广东地区犬瘟热病毒分子流行病学调查

为了解犬瘟热病毒(CDV)在广东地区的分子流行情况及遗传变异规律,本研究从广东省多地采集疑似感染犬瘟热病毒的患病犬的血液、体内组织样品100份,经RT-PCR法检测,共检出90份阳性病料。随机选取10份阳性病料进行CDV H基因扩增,序列分析表明该地区内H基因的同源性为96.6%～99.8%,与参考毒株的H基因同源性为89.9%～97.9%。遗传进化分析发现所检测样品大部分属于亚洲I型毒株,使用软件预测H蛋白的糖基化位点数,发现所有被检测野毒株的糖基化位点数为9个,而疫苗株的为4个或7个。本研究明确广东地区犬瘟热病毒H蛋白基因的变异趋势,为疫苗的选择或开发奠定了基础,为广东地区犬瘟热的防控提供了参考。

猪圆环病毒2型ORF1和ORF3T淋巴细胞抗原表位的克隆与原核表达

根据Stevenson筛选出来的3个具有活性的T淋巴细胞抗原表位(T lymphocyte epitope,TCE)合成tce基因(180 bp),成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pMD-TCE.将tce酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒,命名为pET-TCE.用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示合成基因在pET-32a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白相对分子质量约为25 000,Western-blot分析结果表明,获得的融合蛋白可与猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性.

犬瘟热病毒N、F蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

为了制备犬瘟热病毒N蛋白、F蛋白的多克隆抗体,试验将犬瘟热病毒N基因、F基因的PCR扩增产物与原核表达载体pET-32a(+)连接,转化大肠杆菌Rostte(DE3),经IPTG诱导蛋白表达,将表达的蛋白纯化,免疫SPF级KM小鼠制备抗体,通过间接ELISA法测定抗体效价,Western-blot检测其反应原性。结果表明:犬瘟热病毒N蛋白、F蛋白在大肠杆菌中高效表达,制备的抗体效价高达1×105,且能特异性识别犬瘟热病毒的N蛋白、F蛋白。

新时代 新海关 心所向 梦可期

2020年注定是平凡但不平静的一年。新春伊始,"抗疫"成为了全中国人民开年的头等大事,各行各业都在为此拼搏。有奔赴抗疫一线的医护人员,有"火神山"的建筑工人,还有街道居委会的志愿者,大家都在平凡的岗位上发挥着光和热。而在国门一线也有一群守护者,他们在空港、海港、陆路口岸守护国门安全,他的名字叫"海关"。