蛋白激酶C在血管紧张素Ⅱ抑制心肌细胞一氧化氮合成中的作用

实验用硝酸还原酶法测定培养新生大鼠心肌细胞亚硝酸盐 (NO 2 )和硝酸盐 (NO 3)总量 (NO 2 /NO 3) ,反映心肌细胞一氧化氮 (NO)生成情况 ,观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对心肌细胞NO生成的影响及其蛋白激酶C (PKC)在该效应中的作用。结果显示 :AngⅡ可减少心肌细胞NO的含量 ,并具有明显的剂量 效应关系 ;AngⅡ受体拮抗剂saralasin可明显抑制AngⅡ对NO生成的影响 ;L 精氨酸 (L Arg)明显增加心肌细胞NO的浓度 ,此效应可被一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L NAME所抑制 ,L Arg未能消除AngⅡ抑制NO的作用 ;用佛波酯 (PMA)处理心肌细胞 ,其NO的生成明显减少 ,L NAME可加强此抑制效应 ;PKC抑制剂staurosporine (Stau)可明显削弱AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的效应。结果提示 :AngⅡ具有抑制心肌细胞NO生成的作用 ,此作用可能是通过抑制心肌细胞NOS的活性而实现的 ;AngⅡ受体介导AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的作用 ;激活PKC可使新生大鼠心肌细胞NO生成减少 ,NOS参与此抑制效应 ,新生大鼠心肌细胞NO生成过程的信号转导通路可能与PKC有关 ;PKC参与AngⅡ抑制心肌细胞NO的生成。

一氧化氮在血管紧张素Ⅱ激活蛋白激酶C中的作用

实验在培养新生大鼠心肌细胞中检测NO前体L 精氨酸 (L Arg)和NO供体硝普钠 (SNP)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )激活蛋白激酶C (PKC)的作用 ,以探讨心肌细胞PKC水平的信号转导途径。实验结果如下 :(1)无血清DMEM培养心肌细胞 2 4h后加入AngⅡ ,PKC活性呈剂量依赖性增高 ;(2 )培养基中加入L Arg ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;(3 )用L Arg 10 0 μmol/L进行预处理 ,3 0min后分别加入AngⅡ 0 1μmol/L或PMA 10μmol/L ,PKC活性均明显降低 ,与单纯AngⅡ组和单纯PMA组相比均有显著性差异 ;用NOS抑制剂L NAME预处理后 ,再加入L Arg ,可明显阻断L Arg对上述两个效应的影响 ;(4)培养液中加入NO供体SNP ,PKC活性呈剂量依赖性地降低 ;(5 )用SNP 10 μmol/L预处理心肌细胞 ,5min后分别加入AngⅡ或PMA ,PKC活性分别与单纯AngⅡ和单纯PMA组相比均明显降低。以上结果表明 ,AngⅡ能剂量依赖性激活PKC ,而NO可剂量依赖性抑制PKC活性 ;NOS参与L Arg抑制AngⅡ或PMA激活PKC的作用。这些观察提示 ,NO抑制AngⅡ对心肌细胞的作用可能是通过抑制PKC活性实现的 ,PKC可能是NO和AngⅡ在心肌细胞内信号转导的交汇点 (crosstalk)。

P物质在家兔延髓腹侧面加压区的升压作用及其机制探讨

在乌拉坦麻醉、三碘季铵酚制动、人工呼吸的家兔上观察到，延髓腹侧面加压区（VSMP）给予P物质（SP）使血压（BP）呈剂量依赖性升高，但对心率无明显影响。VSMP给予SP受体阻断剂使BP明显降低并可阻断SP升压效应。VSMP给予酚妥拉明或哌唑嗪预处理使SP升压效应减弱或消失，而给予育亨宾或心得安对SP升压效应无明显影响。VSMP给予SP可使肾交感神经放电（RSND）显著增加，并伴有BP显著升高；VSMp给予DSP使RSND和BP明显降低并可阻断SP的RSND增加和升压效应。结果表明：SP在VSMP具有升压作用，这是由于激活VSMp的SP受体所致，并有该局部α1受体参与介导。此升压效应主要是通过交感神经活动增强使外周血管阻力增加而实现的。VSMp的内源性SP有参与维持交感缩血管紧张性和BP水平的作用。

MAPK信号通路介导CT-1促进大鼠心肌细胞存活

目的探讨心脏营养素-1（CT-1）对培养乳鼠心肌细胞存活的促进作用以及丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号传导途径在CT-1促进心肌细胞存活中的作用。方法差速贴壁纯化培养新生大鼠心肌细胞，MTT比色法测定各孔细胞存活率。结果无血清DMEM培养心肌细胞24h后，加入4个剂量组CT-1（10^-10～10^-7mol／L），呈明显剂量依赖性增加MTT计数；培养基中加入CT-1（10^-8mol／L），1、2、3和4dMTT计数呈明显的时间依赖性增加；预先用MAPK抑制剂PD098059（5×10^-5mol／L），再加入CT-1，心肌细胞存活率明显低于单纯CT-1组，而单纯用PD098059则无明显影响；预先用PKC激动剂PMA（10^-5mol／L），再加入CT-1，MTT计数明显增加；先用PD098059，再加入PMA和CT-1，MTT计数明显降低，而先用PKC抑制剂Calphostin C（Cal）再加CT-1，MTT计数也明显降低。结论CT-1增加心肌细胞存活率的效应是由MAPK信号分子介导实现的；该效应的胞内信号传导通路可能是先激活PKC信号分子，然后再激活MAPK信号分子。

心脏营养素1对培养的心肌细胞心房钠尿肽mRNA表达的影响及机制

目的观察心脏营养素1在诱导培养心肌细胞心房钠尿肽基因表达中的作用及其机制,以进一步明确心脏营养素1诱导心肌肥大的作用。方法差速贴壁纯化培养新生大鼠心肌细胞,利用逆转录聚合酶链反应技术检测心房钠尿肽mRNA表达量。结果(1)在培养的心肌细胞中分别加入10-91、0-8和10-7mol/L心脏营养素1,72h后心房钠尿肽mRNA相对表达量分别为1.18±0.14、1.58±0.20和2.03±0.30,其中10-8和10-7mol/L心脏营养素1与对照组(1.08±0.15)相比有显著性差异,呈剂量依赖性。(2)用10-8mol/L心脏营养素1刺激心肌细胞,24h7、2 h和120 h后心房钠尿肽mRNA相对表达量分别为1.16±0.18、1.47±0.17和1.97±0.24,与同时间段对照组相比,72 h和120 h组有显著性差异,呈明显的时间依赖性。培养120 h与培养72 h相比,差异也有显著性统计学意义(P<0.05)。(3)在心肌细胞培养基中分别加入细胞外信号调节激酶1/2选择性抑制剂PD098059(50μmol/L)和蛋白激酶C抑制剂Calphostin C(10μmol/L),30 min后再加入10-8mol/L心脏营养素1,前者的心房钠尿肽mRNA相对表达量为1.94±0.15,与对照组(1.04±0.17)相比有极显著性差异(P<0.01),与单纯心脏营养素1组相比也有显著性差异;后者的心房钠尿肽mRNA相对表达量为1.27±0.17,与对照组(1.04±0.17)相比无显著性差异。结论心脏营养素1呈剂量和时间依赖性增加心房钠尿肽mRNA表达的作用,此作用是通过丝裂原激活蛋白激酶信号通路介导而实现的,蛋白激酶C可能不直接参与介导心脏营养素1诱导心肌细胞心房钠尿肽mRNA的表达。

Losatan压抑大鼠压力超负荷高血压和心肌肥大的实验研究

利用腹主动脉缩窄性高血压大鼠模型 ,以平均动脉压 (MAP)和左心室重 /体重比值(LVW /BW )作为指标 ,观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )受体拮抗剂芦沙坦 (Losatan ,Los)在压力超负荷高血压和心肌肥大反应过程中的作用 .结果发现 :1.腹主动脉缩窄 (COA)大鼠术后第 1、4、8、12周MAP明显增高 ,并呈时间依赖性 ;COA组大鼠与假手术 (Sham)组大鼠各时间点的MAP比较均显著升高 .2 .COA大鼠术后第 1、4、8、12周LVW /BW明显增高 ,并呈时间依赖性 ;COA组大鼠与Sham组大鼠各时间点的LVW/BW比较均显著升高 .3.Los明显阻断COA大鼠MAP和LVW /BW的增高效应 ,与单纯COA组大鼠相比有极显著性差异 ;但是 ,Los对Sham组大鼠的MAP和LVW/BW无明显影响 .以上结果表明 :腹主动脉缩窄可作为高血压和心肌肥大反应的动物模型 ;AngⅡ参与诱发压力超负荷高血压和心肌肥大反应的发生 .

PKC上调心脏营养素-1促进心肌细胞的存活率

目的 观察心脏营养素-1（CT-1）对培养乳鼠心肌细胞存活率的影响以及蛋白激酶C（PKC）信号转导通路在调控CT-1诱导心肌细胞存活中的作用。方法 分离、纯化并差速贴壁培养新生大鼠心肌细胞，MTT比色法测定各孔心肌细胞存活率。结果 ①无血清DMEM培养心肌细胞24h后加入4个剂量组CT-1（0.1～10nmol／L），随着剂量的增加MTT计数随之增高，呈明显的剂量依赖性；②在培养介质中预先加入蛋白激酶C（PKC）激动剂佛波酯（PMA），30min后再加入CT-1，MTT计数明显增加，而用PKC抑制剂Calphostin C（Cal）则使MTT计数明显降低；③用丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）亚型细胞外信号调节激酶（ERK）选择性抑制剂PD098059进行预处理，再加入CT-1，心肌细胞存活率明显降低，与单纯CT-1组相比有显著性差异；单纯用ERK抑制剂PD098059对心肌细胞存活率无明显影响；预先加入ERK抑制剂PD098059，再加入PMA和CT-1，MTT计数明显降低，与（PMA＋CT-1）组相比有极显著性差异。结论 CT-1对心肌细胞存活率具有明显的剂量依赖性；PKC可上调CT-1促进的心肌细胞存活率，PKC可能成为CT-1促进心肌细胞存活率的信号转导通路之一；CT-1诱导心肌细胞存活率的胞内信号转导通路可能是先激活PKC，然后诱导MAPK亚型ERK的激活。

纳洛酮在延髓腹外侧加压区加强P物质引起的升压效应

目的：探讨Ｐ物质（ＳＰ）在延髓腹外侧加压区（ＶＳＭｐ）的升压效应是否与内源性阿片样物质有关。方法：氨基甲酸乙酯麻醉、人工呼吸，暴露延髓腹侧面，ＶＳＭｐ 敷贴ＳＰ等药物。结果：ＶＳＭｐ 敷贴ＳＰ可使血压呈剂量效应关系的明显增高，但心率无明显变化；在ＶＳＭｐ 给纳洛酮进行预处理，可显著增强ＳＰ的升压效应；应用神经元细胞体兴奋剂Ｌ谷氨酸钠到ＶＳＭｐ 可使血压显著升高。结论：ＳＰ 在ＶＳＭｐ 具有明显的升压作用，内源性阿片样物质在ＶＳＭｐ 对ＳＰ升压效应起拮抗作用，ＳＰ的升压效应可能是兴奋ＶＳＭｐ

一氧化氮和血管紧张素Ⅱ在压力超负荷心肌肥大中的作用

目的:观察一氧化氮(ＮＯ)和血管紧张素Ⅱ(ＡｎｇⅡ)在压力超负荷心肌肥大反应过程中的作用。方法:利用腹主动脉缩窄性高血压大鼠模型,测量平均动脉压(ＭＡＰ)和左心室质量/体质量比值(ＬＶＷ/ＢＷ)。结果:在ＳＤ乳鼠腹主动脉缩窄性高血压模型中,ＭＡＰ和ＬＶＷ/ＢＷ呈时间依赖性增高,从术后第１周开始ＭＡＰ和ＬＶＷ/ＢＷ均明显增高,至第８周达高峰;ＮＯ前体Ｌ－Ａｒｇ和ＡｎｇⅡ１型受体(ＡＴ１)拮坑剂芦沙坦(Ｌｏｓ),明显阻断腹主动脉缩窄性高血压大鼠的ＭＡＰ和ＬＶＷ/ＢＷ的增高效应;用ＮＯＳ抑制剂ＮＧ－硝基左旋精氨酸甲酯(Ｌ－ＮＡＭＥ)同时处理假手术组(Ｓｈａｍ)和腹主动脉缩窄性(ＣＯＡ)高血压组大鼠,ＭＡＰ和ＬＶＷ/ＢＷ均进一步增高。结论:ＡｎｇⅡ参与诱发压力超负荷高血压和心肌肥大反应的发生;ＮＯ具有抑制压力超负荷引起的高血压和心肌肥大反应。

培养农村社区全科医生教学方法的探索——以问题为基础的教学法的运用

对比分析了教学基础本文,对比分析了社区医学实验班、传统班和普通班8门基础医学课程的期终理论考试成绩。结果发现,经 PBL 训练的杜区医学实验班学生的考试成绩明显高于未经 PBL 训练的其他班学生,大部分课程有显著性差异,PBL 训练时间越长差异显著性越明显。结果表明,PBL 训练对强化学生学习基础医学知识以及学过的知识融会贯通、举一反三加深理解均有良好的作用,PBL 训练可显著提高学生的考试成绩。

NO对新生大鼠心肌细胞PKC活性的影响

利用培养新生大鼠心肌细胞 ,检测NO前体L -精氨酸 (L -arginine ,L -Arg)和NO供体硝普钠 (sodiumnitroprus side ,SNP)对PKC活性的影响 ,并探讨内、外源性NO在PKC激动剂佛波指 (phorbol 12 -myristate 13-acetate ,PMA)激活PKC中的作用 .实验结果表明 :培养基中加入L -Arg ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;用L -Arg进行预处理 ,30min后加入PMA ,PKC活性明显降低 ,与单纯PMA组相比有显著差异 ;NOS抑制剂L -NAME本身对基础状态PKC活性无明显影响 ,但可阻断L -Arg对上述 2个效应的影响 ;培养液中加入NO供体SNP ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;用SNP预处理心肌细胞 ,5min后加入PMA ,PKC活性与单纯PMA组相比有显著性差异 .以上结果表明 ,内、外源性NO均具有剂量依赖性抑制PKC活性的作用 ,PKC可能是NO对心肌细胞作用的胞内信号传导通路的关键部位或重要信号分子之一 ;L -Arg通过NOS先生成NO ,NO再对PKC起抑制作用 .

社区暴发的与冠状病毒相关的SARS临床进程与病毒载量的预期研究

此文报道了严重急性呼吸窘迫综合征(severeacute respiratory distress syndrome,SARS)在香港社区的暴发与流行病学的联系,对SARS在临床、放射学和病毒学变化的时间进程进行了研究.

α_1－受体参与介导P物质在家兔延髓头端腹外侧面的升压作用

乌拉坦静脉麻醉，三碘季铵酚制动家兔，人工呼吸维持通气，ＳＰ敷贴于延髓头端腹外侧面（ＲＶＭ），具有明显的剂量－效应关系的升高血压作用，但心率无明显变化．预先给予酚妥拉明可使ＳＰ的升压效应显著减弱，而给予育亨宾和心得安均对ＳＰ的升压效应无明显影响．结果提示：ＳＰ在ＲＶＭ具有明显升压作用，它可能是通过增加血管的外周阻力而实现的，ＲＶＭ局部的α１－受体参与介导ＳＰ在该部位的升压效应．

P物质与心血管活动的调节

Ｐ物质与心血管活动的调节符史干，黄承钧（海南医学院生理学教研室）海口５７０１０２Ｐ物质（ＳＰ）是世界上发现最早的神经肽。１９３１年ＶｏｎＥｕｌｅｒ等从马脑和小肠提取液中寻找乙酰胆硷（Ａｃｈ）时偶尔发现了这种物质，它可致肠平滑肌收缩、血管舒张和血压（Ｂ...

迷走神经的抗心律失常研究

迷走神经的抗心律失常研究符史干（海南医学院生理教研室，海口５７０００５）关键词迷走神经，心律失常，受体，心室纤维颤动，心肌缺血中图分类号Ｒ３３８．５心脏既有自律性，又受神经和体液因素的影响。过去对迷走神经的心脏效应已有深入的认识。近年来，迷走神经的抗...

MAPK信号途径在一氧化氮抑制大鼠心肌肥大中的作用

实验观察了一氧化氮 (NO)前体L 精氨酸对肾性高血压大鼠心肌组织eNOS蛋白表达及亚硝酸盐 /硝酸盐含量、MKP 1蛋白表达及MAPK活性的影响 ,以及与心肌肥厚的关系。采用两肾一夹Goldblatt肾性高血压模型 ,随机分为 5组 :L 精氨酸高、中、低剂量组 ,分别于术后第 5周给予L 精氨酸 5 0、15 0及 45 0mg/kg;L NAME组 ,腹腔注射L NAME 10mg/kg,同时给予L 精氨酸 15 0mg/kg ;高血压对照组 ,正常饮水 ,以及另设的一假手术对照组。用药 8周后 ,用插管法测量大鼠动脉血压、左心室重与体重比值 ,用胶内原位磷酸化法测MAPK活性、免疫印迹法检测心肌组织eNOS及MKP 1蛋白表达、酶还原法测定心肌组织亚硝酸盐 /硝酸盐含量。结果表明 :(1)L 精氨酸可明显抑制肾动脉狭窄术后的血压升高、左心室重与体重比增加 ,增加心肌组织eNOS、MKP 1蛋白表达及亚硝酸盐 /硝酸盐含量 ,降低心肌组织MAPK活性 ,其中以 15 0mg/kg组作用最为明显 ;(2 )NOS抑制剂L NAME可明显抑制L 精氨酸的以上作用。肾性高血压大鼠心肌组织eNOS蛋白表达下降。NO生成减少及MKP 1蛋白表达下降以及MAPK活性增强可能与高血压及心肌肥厚形成有关 ,L 精氨酸通过促进心肌组织eNOS蛋白表达、增加NO产生和MKP 1表达。

新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液的促心肌细胞肥大作用

利用新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液孵育心肌细胞 ,证实成纤维细胞条件培养液能明显增大心肌细胞的表面积 ,增加心肌细胞的蛋白含量和 [3H] 亮氨酸 ( [3H] Leu)的掺入 ,上述作用以第 3天的条件培养液作用最强 ,具有剂量依赖性。ETA 受体拮抗剂BQ12 3能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大的作用 ,而AT1受体拮抗剂CV11974和α 肾上腺素受体拮抗剂regitin却无此效果。结果提示 :成纤维细胞条件培养液中含有促使心肌细胞肥大的物质 ,这些物质可能是内皮素 (ET 1)等。百日咳毒素 (PTX)和staurosporine也能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大作用 。

醛固酮对心室成纤维细胞分泌内皮素的影响

用细胞培养、内皮素放射免疫测定和RT PCR的方法 ,探讨醛固酮对心室成纤维细胞分泌内皮素的影响。结果显示 ,醛固酮 (1× 10 -7mol/L)能促进心室成纤维细胞ppET 1mRNA的表达 ,在作用后 2h ,表达开始增加 ,4h达高峰 ,以后逐渐下降 ;同时醛固酮能增加成纤维细胞内和条件培养液中内皮素的含量。其受体阻断剂螺旋内酯 (1× 10 -6mol/L)能拮抗醛固酮的作用 ,提示醛固酮能促使心室成纤维细胞分泌内皮素 。

甲胎蛋白抑制PTEN活性导致肝癌细胞耐受ATRA诱导的凋亡

研究甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)对肝癌细胞内PTEN/AKT信息通路信号传递的影响.用Western blotting法分析全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)处理人肝癌Bel 7402和HepG2细胞24 h后PTEN表达的变化.免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用.激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN在细胞共定位.RNA干扰(RNAi)技术抑制AFP表达,再用ATRA处理24 h后检测细胞内PTEN表达的变化,并分析蛋白激酶B(AKT)的磷酸化.用pcDNA3.1质粒和人afp基因连接构建表达AFP的载体(称为pcDNA3.1-afp),然后转染到不表达AFP的人肝癌HLE细胞.结果显示,人肝癌Bel 7402和HepG2细胞均有PTEN的表达,ATRA(160μmol/L)处理24 h后能促进这些细胞的PTEN表达.Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合.共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞浆.干扰AFP表达后,PTEN表达明显提高.抑制AFP表达后,ATRA能显著促进Bel 7402细胞内PTEN的表达,并能抑制AKT的磷酸化.转染pcDNA3.1-afp载体后,HLE细胞内有AFP表达,并与PTEN结合,且发现pcDNA3.1-afp载体能增加AKT的磷酸化[p-AKT(Ser473)],对抗ATRA抑制HLE细胞增殖.研究的结论是:肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活AKT信息通路.胞浆内的AFP是肝癌细胞耐受ATRA的重要因子.