N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶的功能与机制

N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(endo-beta-N-acetylglucosaminidase,ENGase)广泛分布于各种生物中,主要通过降解错误折叠的糖蛋白,参与细胞和生命的调控。ENGase也是糖链编辑的有效工具酶,可专一性水解游离寡糖链及糖肽或糖蛋白上核心五糖的N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)之间的β-14糖苷键。其水解产物是寡糖链和一个GlcNAc,或带有一个GlcNAc的糖肽或糖蛋白。本文对ENGase的发现、分布、蛋白质结构、酶学反应及生物学功能进行阐述,为ENGase的生物学研究提供思路,为糖生物学与糖组学的应用研究奠定基础。

糖蛋白过敏原N-糖链与过敏的相关性研究

糖蛋白是一种含有寡糖链的蛋白质,糖链与蛋白质之间以共价键相连。N-糖蛋白为常见过敏原之一,主要来源于食物、吸入物、昆虫毒素等,能够引起过敏反应。N-糖蛋白过敏原的N-糖链结构影响过敏原与IgE的结合,影响抗原提呈细胞(APC)对过敏原的识别和提呈。本文在介绍与过敏相关的N-糖蛋白、常见N-糖蛋白过敏原的N-糖链结构及与过敏相关的糖基化酶的基础上,进一步分析过敏原N-糖链影响过敏的机制,为临床预防与治疗过敏性疾病提供新的思路。

拉曼光谱技术的临床应用研究进展

印度物理学家Raman首次发现拉曼散射现象[1],即光照射物质,光子与物质分子发生能量交换,光子的运动方向及频率改变,发生拉曼散射,Raman据此制造了世界首台拉曼光谱仪。拉曼光谱(raman spectroscopy,RS)技术是基于拉曼散射现象,与其他技术整合,发展了受激拉曼、共振拉曼、显微共聚焦拉曼及表面增强拉曼等技术,在信号强度、灵敏度及特异度等性能提高,可满足临床医药领域需求。

血清1型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制

为研究血清1型鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer,RA)的灭活油乳剂疫苗,本研究将10株血清1型RA的临床分离株经腿部肌肉注射7日龄雏鸭进行动物体内复壮,结果表明所有被测菌株均具有较强的毒力,易感雏鸭致死率100%。对其中3株RA分离株CH3、WJ4和YL4的毒力测定结果表明其半数致死量(LD50)分别为2×108cfu、3.25×108cfu和2.37×106cfu。选取5株RA分离株分别制备灭活油乳剂疫苗,分别于5日龄和18日龄对樱桃谷鸭进行两次免疫后,免疫鸭能够产生高水平的RA特异性抗体,对2 LD50WJ4或CH3攻毒产生很好的保护效果,其中由CH3、CQ3和YXb12制备的灭活油乳剂疫苗对攻毒的保护率高达100%。

布鲁氏菌外膜蛋白D15的表达及生物学活性分析

为研究布鲁氏菌D15蛋白的生物学特性,本实验通过PCR技术扩增牛型布鲁氏菌外膜蛋白基因D15,并克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold-D15,原核表达了约为130 ku的His标记重组蛋白His-D15。Western blot结果显示:D15能够与布鲁氏菌阳性牛血清发生特异性反应;并且具有纤连蛋白溶酶原结合活性,但不具有纤连蛋白结合活性。本研究为进一步研究D15蛋白在牛型布鲁氏菌感染、检测及亚单位疫苗的研制等方面的作用奠定基础。

一株高产抗寄生虫环肽emodepside前体产生菌的鉴定及其次级代谢产物PF1022A的结构分析

目的抗寄生虫环肽emodepside前体产生菌的鉴定及其次级代谢产物PF1022A结构分析。方法本实验室通过紫外诱变得到一株高产抗寄生虫环肽emodepside前体的突变株,采用形态观察、生理生化特征鉴定、ITS基因序列对比及系统发育学分析等相结合方法来确定该菌株的分离学地位,以及对该菌株经深层发酵,经LC-MS、1HNMR和13CNMR、DEPT90和DEPT135、1H-1HCOSY、HMQC、HMBC分析测定来确定产生次级代谢产物X的分子结构。结果与结论鉴定突变株CBR72-MCB-01呈现出座坚壳属(Rosellinia)菌株的形态学特征;经鉴定代谢产物结构与文献报道的抗寄生虫环肽PF1022A结构一致。

牛型布氏杆菌苹果酸脱氢酶单克隆抗体的制备及鉴定

为制备牛型布氏杆菌(Brucella abortus)苹果酸脱氢酶(MDH)单克隆抗体,将牛型布氏杆菌A19菌株的MDH基因进行克隆和表达,表达产物被纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经亚克隆和间接ELISA筛选,最终获得3株分泌牛型布氏杆菌MDH蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别被命名为C2、D5和F4。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 600～1∶3 200,小鼠腹水效价为1∶12 800～1∶25 600;Western-blot检测结果表明,3株单克隆抗体均能与牛型布氏杆菌MDH重组蛋白发生特异性反应。结果表明,本研究成功制备了牛型布氏杆菌MDH蛋白单克隆抗体,为基于MDH的布氏杆菌检测方法的建立奠定了基础。

牛型布鲁氏菌铁离子转运蛋白基因的克隆及其表达蛋白的生物学特性

将通过PCR技术扩增的牛型布鲁氏菌铁离子转运蛋白(Brucellaferric uptake,BfuA)基因克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-BfuA,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,在IPTG诱导下表达出大小约为100ku的融合蛋白His-BfuA。Western-blot分析表明,His-BfuA能与布鲁氏菌阳性牛血清发生特异性反应,表明BfuA具有免疫原性。用His-BfuA作为包被抗原,对35份布鲁氏菌阳性牛血清进行ELISA检测,结果所有被检血清均为阳性反应,表明BfuA为潜在的可用于牛型布鲁氏菌诊断的靶蛋白。此外,对BfuA的亚定位结果表明,BfuA为膜蛋白;对His-BfuA的纤连蛋白结合活性及纤连蛋白溶酶原结合活性的试验结果表明,His-BfuA不具有上述2种活性。上述结果为牛型布鲁氏菌病诊断方法的建立及亚单位疫苗的研制奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒和胸膜肺炎放线杆菌混合感染的诊治

2009年12月23日，重庆某猪场饲养的猪发病，笔者对送检的病死猪进行实验室检验确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和胸膜肺炎放线杆菌混合感染，现将诊治情况报道如下。

基于糖谱的体外检测和诊断的临床应用研究进展

检测样本中游离及共价连接在糖肽上的寡糖链,构成糖谱。糖谱上寡糖链类型和丰度的变化可能与病理生理改变相关,具重要的诊断价值,并已应用于临床检测。综述糖谱在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、遗传性疾病中的变化,以及糖谱分析在体外诊断中的进展,为糖谱检测的临床应用提供方向。

PD-1/PD-L1抑制剂导致免疫相关不良事件文献计量分析

目的:通过文献计量学方法分析已上市的PD-1/PD-L1抑制剂导致免疫相关不良事件(immune-related adverse events,ir AEs)的现状。方法:检索截至2018年12月中国知网、万方医学数据库、PubMed,SCI,EmBase数据库收录的有关PD-1/PD-L1抑制剂所致免疫相关不良事件的文献,并对纳入文献的年代、文章类型、被引文频次、研究内容等进行分析。结果:共纳入文献1 421篇,中文65篇,外文1 356篇;包括病例报告334篇,临床试验295篇,综述358篇,论著347篇,Meta分析及系统评价79篇,临床指南8篇。文献量自2014年后呈迅速上升趋势,研究内容包括PD-1/PD-L1抑制剂所致ir AEs可能的发生机制,与传统化疗、靶向治疗以及免疫联合治疗相比发生ir AEs的风险等。结论:PD-1/PD-L1抑制剂所致ir AEs可累及全身多个器官,常见的ir AEs为皮肤反应、胃肠道反应、肝炎、肺炎、内分泌系统反应等,较罕见的ir AEs可涉及心肌病、肌炎、类风湿性关节炎、眼部炎症、胰腺炎等,其发生机制、发生风险及处理方式各不相同,应引起临床高度重视。

基于风险的C-QTc研究策略在药物心脏安全性评价中的应用

目的:探讨在早期药物心脏安全性评价中基于风险浓度-QTc(concentration-QTc,C-QTc)的研究策略。方法:参考ICH-E14全面QT研究(thorough QT study,TQT研究)指南和FDA'白皮书'指导原则,结合既往实际开展TQT研究及C-QTc研究经验,探讨应用C-QTc研究评估药物心脏安全性研究策略。结果:本文探讨了C-QTc研究代替TQT研究对候选药物进行心脏安全性评价的方法,并对C-QTc研究的适用范围、受试人群选择、样本量、剂量设计、组别设计、心电图数据采集、C-QTc模型建立及评价、结果判定及安全预案进行分析及阐述。结论:前期基于风险的充分设计考虑是成功开展以C-QTc模型评价新药心脏安全性的基础,对豁免开展TQT研究具有重要意义。