起了植株的盐胁迫耐受性提高。

产朊假丝酵母(Candida utilis)尿酸酶的基本特性

产朊假丝酵母尿酸酶通过由DEAE-sepharose和Xanthine-agarose等层析纯化．纯化酶经SDS- PAGE显示单一蛋白带,HPLC显示纯度为97．5％．其相对分子质量为127 kDa,变性SDS-PAGE表明该酶的表观分子质量为33 kDa．该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适pH为8．5,最适温度为40．0℃．在最适条件下测得其Km为35．0μmol／L．某些金属离子对酶活性的研究结果表明,Co3+, Pb2+,Mn2+及EDTA,NEMI对尿酸酶活性有抑制作用,Mg2+,Triton X-100对尿酸酶活性略有激活作用．

拟南芥糖基转移酶基因UGT71C5启动子的克隆和功能分析

通过PCR扩增,从拟南芥中克隆到长度为903 bp的UGT71C5基因启动子,并构建了此种启动子与GUS嵌合的重组载体,通过农杆菌介导法转化拟南芥,得到转基因拟南芥,并且通过启动子分析软件对全序列进行分析,发现在该段序列中含有典型的TATA-box、CAAT-box和光应答元件GT1、干旱应答元件ERD等一些顺式作用元件.利用分光光度法测定转基因植株在光照、干旱和ABA等胁迫处理下的GUS酶活力,结果表明:转基因植株的GUS酶活力介于野生型和35S阳性对照之间,与正常条件下生长的转基因植物相比,光照处理8h和12h后其GUS酶活力分别增加3倍和4倍;干旱和ABA胁迫处理后并未发现酶活力有明显的增强.可见基因UGT71C5启动子对光照有应答,而对干旱和ABA无应答.

拟南芥谷氨酰tRNA合成酶同其相互作用蛋白VDAC的转录水平分析

本研究在基于前期对拟南芥VDAC(电压依赖性阴离子通道蛋白质)与AtGluRS(谷氨酰tRNA合成酶)两种基因的过量表达和抑制表达转基因突变体株系的初步生理性状分析基础上,对筛选获得的转基因T1代植株以及拟南芥abi1、abi2突变株,进行转录水平两种蛋白特异性基因片段的地高辛标记Northern杂交以及半定量RT-PCR分析.结果显示,在拟南芥abi1、abi2突变株中,VDAC和AtGluRS两种基因的转录表达均收到不同程度的抑制;而VDAC与AtGluRS两种基因之间存在间接或直接的正调控关系,进一步证明了两种基因在转录水平上存在着密切联系.

拟南芥AtGluRS相互作用蛋白质VDAC及其转基因植物表型分析

电压依赖性阴离子通道蛋白质(voltage-dependent anion channel,VDAC)是拟南芥谷氨酰tRNA合成酶(AtGluRS)相互作用的蛋白质.为了研究VDAC蛋白的功能和作用,通过构建VDAC稳定表达载体,农杆菌介导的方法转化拟南芥,筛选和鉴定出VDAC过量和抑制表达植株.研究结果证实VDAC的过量和抑制表达植株影响气孔关闭和种子萌发.VDAC的过量表达导致植株对ABA敏感,VDAC的抑制表达降低了植株对ABA的敏感性.推测VDAC蛋白可能参与ABA信号途径.