CKIp15^(INK4B)高表达对人黑色素瘤细胞cyclinD1和c-myc表达的影响及生长特性的改变

通过 DNA体外重组和转染技术 ,将已构建好的含有 p1 5基因的质粒 p XJ- 41 - p1 5转染 p1 5缺失的人黑色素瘤细胞 A 375,经 G 41 8筛选出阳性单克隆 ,并经 PCR、Western等检测 ,证明建立了 p1 5稳定高表达的细胞模型 .生长曲线和 FCM实验表明 ,与对照组细胞相比 ,实验组细胞增殖能力减弱 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 .同时 ,细胞血清依赖性有所恢复 ,在软琼脂的集落形成能力下降 ,显示出细胞部分恶性表型逆转 .进一步免疫印迹实验表明 ,癌基因 c- myc的蛋白表达水平明显下降 .Cyclin D1的表达受到抑制 ,而 CDK4的表达则基本不变 .以上结果显示出 ,p1 5基因高表达能够抑制人黑色素瘤细胞的增殖及部分恶性表型 ,负调细胞周期进程 ,而 c- Myc蛋白和 G1期引擎分子 Cyclin D1表达的被抑制可能是 p1

佛波酯对CKI p15^(INK4B)高表达的人黑色素瘤细胞生长及凋亡的影响

通过DNA体外重组和转染技术 ,将已构建好的含有p15基因全长的质粒 pXJ 41 p15转染p15缺失的人黑色素瘤细胞A375 ,经G418筛选出阳性单克隆 ,并经PCR、蛋白质印迹等检测 ,证明建立了 p15稳定高表达的细胞模型 .实验表明 ,经佛波酯 (PMA)长期处理 ,实验组细胞中的 p15表达水平进一步上升 ,同时观察到蛋白激酶C (PKC)活性下降 ,与对照组细胞相比 p15高表达的细胞PKC活性及细胞生长均受到较强烈的抑制 ,并能引起约 30 %的实验组细胞发生凋亡 .凋亡细胞中Caspase3P2 0亚基的水平上升 .结果表明 ,CKIp15与PKC信号系统在调节细胞增殖、凋亡的过程中具有一定的相关性 ,它们的协同作用可能启动了细胞中与Caspase相关的凋亡通路 ,使细胞发生凋亡 .

P15^(INK4b)对人黑色素瘤细胞周期及G_1期相关调控基因的影响

人黑色素瘤细胞A375是P15^(INK4b)缺失细胞系,通过细胞转染技术将外源P15^(INK4b)cDNA转染A375细胞,经PCR和Western blot检测,证明构建了P15^(INK4b)稳定表达细胞模型MLIK6。流式细胞光度术结果显示,与对照组MLC2相比,MLIK6细胞G_1期升高11％,S期下降14％。利用TdR-N_2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期细胞比例分别达到89.1％和76.8％,而G_1期的比例分别为74.3％和76.4％。~3H-TdR掺入的结果显示,MLIK6从G_1期进入S期的时间比MLC2延长2 h,并且掺入强度明显减弱。进一步探讨P15^(INK4b)对G_1/S相关调控基因的影响,发现G_1期的MLIK6细胞在诱导P27表达升高的同时,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑制在晚G_1期附近最显著,而对cyclinE的抑制则在G_1/S转换处表现突出,癌基因c-myc表达受到明显抑制并贯穿于G_1→S全部时间进程中。说明P15^(INK4b)是通过对G_1期不同阶段细胞周期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑制及增加CKI P27延缓了G_1/S进程。

钙调素拮抗剂对HeLa细胞S期进程的影响

目的 探讨钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）对ＨｅＬａ细胞Ｓ期进程的影响及其分子机理。 方法 通过ＴｄＲ双阻断法获得同步化的Ｓ期ＨｅＬａ细胞，以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和Ｗｅｓｔｅｒｎ 技术分别观察了ＴＦＰ对ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程和胸苷激酶（ｔｈｙｍ ｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ，ＴＫ）活性及细胞周期引擎分子ＣｙｃｌｉｎＡ、Ｃｄｋ２ 和细胞周期调节蛋白ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ＰＣＮＡ、ｐ２１ 蛋白表达水平的影响。 结果 ＴＦＰ（２０μｍ ｏｌ／Ｌ）能使３ Ｈ－ＴｄＲ的掺入峰值后移，并抑制了Ｃｙ－ｃｌｉｎＡ、ＰＣＮＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ的表达和提高了ｐ２１ 蛋白的水平，但对Ｃｄｋ２的表达几乎无影响。 结论 ＣａＭ 除了能通过影响ＰＣＮＡ的水平直接作用于ＤＮＡ 合成，同时又可通过作用于ＣｙｃｌｉｎＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ｐ２１ 等周期引擎分子和调控因子水平正调ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程。

蛋白激酶A抑制剂对HeLa细胞S期进程的影响

以同步化的HeLa细胞为实验材料 ,研究了蛋白激酶A (PKA)抑制剂对HeLa细胞S期进程的影响及其作用的分子机理 .通过TdR双阻断法 ,获得了同步化的S期细胞 ,3H TdR掺入实验表明PKA抑制剂typeⅢ(80mg/L)明显提高了S期3H TdR的掺入水平 ,提示了PKA在S期进程中起阻抑作用 .进一步实验表明 ,在PKA抑制剂typeⅢ作用下胸苷激酶 (TK)活性和PCNA蛋白水平均有所提高 ,同时明显促进了CyclinA蛋白的表达 ,并抑制了周期负调因子 p2 1蛋白的水平 ,但对CDK2表达几乎无影响 .结果表明 ,PKA可通过作用于PCNA和引擎分子CyclinA的水平和通过影响 p2 1的表达负调于S期进程 .这可能是PKA负调HeLa细胞S期进程的分子机理之一 .

新抑癌基因p1^(5MTS2/INK4B)的研究进展

近年来发现 ,细胞中抑制肿瘤发生、发展的机制除了有Rb ,p5 3等抑癌基因发挥作用外 ,一类CKI分子 (cyclin dependentkinaseinhibitor,细胞周期引擎分子的抑制剂 )也具有非常重要的作用 .在已知的CKIp2 1和p1 6两大家族中 ,p1 5是与p1 6同源性很高的一个CKI分子 ,大量肿瘤以及多种癌细胞系中的调查表明 ,p1 5基因的异常表达 (如缺失、突变和重排等 )在许多肿瘤及癌细胞系中存在 ,并与其中一些肿瘤的发展密切相关 ,这为确定p1 5作为一个新的抑癌基因提供了证据 .在此基础上 ,进一步对p1 5在细胞周期中调控细胞增殖和分化机理的研究发现 :p1 5能抑制一些肿瘤细胞的增殖 ,并可作为细胞生长抑制因子TGF β发挥作用的中介者 ,另外在某些类型细胞的分化过程中 ,p1 5水平的上升与细胞分化表型的出现具有相关性 .这些关于p1 5的研究进展为进一步阐明细胞周期调控及细胞癌变的分子机制提供了线索 ,并可能为p1

艾滋病治疗的研究进展

艾滋病治疗的研究进展童迎凯（北京师范大学生物学系四年级ｌ００８７５）艾滋病（ａｃｑｕｉｒｅｄｉｍｍｕｎｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｖｓｒｎｄｒｏｍｅ，ＡＩＤＳ）由于其危害性大，死亡率高，且又具有传染性，因此引起了全世界医学界的高度重视。近年来亚洲地区的感染人...