病毒样颗粒及其疫苗研究

随着传统疫苗的升级换代,疫苗的研制越来越多的借助于基因工程手段,其中病毒样颗粒(VLPs)成为了当今病毒性疫苗研究的热点,尤其对于不易在体外大规模培养的病毒,VLPs是研发其疫苗的突破口。关于VLPs及其疫苗的研究,从球状病毒的组装理论、病毒的VLPs组装、VLP疫苗设计和VLP疫苗等几个方面予以综述。

Box-Behnken效应面法优化微波辅助提取都梁软胶囊中4种有效成分的工艺

目的:采用Box-Behnken效应面法优选都梁软胶囊中欧前胡素、异欧前胡素和藁本内酯的微波辅助提取工艺条件。方法:在单因素试验的基础上,采用四因素三水平Box-Behnken试验设计对都梁软胶囊中欧前胡素、异欧前胡素和藁本内酯的微波辅助提取工艺参数进行优选。以乙醇浓度、料液比、提取时间及微波功率为自变量,采用Hassan方法计算欧前胡素、异欧前胡素和藁本内酯的总评"归一值",建立总评归一值与自变量之间的数学关系,经效应面法预测最佳工艺条件。结果:最佳提取工艺为乙醇浓度59%、料液比44 ml·g^(-1)、提取时间8.2 min、微波功率600 W;欧前胡素、异欧前胡素及藁本内酯的含量预测值分别为2.132 0,1.241 0,1.840 0 mg·g^(-1)。结论:实测值与预测值接近,表明采用Box-Behnken效应面法优化后得到的微波辅助提取工艺参数可用于都梁软胶囊中欧前胡素、异欧前胡素和藁本内酯的提取。

流感病毒H7N9病毒样颗粒疫苗的研发

最近，中国出现了由禽源性流感病毒A（H7N9）引起的严重性传染病，为此全球付出努力，来实现候选疫苗的快速研发。目前，非流感病毒A（H7N9）H7亚型流感候选疫苗在面对新近出现的流感病毒A（H7N9）时，其免疫原性低，保护效果差。一种流感病毒A（H7N9）重组候选疫苗，是将A／Anhui／1／2013株的血凝素（HA）、神经氨酸苷酶（NA）和A／Indonesia／05／2005（H5N1）株的基质蛋白1（M1）克隆进杆状病毒载体，然后用该杆状病毒感染草地贪夜蛾（Sf9）昆虫细胞，再从该细胞分泌出由HA、NA和M1组成的病毒样颗粒（VLP），其与成熟的流感病毒颗粒相似。该疫苗从获得H7N9基因序列进行基因构建到流感病毒A（H7N9）VLP的分泌，共用了26d。将该疫苗分别在0d和14d接种Balb／c小鼠，用致死野生株进行攻击，以期评价其免疫原性和效力，对照组为非同源性的H7疫苗（A／chicken／Ja-lisco／CPA1／2012（H7N3）-VLP）、A／Indonesia／05／2005（H5N1）-VLP或安慰剂。所有的疫苗添加或不添加ISCOMATRIX佐剂。流感病毒A（H7N9）VLP疫苗诱导针对同源性流感病毒A（H7N9）的血凝抑制（HAI）抗体，滴度≥1∶64。该疫苗对异源的流感病毒A（H7N3）能产生交叉反应，抑制血红细胞凝集，同时与相应的ISCOMATRIX佐剂亚组相比，其血凝反应高出3～4倍。类似的，该疫苗的所有剂量诱导的抗NA抗体，与ISCOMATRIX佐剂亚组相比，其反应高出3～4倍。非同源性的H7疫苗能诱导H7N3和H7N9的HAI，但不能产生抗N9NA的抗体。用致死的野生株A／Anhui／1／2013（H7N9）攻击小鼠，接种A（H7N9）和A（H7N3）疫苗的小鼠存活率为100％，而接种A（H5N1）疫苗和安慰剂的小鼠，存活率为0％。总之，数据表明，重组H7N9疫苗研发迅速，免疫原性和效果良好，能够作为大规模流行性感冒H7N9的候选疫苗用于人体试验。

治疗性DNA疫苗VGX-3100的安全、效力和免疫原性:随机双盲安慰剂对照Ⅱb试验

尽管用于预防致癌性人乳头瘤病毒（HPVs）和宫颈上皮内瘤（CIN）的疫苗比较普遍,但目前的治疗手段都是手术摘除并能导致长期的生殖发病率。本文评估了靶向人乳头瘤病毒16型和18型E6和E7蛋白的合成性质粒VGX-3100疫苗,通过电穿孔传递是否可以引起妇女CIN2/3的组织病理学消退。

一种预防全球脊髓灰质炎新型疫苗接种程序的免疫原性:非盲随机对照试验

根除小儿麻痹症需要一种新型的免疫接种程序,即3或4剂由Ⅰ型和Ⅲ型组成的双价口服脊髓灰质炎病毒疫苗（bO PV）和1剂脊髓灰质炎病毒灭活疫苗（IPV）,但该程序目前没有可用的免疫原性数据,因此作者旨在评估这种疫苗接种程序的免疫原性。

蛋白能量营养不良能改变轮状病毒疫苗接种和轮状病毒感染的IgA应答,但不削弱疫苗效力

背景：在发展中国家,腹泻和营养不良仍是引起儿童死亡的主要原因,而营养不良会降低轮状病毒疫苗的效力的证据还是相互矛盾的。作者通过小鼠模型研究了轮状病毒疫苗接种（恒河猴轮状病毒,RRV）、轮状病毒感染（EDIM）和蛋白质能量失调（PEM）,从而证明了营养不良会降低疫苗免疫原性和效力的假设。

细胞源性天花冻干减毒活疫苗“LC16-KAKETSUKEN”:上市后符合良好药品临床试验规范的安全性和有效性的监测研究

在日本,天花疫苗LC16m8（LC16-KAKET-SUKEN）于2002年3月重新启动生产,决定仍作为国家储备用疫苗。将减毒牛痘病毒株LC16m8通过细胞培养,制备了天花冻干减毒活疫苗LC16-KAKETSUKEN,用于上市后的监测研究。此研究聚焦于初次接种者和再次接种者的对照比较,研究符合良好药品临床试验规范。对日本陆上自卫队268人（261名男性和7名女性）接种了LC16-KAKETSUKEN,此后对不良反应和有效性进行了评价。268名疫苗接种者中,下列的接种者发生了不良反应（无严重不良反应）：

表达RSV融合蛋白的重组Ad26和Ad35载体在棉鼠诱导抗RSV感染的保护性免疫

RSV（呼吸道合胞病毒）是儿童、老人和医学条件低下者下呼吸道感染的主要病原体。尽管沉重的疾病负担迫切需要RSV疫苗的出现,但到目前为止,仍没有RSV疫苗上市。作者基于编码RSV融合蛋白（F）基因的人低血清阳性率腺病毒血清型26和35（Ad26和Ad35）研发了一种RSV候选疫苗。

挪威用13价肺炎球菌结合疫苗代替7价疫苗预防侵袭性肺炎的效果

挪威自从2006年实施儿童接种7价肺炎球菌结合疫苗（PCV7）计划以来，有效地降低了针对该疫苗型别的侵袭性肺炎链球菌感染症（IPD）在各年龄段的发病，另外，非疫苗血清型（NVT）引起的IPD发病率（血清型替换）稍微增加。2011年，用PCV13代替PCV7接种后，IPD发病率的进一步降低可以期待。然而，6个额外血清型诱发的保护为肺炎链球菌提供了新的鼻咽定居和繁殖区，

用志贺菌Ⅲ型分泌蛋白皮内注射法研究细胞和抗原动力学及免疫应答

志贺杆菌是导致大量小儿腹泻，加重低收入国家疾病负担的主要病原菌之一。目前没有疫苗可用，而现有的候选疫苗只限于部分有效且存在血清型特异性。志贺菌Ⅲ型分泌系统蛋白IpaB和IpaD，由于在不同志贺菌中的保守性，成为研发具有广谱保护的亚单位疫苗的候选物。

表位基因工程学和免疫原性分子度量学:一种计算机辅助的VLP疫苗设计方法

疫苗研发的周期及成本问题，以及耐药株的出现，给抗病毒疫苗的研发带来了越来越多的挑战。一种利用计算机辅助进行疫苗设计的方法，极大的促进了免疫原性高、稳定性良好的疫苗的开发进程。本方法将外源病毒抗原设计在已构建好的病毒样颗粒（VLPs）上，并证明这种构建物具有和天然病毒相似的对抗体的结合亲和力，其中结合亲和力是评价免疫原性的一项分子指标。我们将乙肝病毒（HBV）的preSl表位采用基因工程技术置于人乳头瘤病毒病毒样颗粒（HPV-VLP）的EF环上，HBV相关的HzKRl27抗体对这种结构展示出结合亲和力，结果表明抗体与该颗粒的亲和强度和与天然HBV（PDBID：2EH8）的亲和强度相似。和其他免疫原性的分子指标一样，抗体亲和力评估是计算机辅助疫苗设计方法的关键组成部分。

常规接种卡介苗(BCG)引起免疫应答的非特异效应

BCG是世界范围内最常接种的疫苗之一,它除了对结核病（TB）有预防作用外,研究表明,接种BCG还具有许多额外、有益的非特异性免疫效应,包括在高死亡地区降低由非TB引起的婴儿和儿童的整体死亡率。接种BCG引起的抗体应答,为研究BCG影响非相关抗原引起的免疫应答提供了机会。本研究比较了常规接种对已接种BCG和没有接种BCG的婴儿的抗体应答水平的影响。

两株减毒志贺菌福氏2a型活疫苗株

志贺菌感染是全球炎性腹泻和痢疾的重要原因。基于减毒志贺菌的第一代VirG的弱毒活疫苗株已成功地进行了I、Ⅱ期临床试验，这是志贺菌疫苗开发的一个领先方法。senA、senB和msBb2中其他基因的缺失已应用到第二代VirG为基础的福氏2a志贺菌株，产生了WRSf2G12和WRSf2G15。两种菌株具有一种独特的基因缺失组合，用来提高志贺菌活疫苗的安全性。

表达A型H5N1血凝素的重组副流感病毒5能使小鼠抵抗高致病性禽流感病毒H5N1的攻击

安全有效的疫苗是阻止高致病性（HPAI）禽流感病毒H5N1在人群中大规模暴发的最好方法。目前FDA批准的H5N1疫苗有明显的局限性，因此，迫切需要更加有效的H5N1疫苗问世。副流感病毒5（PIV5）是一种副黏病毒，在人群中不引起任何疾病，因此是一种可行的疫苗载体。在我们的研究中，用单剂量的表达有来自-H5N1亚型病毒血凝素（HA）的重组活PIV5（rPIV5-H5）免疫小鼠，发现对致死剂量的HPAIH5N1攻击具有免疫作用。另外，我们试验了把H5N1HA插入到PIV5基因组中不同位置对PIV5制成的疫苗有效性的影响。有趣的是，当把H5N1的HA插在前导序列，即PIV5启动子和第一个病毒基因（其编码核蛋白NP）之间时，不能产生有活力的病毒。当把H5N1的HA插在NP和下一个基因V／磷蛋白（V／P）之间时，能引起病毒生长缺陷。当把H5N1的HA插在小疏水基因（SH）和血凝素-神经氨酸酶基因（HN）交界处时，其制成的疫苗对HPAIH5N1有最好的免疫力：在小鼠试验中，只要用1000PFU的剂量便已足够。本研究说明了表达有H5N1HA的重组PIV5有潜力成为HPAIH5N1的候选疫苗。

疫苗接种后免疫应答的性别差异

先前的研究表明,疫苗接种后的免疫应答随性别的不同而不同,但就IMVAMUNE（一种应对潜在天花生物恐怖的复制缺陷性天花疫苗）而言还没有进行探究。

除菌过滤在轮状病毒疫苗生产工艺中的初步应用

为了考察除菌过滤工序对三价轮状病毒疫苗质量属性的影响、评估在生产工艺中增加除菌过滤操作的可行性,分2个阶段进行了22批的半成品过滤试验。试验滤膜孔径为0.22μm,材质为聚偏二氟乙烯(PVDF),考察除菌过滤对试验产品病毒滴度及外观、pH值、渗透压和澄清度的影响,并对拟选定的滤膜材质进行细菌截留试验。结果显示,采用PVDF材质、孔径为0.22μm的除菌滤器进行三价轮状病毒疫苗半成品的除菌过滤,对试验产品的病毒滴度、外观、pH值和渗透压的影响不显著(P>0.05),但能显著提高试验产品的澄清度(P<0.05)。该研究为在三价轮状病毒疫苗半成品的配制工艺中增加除菌过滤工序积累了关键数据和经验。

口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)运输稳定性研究

目的 评价口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)的运输稳定性。方法 通过非温度因素研究及温度偏移研究考察疫苗的运输稳定性。以兰州市至广西壮族自治区公路运输路线来模拟疫苗运输过程的最差条件,进行一次往返运输,用以考察非温度因素条件下的疫苗稳定性。极端温度及温度循环等破坏性试验来模拟疫苗脱冷链后在极端条件下的情况,通过检测外观、pH、渗透压、装量、不溶性微粒、重金属、病毒滴度、异常毒性等项目来考察疫苗温度偏移稳定性。结果 9批次疫苗往返运输后外观均合格,内包材破损率均为0%,运输前后病毒滴度差异均无统计学意义(P>0.05),各质量指标均符合可接受标准。疫苗在(37±2)℃放置7 d病毒滴度平均下降1.1 lgCCID;/mL,与2~8℃及(-20±5)℃差异均有统计学意义(P均<0.05),(-20±5)℃放置7 d病毒滴度与2~8℃差异无统计学意义(P>0.05)。3次温度循环后,疫苗病毒滴度略有下降,不溶性微粒、重金属检测、异常毒性等质量指标均符合药典要求。结论 长距离公路运输后疫苗的安全性、有效性不受非温度因素影响,稳定性良好,且疫苗在特定温度偏移范围内及一定时间段内仍安全、有效。