虎杖苷通过AMPK/Nrf2途径调控糖尿病大鼠伤口愈合和血管生成的机制研究

目的:基于AMPK/Nrf2途径探讨虎杖苷(PD)对糖尿病(DM)大鼠伤口愈合和血管生成的作用机制。方法:建立DM大鼠模型,将45只DM大鼠随机分为DM组、DM+PD组和DM+PD+ML385组(n=15),另取15只健康大鼠作为对照组,建立伤口愈合受损的模型,DM+PD组大鼠予PD灌胃(20mg/kg),DM+PD+ML385组大鼠在PD的基础上腹腔注射ML385抑制AMPK/Nrf2通路(30mg/kg)。比较各组大鼠伤口愈合情况,通过免疫组化染色检测分析微血管密度,Westernblot及RT-qPCR分析转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)以及AMPK/Nrf2通路转录和翻译水平。结果:四组小鼠的上述指标比较差异显著(P<0.05)。DM组的伤口愈合百分比、生成血管数目、TGF-β1和VEGF蛋白水平、AMPK和Nrf2 mRNA和蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。DM+PD组的伤口愈合百分比、生成血管数目、TGF-β1和VEGF蛋白水平、AMPK和Nrf2mRNA和蛋白表达水平显著高于DM组(P<0.05)。DM+PD+ML385组的伤口愈合百分比、生成血管数目、TGF-β1和VEGF蛋白水平、AMPK和Nrf2 mRNA和蛋白表达水平显著低于DM+PD组而显著高于DM组(P<0.05)。结论:PD可能通过调控AMPK/Nrf2通路诱导血管生成,进而促进DM模型大鼠的伤口愈合。

基于miR-128-3p/SIRT1/自噬探讨虎杖苷促进糖尿病溃疡模型大鼠创面愈合的机制

目的:探究虎杖苷调控微小RNA(microRNA,miR)-128-3p/SIRT/自噬促进糖尿病(DM)溃疡模型大鼠创面愈合的机制。方法:通过腹腔注射链脲佐菌素(70 mg/kg)建立DM模型。将30只DM大鼠随机分为模型组(n=15)、虎杖苷组(n=15)。另取15只健康大鼠作为对照组。3组均通过去皮建立DM伤口损伤模型。虎杖苷组大鼠灌胃虎杖苷(20 mg/kg)。比较各组大鼠伤口愈合情况、愈合周围组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和自噬标志蛋白表达水平。分析miR-128-3p和SIRT1的表达水平。通过双荧光素酶报告在内皮祖细胞中验证miR-128-3p与SIRT1的靶向关系。通过转染miR-128-3p mimic质粒过表达miR-128-3p。结果:第5天,模型组、虎杖苷组大鼠伤口愈合率低于对照组(P<0.05);第10天,虎杖苷组大鼠伤口愈合率高于模型组(P<0.05),低于对照组(P<0.05)。模型组大鼠创面组织中SOD、SIRT1 m RNA相对表达量、SIRT1蛋白相对表达量、LC3Ⅱ蛋白相对表达量、Beclin1蛋白相对表达量、LC3Ⅱ/Ⅰ均低于对照组(P<0.05),而MDA和miR-128-3p水平显著高于对照组(P<0.05)。虎杖苷组大鼠创面组织中SOD、SIRT1 m RNA相对表达量、SIRT1蛋白相对表达量、LC3Ⅱ蛋白相对表达量、Beclin1蛋白相对表达量、LC3Ⅱ/Ⅰ均高于模型组(P<0.05),而MDA、miR-128-3p均低于模型组(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示miR-128-3p可以与SIRT1靶向结合。转染miR-128-3p mimic后,内皮祖细胞中的miR-128-3p的水平显著升高,并且SIRT1 m RNA和SIRT1蛋白表达水平显著降低。结论:虎杖苷可能通过调控miR-128-3p/SIRT1通路诱导自噬,进而缓解高血糖引起的氧化应激损伤,促进DM模型大鼠的伤口愈合。

肿瘤标志物CEA、NSE、CA211和SCC在肺癌诊断中的临床意义

目的探讨血清肿瘤标志物(TMs)癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖原211(CA211)、鳞状细胞相关抗原(SCC)联合检测在肺癌诊断中的价值。方法应用化学发光免疫法检测103例肺癌组、30例肺部良性肿块组和50例正常对照组患者血清中CEA、NSE、CA211和SCC4种TMs的浓度。结果肺癌组与良性肿块组和健康对照组中的4种TMs含量比较均有统计学意义(P<0.05),良性肿块组与健康对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。CEA在肺腺癌中表达阳性率明显增高;SCC、CA211在肺鳞癌和腺癌中表达阳性率明显增高;NSE在小细胞肺癌中表达阳性率明显增高。CEA+CA211+NSE组合用于检测肺癌时的阳性率明显高于其他组合。结论血清CEA、NSE、CA211和SCC在肺癌诊断中具有重要意义,CEA+CA211+NSE组合联合检测诊断不同病理分型的肺癌阳性率最高。

脑血管病患者血清Hcy和IGF-Ⅱ测定的意义

目的:探讨脑血管病(CVD)患者血清同型半胱氨酸(Hcy)和胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)变化及其临床意义。方法:123例CVD患者(其中脑梗死69例,脑出血54例)和43例对照组血清分别用化学发光法测定其Hcy水平和放射免疫分析测定其IGF-Ⅱ水平,并进行统计分析。结果:脑血管病患者其Hcy和IGF-Ⅱ水平较对照组均有明显升高(P<0.01,P<0.01),脑梗死(CI)组与脑出血(CH)组比较Hcy和IGF-Ⅱ水平无明显差异(P>0.05)。结论:CVD患者血清Hcy和IGF-Ⅱ水平升高,可能两者共同参与了CVD的发生和发展。

血清高尔基体蛋白73检测在肝病患者中的意义

高尔基体蛋白73（GP73）是存在于高尔基体的一种跨膜蛋白，Kladney等于2000年首先描述了其在正常人体中的表达，GP73主要由胆管上皮细胞表达，后续研究提出病毒感染（HBV和HCV）及非病毒原因（酒精性肝病及自身免疫性肝病）引起的肝病患者中，GP73水平显著上调^[1][2]，随后研究又提出GP73可作为肝癌的的一个可靠标志物，并且国内也有较多用于肝细胞癌诊断的报道^[3-4]。本文通过对肝病患者及对照组血清GP73等指标的检测，意在探讨GP73在肝病患者中的应用价值。

DM2患者血清CA242、CA19-9水平与血糖类指标的相互关系

日常检测中发现,许多2型糖尿病（DM2）患者血清中存在较高水平的CA242和CA19-9,而这些患者并无存在其他引起两者水平升高的疾病.本文意在探讨影响CA242、CA19-9检测非特异性因素,并初步分析与血糖类相关指标的关系.

类固醇激素在干燥综合症中的作用

干燥综合症是一种自身免疫性疾病,特点是局灶性淋巴腺炎导致的黏膜干燥。该病的男女发病比例为1:9,女性更年期为发病高峰期。目前,其发病机制还不是很清楚,推测遗传、免疫、病毒感染以及激素水平等都是相关的因素。在本文中,我们探讨了类固醇激素在干燥综合症中的作用。

液相色谱-串联质谱法检测血清中15种甾体激素的动态变化

建立了用液相色谱-串联质谱检测血清中15种甾体激素的方法。在血清样品中加入含内标的乙腈沉淀蛋白质后,用100 mmol/L盐酸羟胺衍生,经Agilent-C18柱(50 mm×3.0 mm,2.7μm)分离,内标法定量。质谱分析采用电喷雾电离(ESI)正离子扫描,多反应监测(MRM)模式检测。数据显示,13种激素在0.05~20 ng/mL范围内线性关系良好(相关系数(R2)不小于0.995 6),检出限不大于1 ng/mL;皮质醇及脱氢表雄酮硫酸酯在50~2 000ng/mL范围内线性关系良好(R2不小于0.997 9),检出限不大于0.5 ng/mL。将该方法应用于女性月经周期激素变化规律的研究,结果表明,15种甾体激素在一个完整的月经周期内有不同特征的动态变化,其中雄激素在滤泡期的后期达到最高值,孕(雌)激素在黄体期达到最高值,而皮质激素则波动不明显。该方法灵敏度高、重复性好,为临床诊疗提供了参考。

亚甲基四氢叶酸还原酶基因C667T多态性与冠状动脉慢血流现象的关系研究

目的观察亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性与中国南方汉族人群中冠状动脉慢血流现象(CSFP)的关系,进一步探讨遗传因素在CSFP发病中的意义。方法收集经冠状动脉血管造影证实冠脉正常的患者214例作为研究对象,并利用校正的TIMI帧数法(CTFC)分组为慢血流组(143例)和对照组(71例),应用焦磷酸测序法(Pyrosequencing)检测患者C677T基因表型,分析MTHFR基因C677T多态性与CSFP的关系。结果慢血流组MTHFR基因(TT+TC)基因型和T等位基频率均明显高于对照组(69.2%、49.3%。x^2=8.05,P<0.01;4217%、296%,x^2=6.87,P<0.01)。慢血流组男性比例明显高于对照组(59.4%、36.6%,x^2=9.90,P<0.01),同型半胱氨酸(Hcy)和尿酸(UA)水平明显高于对照组(P<0.05或0.01),慢血流组叶酸(FA)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显低于对照组(P<0.05),Logistic回归分析均显示(TT+TC)基因型[OR=1.962,95%CI(1.049~3.669),P<0.05]、Hcy水平升高[OR=1.087,95%CI(1.012-1.168),P<0.05]、男性[OR=2.507,95%CI(1.347~4.664),P<0.01]和UA水平升高[OR=1.008,95%CI(1.003~1.013),P<0.01]患者CSFP发病风险增加。结论MTHFR基因C677T多态性与CSFP发病相关,携带下等位基因可能是中国南方汉族人群冠状动脉慢血流现象发病的危险因素之一。

危重烧伤患者血栓弹力图、凝血指标及血小板变化的临床意义

目的探讨危重烧伤患者血栓弹力图、凝血指标及血小板变化的临床意义。方法回顾性分析烧伤科收治的55例危重烧伤患者,于烧伤后3d内(渗出期)检测血栓弹力图(TEG)、凝血指标和血小板(PLT)水平,并选择34例健康体检者作为健康对照组。55例危重烧伤患者中29例于术前动态监测TEG、凝血指标和PLT变化。结果危重烧伤患者渗出期与健康对照组比较,R值、K值及PLT明显减少,α角、CI值明显增大,均有统计学差异(均P<0.05)。危重烧伤患者术前与渗出期比较,R值、MA值、Fb、PLT显著增高,TT显著缩短,均有统计学差异(均P<0.05)。R值与APTT呈正相关;K值与Fb、PLT呈负相关;α角与Fb、PLT呈正相关;MA值与TT呈负相关,与Fb、PLT呈正相关;CI值与APTT呈负相关,与Fb呈正相关(均P<0.05)。结论危重烧伤患者凝血功能常出现明显异常,TEG与凝血指标、PLT水平存在相关性,检测3者可起到互补作用。对于全面评估危重烧伤患者凝血功能,判断出血风险、指导输血有重要的意义。

血清GP73在常见恶性肿瘤中的表达水平

目的:评估血清高尔基体糖蛋白73(GP73)检测在常见恶性肿瘤患者临床诊断中的应用价值。方法:收集282例各类恶性肿瘤患者和30例正常对照组血清,利用酶联免疫分析和化学发光法分析分别对血清GP73和其它肿瘤标志物进行定量检测,分析不同恶性肿瘤患者血清GP73含量以及与其他肿瘤标志物的关系。结果:原发性肝癌、肺癌、胰腺癌及胆管癌中血清GP73明显高于正常对照组,有统计学意义(U分别为105.0、223.5、175.5和180.5,P<0.01);而其它恶性肿瘤患者血清GP73与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);GP73与其它肿瘤标志物进行相关分析,在原发性肝癌患者血清GP73与AFP呈弱相关(r=0.137);在肺癌患者血清GP73与CEA、NSE呈弱相关(r分别为0.129和0.071);在胰腺癌患者中,GP73与CA19-9的r为0.149,两者呈弱相关。结论:血清GP73在原发性肝癌、肺癌、胰腺癌及胆管癌中表达上调,可作为临床诊断的实验室标志物。

脐血中促红细胞生成素、促血小板生成素水平观察

目的 观察脐血中促红细胞生成素 (EPO)及促血小板生成素 (TPO)水平 ,并比较性别之间的差异。方法 用放射免疫法 (RIA法 )及酶标法 (EIA法 )分别测定脐血EPO、TPO水平 ,并与正常成人血清对照。结果EPO水平脐血[(25.22±17.42)mu/ml]高于对照[(7.68±3.89)mu/ml,P<0.01) ,脐血和对照男女性之间EPO水平均无差别 (均P>0.05)。TPO水平脐血[(208.60±114.99)pg/ml]与对照[(182.62±88.91)pg/ml]相近 (t=1.423,P>0.05) ,而对照女性高于男性 (t=4.896,P<0.001),脐血男女之间差别不明显 (t=0.605,P>0.05)。男性脐血与对照TPO水平有差别 (t=3.989,P<0.001) ,女性则无差别 (t=0.060,P>0.05)。结论 足月新生儿脐血中EPO水平高于成人外周血 ,而TPO水平与成人外周血相近。

加味小陷胸汤联合顺铂胸腔内化疗治疗恶性胸腔积液的疗效及对相关因子的影响

恶性胸腔积液(MPE)是指由肺癌或其他恶性肿瘤或原发性胸膜肿瘤引起的胸腔积液,是癌症晚期常见并发症。笔者采用加味小陷胸汤联合顺铂胸腔内化疗治疗MPE,观察临床疗效及治疗前后血清和胸水中血管内皮生长因子(VEGF)、血清癌胚抗原(CEA)、非小细胞肺癌相关抗原(Cyfra21-1)及糖类抗原15-3(CA15-3)等因子变化和患者生活质量改善情况。报告如下。

不同血细胞分析仪比对分析及偏差评估

目的评价同一实验室不同血细胞分析仪检测结果的可比性和临床可接受性。方法按照NCCLS EP9-A2的文件要求,每天选取8例新鲜全血标本,共测定5 d。以Coulter LH750血细胞分析仪为参比仪器,Sysmex XE-2100、Mindray BC-5800仪器为比对仪器,对白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)、血小板(PLT)5个主要参数进行比较,根据美国临床实验室改进修正法案(CLIA`88)标准的1/2进行判断。结果与Coulter LH750比较,其他两台血细胞分析仪检测结果均与其有良好的相关性(>0.975),相对偏差均<1/2CLIA`88的允许误差。结论 3台血细胞分析仪主要参数的相对偏差为临床可接受范围,测定结果具有可比性。

头孢哌酮钠舒巴坦钠致严重凝血功能障碍1例

头孢哌酮钠舒巴坦钠为第三代头孢菌素头孢哌酮和舒巴坦的复合制剂,抗菌作用强,毒性低,广泛用于呼吸道、腹腔、泌尿道等中重度感染的治疗,但引起凝血功能异常或出血的报道也逐渐增多[1]。笔者遇到应用头孢哌酮钠舒巴坦钠致严重凝血功能障碍1例,报道如下:1病历摘要患者女,69岁,因“胸闷、气急伴头晕2天”于2017年3月20日收住我院重症医学科。患者患高血压二十余年,2型糖尿病十余年,平时血压控制不详,血糖控制差,2天前晚饭后呕吐出大量胃内容物,伴胸闷、气急,不能平卧,后出现头晕,胸闷、气急情况加重。

ITGB5对肝细胞癌侵袭力的影响及其机制研究

目的通过体外实验探讨ITGB5在调控HCC细胞侵袭力中的作用及其相关机制。方法收集35例HCC患者的癌与癌旁组织,采用PCR技术检测ITGB5的表达量,比较ITGB5在肿瘤组织和正常组织的表达差异。使用脂质体转染技术将小干扰RNA转入Huh7与Hep3B两种HCC细胞系细胞,通过CCK8以及Transwell实验观察ITGB5敲除对HCC细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。使用PCR、Western Blot方法对侵袭相关分子以及上皮-间质转化(EMT)相关标志物进行表达量的检测,并且对调控EMT的关键转录因子进行筛选,寻找受ITGB5调控的关键转录因子。结果肿瘤组织的ITGB5表达量显著高于正常组织(<0.05)。ITGB5敲除之后,在全部两个细胞系中都观察到24 h之后细胞的增殖速度显著下降(均<0.05);肿瘤细胞的迁移与侵袭能力在ITGB5敲除后明显下降(<0.05);ITGB5敲除后,肿瘤细胞表现出更加显著的上皮样分子表型E-Cad,CLDN蛋白表达量显著升高;VIM,N-Cad,FN蛋白表达量显著下降(<0.05);转录因子Twist蛋白的表达量在ITGB5敲除后发生显著下调(<0.05)。结论 ITGB5敲除可以明显抑制HCC细胞的增殖与侵袭能力,其可能机制与其对Twist蛋白的调控有关,更加系统、深入地研究对于HCC的治疗具有深远意义。