染色体微阵列分析技术在产前致病性拷贝数变异诊断中的应用

目的:探讨染色体微阵列分析(CMA)技术在产前致病性拷贝数变异(CNV)诊断中的应用价值。方法:收集2017年3月至2020年4月在重庆市妇幼保健院行羊膜腔穿刺术且要求行CMA检测的单胎妊娠孕妇共4430例。根据羊水穿刺的临床指征分为6组:A组:单一高龄组;B组:单一唐氏筛查高风险组;C组:单一超声检查异常组;D组:单一无创产前检测(NIPT)高风险组;E组:超声检查异常合并高龄/唐氏筛查高风险/NIPT高风险两个或两个以上指征,F组:NIPT高风险合并高龄/唐氏筛查高风险/超声异常两个或两个以上指征;G组:其他组。结果:(1)4430例中CMA检测胎儿异常率11.74%,其中非整倍体异常119例(2.69%),CNVs 381例(8.60%),包含致病性拷贝数变异(pCNVs)77例。(2)不同临床指征的羊水CMA检测结果提示,单一临床指征中D组染色体异常总检出率(33.20%),CNVs检出率(19.31%),非整倍体率(10.89%),包括性染色体非整倍体率(6.93%)均显著高于其他各组(P<0.05)。C组的总检出率仅次于D组。E、F组总检出率(19.76%,55.00%),包括非整倍体率(11.01%,42.50%)均显著高于C、D组(P<0.05)。(3)77例pCNVs中,31例为染色体大片段缺失和(或)重复,其中8例遗传自平衡易位的父母。46例染色体微缺失/微重复综合征,包括23例染色体微缺失/微重复性pCNVs和23例神经发育障碍的易感性CNVs。结论:CMA检测是产前遗传学诊断的有效方法之一。NIPT和超声检查是筛查羊水染色体异常的有效手段,针对不同种类的胎儿pCNVs,应合理建议核型分析或家系CMA验证的方法确定pCNVs来源和致病性,再结合超声检查、胎儿CMA结果以及双亲表型,为妊娠提供合理的指导意见,并对出生后的胎儿定期做随访,为产前胎儿评估积累更多的经验。

以支架为载体的TRADD基因慢病毒转染对食管良性狭窄的抑制作用

目的观察TRADD基因慢病毒涂层食管支架置入后,TRADD基因对犬食管良性狭窄黏膜的转染效果及对食管狭窄的抑制作用。方法采用随机数字表法,将15只实验犬随机平均分为实验组、对照组及空白组,采用氩离子凝固器制作良性食管狭窄模型,分别置入GFP-TRADD基因慢病毒涂层带膜食管支架、GFP-慢病毒涂层食管支架、普通带膜食管支架,1周后观察支架脱落情况,并取出支架,2、3、4周胃镜下观察狭窄程度。4周后处死实验犬,对狭窄食管组织行病理、Masson三色染色法、免疫荧光检查,分别采用Western blot检测TRADD蛋白在3组食管组织中的表达,同时检测collagenⅠ、collagenⅢ、α-SMA 3种蛋白在食管组织中表达情况。结果置入食管支架1周后,胃镜检查见实验组实验犬带膜支架全部移位进入胃,对照组和空白组实验犬分别有2、3只实验犬其带膜支架移位进入胃中,胃镜取出所有实验犬未移位食管支架。此后每周测量其食管狭窄处直径,可见对照组及空白组实验犬再次出现食管明显狭窄,而实验组再狭窄较轻。采用重复测量设计的多因素方差分析具有统计学差异(P<0.01)。食管狭窄组织HE染色结果表明空白组及对照组肉芽组织及纤维组织增生,而实验组肉芽组织及纤维组织增生较不明显。Masson染色结果表明实验组胶原纤维较空白组、对照组明显减少(P<0.05)。免疫荧光镜检查可见绿色荧光蛋白在黏膜下组织,表明TRADD基因慢病毒及慢病毒均在食管黏膜下生长。Western blot检测实验组可检测GFP-Tradd-Flag蛋白,而空白组和对照组未检测出该蛋白。Western blot检测显示实验组collagenⅠ、collagenⅢ、α-SMA 3种蛋白较其他两组明显降低(P<0.05)。结论以支架作为载体可成功将TRADD慢病毒转入食管黏膜组织中,可抑制狭窄部位组织增生,减少食管狭窄部位再狭窄发生。

Y染色体AZFa区部分缺失1例并文献复习

全球约有15%的育龄夫妇不孕不育,其中男性因素约占50%,由遗传缺陷导致的男性不育约为30%。研究表明,Y染色体的Yq11区存在与精子发生密切相关的基因家族,被命名为无精子因子(azoospermia factor,AZF),该区域可分为3个亚区,即AZFa、AZFb、AZFc。Y染色体微缺失是引起男性不育症的重要遗传因素之一,本实验室在临床中发现1例Y染色体AZFa区sY86位点单独缺失的罕见病例,现对其进行报告如下。

体外受精-胚胎移植后早期自然流产胎儿中的染色体异常

目的探讨单核苷酸多态性微阵列(single nucleotide polymorphism-array, SNP-array)技术在体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)治疗后早期自然流产绒毛组织遗传学分析中的应用价值。方法IVF-ET治疗后早期自然流产的96例患者,清宫术后提取绒毛组织DNA进行SNP-array检测,分析绒毛染色体异常的相关因素。结果(1)IVF-ET治疗后早期自然流产患者绒毛中63.54%为染色体异常,其中非整倍体异常占78.69%;(2)高龄、原发性不孕以及双亲染色体异常是绒毛染色体异常的高风险因素;(3)绒毛染色体异常患者再次IVF-ET治疗后,仍存在妊娠结局不良倾向,包括妊娠率下降、流产率增高、活产率降低。结论IVF-ET治疗后早期自然流产的患者宜行绒毛SNP-array检测,有助于分析自然流产原因,指导再次助孕方式的选择,改善助孕结局。

体外受精后单绒毛膜双合子双胎四例临床分析

双胎妊娠的绒毛膜性和合子性决定了不尽相同的围产期结局，但是双胎妊娠的绒毛膜性及合子性却是个易混淆的问题。目前，临床上常通过早孕期超声检查提示的绒毛膜性来帮助判断合子性质。一般认为，所有双合子双胎均为双绒毛膜，而单合子双胎根据胚芽分裂时间的不同，分为单绒毛膜双胎（约占66％）和双绒毛膜双胎（约占33％）。换言之，单绒毛膜双胎可以视为单卵双胎，双绒毛膜双胎不能肯定是单合子还是双合子。

体外受精后单绒毛膜双合子双胎活产一例

本文报告了 1例经体外受精后B超确诊为单绒毛膜双胎妊娠的病例。该孕妇中孕期随机抽取一胎羊水行荧光原位杂交技术和染色体核型分析检测,未见异常。双胎生后2d和3岁时分别行外周血染色体核型分析检测,提示双胎外周血染色体核型均为21-三体男性和正常女性2种染色体核型嵌合异常(chi 47,XY,+21/46,XX)。3岁时刮取双胎口腔黏膜细胞行单核苷酸多态性基因芯片检测,结果提示男童核型为47,XY,+21,女童为46,XX。以上结果提示该双胎为单绒毛膜双合子双胎,双胎外周血染色体核型均嵌合异常,无组织体细胞染色体核型嵌合异常。男童呈现唐氏综合征患儿特殊面容,女童未见明显异常。

西南地区男性不育患者染色体异常的分析研究

目的研究西南地区男性不育患者的染色体异常的发生率和类型,为临床诊断和治疗提供依据。方法回顾性分析2017年8月至2020年11月来我院就诊的男性不育患者3657例,根据患者精液检查结果分为无精子症组1488例、严重少精子症组724例、少精子症组452例和正常对照组993例,所有患者同时进行染色体核型分析和Y染色体微缺失检测。结果在2664例精子数异常的患者中共检出染色体核型异常242例(9.08%),其中性染色体异常189例(7.10%),常染色体异常53例(1.99%);检出染色体多态性核型131例(4.92%);检出率最高的类型为47,XXY,共145例(5.44%)。精子数异常患者性染色体异常检出率和对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),而常染色体异常、染色体多态性检出率和对照组比较无统计学差异(P>0.05)。在2664例精子数异常的患者中检出Y染色体微缺失177例(6.64%),正常对照组未检出;检出率最高的类型为AZFc,其次为AZFbc。在177例Y染色体微缺失的患者中共检测到32例(18.08%)合并染色体核型异常或多态性,均涉及性染色体。结论对男性不育症患者进行常规染色体核型分析和Y染色体微缺失检查,对疾病的诊断和治疗方案的选择是非常有必要的。