缺氧诱导的外泌体活化自噬促进肝癌进展

目的探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法将Huh7细胞置于0.1%O_(2)培养箱培养24 h作为缺氧组,另设常氧组,提取外泌体,纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小,免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分为对照组(PBS)、常氧外泌体组(20μg/ml常氧外泌体)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体),实时无标记细胞分析仪(real-time cell analysis,RTCA)实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫印记检测细胞PCNA、cyclin D1、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3、p62的表达,激光共聚焦检测自噬流的改变。Huh7细胞分为对照组(PBS)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体)、缺氧外泌体+3-MA组(5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤+1 h后20μg/ml缺氧外泌体),检测细胞增殖、迁移和相关蛋白的表达。结果与常氧组相比,缺氧组外泌体浓度增加,但外泌体粒径的大小没有明显变化,缺氧组外泌体标记蛋白HSP70、Alix、CD63的表达增加(P<0.05)。与常氧外泌体组相比,缺氧外泌体组Huh7细胞增殖和迁移能力增强(均P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达上调,Bax、E-cadherin和p62的表达下调(均P<0.05),自噬流增强(P<0.05)。与缺氧外泌体组相比,缺氧外泌体+3-MA组Huh7细胞增殖、迁移和上皮间质转化作用减弱(P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达下调(P<0.05),Bax、E-cadherin和p62的表达上调(P<0.05)。结论缺氧诱导的外泌体可以参与细胞自噬的发生进而促进肝癌进展。

GPC3与PIVKA-Ⅱ联合诊断提升肝细胞癌诊断准确度

目的:探讨GPC3、PIVKA-Ⅱ、AFU和AFP联合诊断肝细胞癌的效能。方法:从湖北医药学院附属太和医院共收集176例血清标本,其中肝细胞癌患者95例,肝硬化患者49例,健康体检标本32例,采用ELISA法检测GPC3的表达,电化学发光法检测AFP与PIVKA-Ⅱ的表达,全自动生化分析仪检测AFU的表达,采用ROC曲线分析各标志物单独与联合诊断肝细胞癌的敏感度与特异度。结果:AFP、GPC3、PIVKA-Ⅱ和AFU在肝细胞癌患者中的水平均显著高于肝硬化组与健康对照组(P<0.05),ROC曲线下面积分别为0.767、0.817、0.872和0.708,GPC3联合PIVKA-Ⅱ的诊断准确度最高,其敏感度与特异度分别为87.4%、79.0%,四种标志物同时检测可将敏感度提高至95.8%,但特异度降为67.9%。结论:血清GPC3联合PIVKA-Ⅱ检测可以提高肝细胞癌的诊断准确度。

抗酸染色、Xpert MTB/RIF与T-SPOT.TB联合检测在结核病诊断中的应用价值

目的:探讨抗酸染色、Xpert MTB/RIF或T-SPOT.TB单独以及联合使用在结核病诊断中的临床应用价值。方法:回顾分析2017年1月至2019年12月在武汉市金银潭医院住院的19410例患者的抗酸染色、Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB的实验室检测结果,分析3种检测方法单独和(或)联合检测对结核病的诊断价值。结果:将研究对象分为3组,确诊结核病组1299例,临床诊断肺结核组8624例,健康对照组45例。确诊结核病患者在使用3种方式单独进行结核病检测时,抗酸染色的阳性检出率(62.4%)与Xpert MTB/RIF(86.7%)或T-SPOT.TB(98.0%)检测相比差异有统计学意义(χ^(2)=195.7和χ^(2)=57.4,均P<0.01)。抗酸染色、Xpert MTB/RIF以及二者联合检测的灵敏度分别为63.2%、86.7%和89.6%,二者联合检测的灵敏度与抗酸染色相比差异有统计学意义(χ^(2)=816.2,P<0.01)。抗酸染色、T-SPOT.TB以及二者联合检测的灵敏度分别为58.7%、98.0%和98.7%,二者联合检测灵敏度和特异度与抗酸染色相比差异有统计学意义(χ^(2)=141.7和χ^(2)=5.6,P<0.01和P=0.018)。对于抗酸染色阴性(涂阴)的结核病患者,Xpert MTB/RIF、T-SPOT.TB检测的灵敏度分别为71.6%和96.7%,两者灵敏度差异有统计学意义(χ^(2)=34.0,P<0.01)。结论:在结核病诊断中,Xpert MTB/RIF或T-SPOT.TB检测灵敏度明显高于抗酸染色。采用Xpert MTB/RIF或T-SPOT.TB联合抗酸染色均可显著提高结核病诊断的灵敏度,特别是对于涂阴结核病患者,联合T-SPOT.TB检测可显著提高检测效能。

氯硝柳胺逆转KBv200细胞对阿霉素耐药性的机制研究

目的:探讨氯硝柳胺对人口腔表皮癌多药耐药细胞株KBv200耐药的逆转作用及其机制。方法:采用MTT法评价氯硝柳胺对KBv200细胞药物敏感性的影响,流式细胞术检测氯硝柳胺对细胞内化疗药物阿霉素积累的影响,Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡情况,Western blot分析氯硝柳胺对多药耐药蛋白ABCB1表达的调控。结果:无毒剂量的氯硝柳胺(5μmol/L)增加KBv200细胞对阿霉素的敏感性,并显著提高阿霉素在细胞中的积累。此外,氯硝柳胺联合阿霉素可促进细胞凋亡。氯硝柳胺作用后,多药耐药蛋白ABCB1的表达水平下降。结论:氯硝柳胺对KBv200细胞的阿霉素耐药性有逆转作用,其机制与下调ABCB1蛋白表达有关。