血管内皮生长因子反义寡核苷酸对裸鼠淋巴瘤血管生成的影响

背景与目的:研究表明,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与淋巴瘤从低度向高度恶性的进展有关,且VEGF表达高的淋巴瘤易发生早期远处转移。目前,VEGF反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对淋巴瘤血管生成影响的研究尚少。本课题拟通过体内、体外实验探讨硫代磷酸化修饰的VEGFASODN对淋巴瘤血管生成的影响。方法:将终浓度分别为10、20、30μmol/L的VEGFASODN和错义序列与人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞分别孵育24h、48h,采用RT-PCR检测VEGFmRNA的表达,采用链酶菌抗生素蛋白鄄过氧化酶免疫组化法(streptavidin/peroxidase,SP法)检测VEGF蛋白的表达。用VEGFASODN处理的Namalwa细胞注射入裸鼠,监测裸鼠肿瘤的大小,并采用SP法分析淋巴瘤中微血管密度(microvesseldensity,MVD)。结果:凝胶图像分析表明VEGFASODN3个浓度组(10、20、30μmol/L)处理的Namalwa细胞VEGFmRNA的表达分别为1.28、0.86和0.47,错义序列组和对照组分别为1.79和1.84。VEGFASODN组、错义序列组和对照组VEGF蛋白的表达分别为23.3%、46.9%和47.8%。VEGFASODN组、错义组、PBS组的细胞接种裸鼠,其新生血管的数目分别为12.26±0.78、23.92±1.14和24.13±1.21。

甲氨蝶呤联合来氟米特或柳氮磺吡啶治疗类风湿关节炎的疗效

目的:比较甲氨蝶呤联合来氟米特或柳氮磺吡啶治疗类风湿关节炎的疗效和不良反应。方法:40例活动性类风湿关节炎病人随机分为实验组和对照组,实验组用甲氨蝶呤(10mg/周)及来氟米特(20mg/d)治疗,对照组用甲氨蝶呤(10mg/周)及柳氮磺吡啶(2.0g/d)治疗,疗程为24周,对两种方案在12、24周时的疗效及观察指标进行评估。结果:实验组在12、24周时的总有效率分别为85%、95%,对照组为60%、70%,显示两组间差异有显著性。总副反应发生率两者差异无显著性。结论:甲氨蝶呤联合来氟米特治疗类风湿类节炎的疗效优于甲氨蝶呤联合柳氮磺吡啶,但前者副反应略大于后者。

VEGF硫代反义寡核苷酸抑制U937细胞VEGF的表达

为研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子反义脱氧寡核苷酸 (VEGF ASODN)对急性单核细胞白血病细胞系U937VEGF表达的影响 ,将终浓度分别为 10 ,2 0 ,30 μmol/L的VEGF ASODN和错义序列与U937细胞分别孵育 2 4 ,4 8,72小时 ,采用RT PCR检测VEGFmRNA的表达 ,Westernblot检测VEGF蛋白的表达。结果显示 ,VEGF ASODN对U937细胞的VEGF的表达有明显的抑制作用 ,与错义序列组和空白对照组相比有显著差异 (P<0 .0 5 ) ;错义序列组与空白对照组VEGF的表达无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :VEGFASODN可下调白血病细胞株U937的VEGFmRNA和蛋白的表达水平。

VEGF反义寡核苷酸对K562细胞VEGF表达的影响

目的 研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子 (VEGF)反义寡核苷酸 (ASODN)对慢性红白血病细胞K 5 62VEGF表达的影响。方法 将终浓度分别为 10、2 0、3 0 μmol·L-1的VEGFASODN和错义序列与K 5 62细胞分别孵育 2 4、48h ,另设空白对照组。采用RT PCR检测VEGFmRNA的表达 ,免疫组织化学方法检测VEGF蛋白的表达。结果 VEGFA SODN对K 5 62细胞VEGF表达有明显的抑制作用 ,与错义序列组和空白对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。错义序列组与空白对照组比较VEGF的表达无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 VEGFASODN可下调慢性红白血病细胞K 5

健康教育对类风湿关节炎患者疗效及依从性的影响

目的评价健康教育对类风湿关节炎患者疗效及治疗依从性的影响。方法用就诊顺序随机法,将96例类风湿关节炎患者分为研究组和对照组,对研究组实施健康教育,评价两组患者的疗效及治疗依从性。结果12和24周时研究组患者的疗效及治疗依从性比对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健康教育能明显提高类风湿关节炎患者的疗效及治疗依从性。

VEGF反义寡核苷酸对淋巴瘤新生血管生成的抑制作用

目的研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠淋巴瘤血管生成的作用。方法将终浓度为20μmol/L的VEGFASODN、错义序列及PBS分别与人淋巴瘤细胞系Namal-wa细胞孵育24h,裸鼠随机分为VEGFASODN组、错义序列组和对照组,将上述处理的Namalwa细胞(5×106溶于PBS液20μl)接种于裸鼠皮下,4周后处死全部裸鼠,测定肿瘤大小,标本采用链酶菌抗生素蛋白-过氧化酶免疫组化法(SP法)检测肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果第28天VEGFASODN组、错义序列组和PBS组肿瘤体积的大小分别为(212.6±196.5)、(468.2±161.3)和(473.1±166.7)mm3。VEGFASODN组微血管密度(12.26±0.78)较对照组(24.13±1.21)显著减少。结论VEGFASODN对裸鼠淋巴瘤的生长及其新生血管的生成有明显的抑制作用。

系统性红斑狼疮合并血栓形成患者狼疮抗凝物水平分析

目的:分析合并血栓形成系统性红斑狼疮(SLE)患者狼疮抗凝物(LA)水平变化。方法:78例SLE患者(SLE组)按是否合并血栓事件分为SLE-血栓组(n=8)和SLE-非血栓组(n=70)两个亚组,另选体检健康者为对照组(n=40)。用改良稀释蝰蛇毒磷脂时间法测定各组LA,计算LA比值,统计学比较各组LA比值差异。结果:SLE组较对照组LA比值明显增高(1.30±0.36vs 1.04±0.07,t=6.139,P<0.01)。SLE-血栓组LA比值明显高于SLE-非血栓组(1.80±0.44vs 1.25±0.30,t=-4.659,P<0.01)。结论:SLE合并血栓事件患者LA水平高于SLE非血栓患者。

切割Fas mRNA核酶的构建及其体内外切割活性的鉴定

白血病细胞表面可高表达FasL ,诱导表达Fas的T细胞凋亡 ,从而降低其抗白血病的作用 .以高表达Fas的小鼠淋巴瘤细胞系Yac 1作为模型 ,设计并合成了针对FasmRNA 5 96位点的锤头状核酶基因 ,用T7/SP6体外转录系统检测了该核酶对FasmRNA的体外切割效率 ,通过电穿孔转染法将其导入Yac 1细胞 ,通过RT PCR、Western印迹法检测细胞上Fas的表达 .细胞经抗Fas的抗体作用后 ,通过MTT法测细胞的增殖 ,annexin Ⅴ凋亡检测试剂盒测细胞凋亡 .该核酶体外切割活性达6 0 % ,且能有效降低细胞表面Fas的表达 ;细胞经抗Fas的抗体作用后 ,转染核酶的细胞增殖活性较对照增高 ,而凋亡率明显降低 .结果表明 ,构建的切割FasmRNA核酶在体内外均具备良好的切割FasmRNA的活性 ,使细胞免于Fas途径的凋亡 ,为研究抑制T细胞的凋亡从而增强其抗白血病效应提供实验基础 .

系统性红斑狼疮合并肺动脉高压5例临床分析

系统性红斑狼疮（Systemic Lupuserythe-matosus,SLE）是一种多系统的自身免疫性疾病,病因不明,常累及全身多个器官或系统损害,部分患者可出现肺动脉高压（Pulmonary Arterial Hypertension,PAH）,生活质量明显下降[1]。随着诊断技术和诊断意识的不断提高,SLE合并PAH越来越被人们所重视,

反义寡核苷酸对人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞血管内皮生长因子表达影响的体外研究(英文)

为了研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞VEGF表达的影响,将终浓度分别为5、10、20μmol/L的VEGFASODN和错义序列与人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞分别孵育24、48小时,采用RT-PCR检测VEGFmRNA的表达,采用链酶菌抗生素蛋白-过氧化酶免疫组织化学法(streptavidin/peroxidase,SP法)检测VEGF的表达。结果表明:VEGFASODN3个浓度组(5、10和20μmol/L)处理的Namalwa细胞VEGFmRNA的表达分别为1.38、0.96、0.57,错义序列组和对照组分别为1.79、1.84。当加入20μmol/LVEGFASODN作用48小时后,细胞内VEGF蛋白水平显著减少,而错义序列组Namalwa细胞VEGF蛋白水平未见明显改变。结论:VEGFASODN在体外能够抑制Namalwa细胞VEGF的表达。

锤头状核酶降低小鼠胰岛细胞经CD95途径的凋亡

目的研究锤头状核酶通过调控CD95的表达,对小鼠胰岛细胞凋亡的影响;探索提高胰岛移植物存活率的新途径。方法体外构建针对CD95mRNA93位点的锤头状核酶(pU6-Rz93)和突变型核酶(pU6-dRz93)。采用Ⅴ型胶原酶消化法分离小鼠胰岛细胞,通过干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素1α(IL-1α)诱导其高表达CD95后,经钠米载体-Effectene将核酶转染至该细胞。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹检测(Westernblot)法检测胰岛细胞CD95的表达。胰岛细胞经抗CD95的抗体(JO2)作用后,以Caspase-3活性检测试剂盒检测转染前后细胞Caspase-3活性的变化;MTT法测细胞的增殖;Annexin-Ⅴ凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,并观察了各组细胞对细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤的反应能力。结果细胞因子可诱导小鼠胰岛细胞高表达CD95分子。转染pU6-Rz93组的胰岛细胞CD95的表达与转染空载体组和转染pU6-dRz93组相比,明显下降。经JO2处理后,转染pU6-Rz93组胰岛细胞的Caspase-3活性和凋亡率明显降低,细胞增殖活性和抵抗CTL杀伤的能力显著增强。结论针对FasmRNA93位点的锤头状核酶能显著抑制小鼠胰岛细胞CD95的表达,使其免于CD95途径的凋亡;为提高胰岛移植物的存活率提供了实验基础。

CⅡTA锤头状核酶抑制Jukart细胞MHCⅡ类抗原的表达

目的 针对同种异体细胞移植的免疫反应主要是由主要组织相容性复合物Ⅱ (majorhistocompatibilitycomplex ,MHC Ⅱ ,人类中亦称HLA Ⅱ )类抗原介导 ,而MHCⅡ类分子转录激活因子 (MHCclassⅡtransactivator ,CⅡTA)对MHCⅡ分子的表达起严格且专一性的调控作用 ,拟通过抗CⅡTA锤头状核酶 (ribozyme,Rz)抑制细胞表面MHCⅡ分子的表达。 方法 设计并合成针对人类CⅡTA基因第 134、2 18、4 6 4位点的一组核酶 ,分别命名为Rz134、Rz2 18、Rz4 6 4。通过体外制备和活性鉴定 ,筛选出活性较高的核酶———Rz4 6 4。将Rz4 6 4克隆到含有核糖体内进入位点及增强型绿色荧光蛋白的表达载体 (internalribosomeentrysite enhancedgreenfluorescentprotein ,pIRES2 EGFP) ,简称为 pRz4 6 4 ,并稳定转染Jukart细胞株 (pRz4 6 4 J) ,流式细胞术检测经典的MHCⅡ (HLA DR、DP、DQ)抗原表达 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测CⅡTAmRNA水平。结果 pRz4 6 4 J与无关核酶组比较 ,HLA DR、DP、DQ抗原诱导型表达分别降低了 73 2 7%、88 93%、5 8 82 % ;同时CⅡTA的诱导性mRNA含量明显减少 (P <0 0 1)。结论 抗CⅡTA锤头状核酶可抑制CⅡ ATmRNA的表达 ,从而阻止其调控的相应基因———MHCⅡ分子的表达 ,为进一步探讨免疫?

淫羊藿苷对RA滑膜细胞凋亡及炎性因子表达的影响及机制研究

为探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对RA成纤维细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡及炎性因子表达的影响,并探讨其可能的作用机制,体外分离及培养人RA FLS,用MTT和克隆细胞形成试验分别检测ICA对RA FLS增殖活性及克隆形成能力的影响,ELISA检测FLS分泌炎性因子TNF-α、IL-6的水平,流式细胞术检测FLS的凋亡情况,Western blotting检测ICA对RA FLS中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、裂解的半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2基因(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)及磷脂酰肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白表达的影响。结果显示,LPS诱导FLS后,ICA对RA FLS的增殖率及细胞克隆形成能力均呈浓度依赖性抑制效应(P<0.05);ICA不同剂量组与LPS组相比,TNF-α、IL-6分泌水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),Cyclin D1、Bcl-2、磷酸化PI3K(phospho-PI3K, p-PI3K)、磷酸化AKT(phospho-AKT, p-AKT)表达明显降低(P<0.05),而Cleaved Caspase-3、Bax表达明显升高(P<0.05)。提示ICA可降低人RA FLS的增殖能力,诱导其凋亡,并可降低其炎性因子的表达,这可能与抑制PI3K/AKT信号通路活化有关。