LPS通过p38/MAPK通路和NF-κB的活化诱导RAW264.7细胞HIF-1α的表达

目的:研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在低氧条件下对RAW264.7细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor1α,HIF-1α)表达的影响及其可能的调控机制,探讨对牙周炎破骨细胞吸收的影响。方法:观察低氧条件下,用1μg/m L LPS刺激RAW264.7细胞,应用Western blot以及q RT-PCR检测HIF-1α的表达和P38/丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)和核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)信号通路活化情况。干扰HIF-1α后在低氧中用LPS诱导RAW264.7细胞,ELISA检测炎症因子TNF-α、PGE2、IL-1β以及q RT-PCR检测破骨细胞分化标志基因肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factor 6,Traf6)、活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated Tcells cytoplasmic1,Nfatc1)、组织蛋白酶K(cathepsin K,Ctsk)、c Fos、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,Trap)的变化。结果:低氧条件下LPS诱导RAW264.7细胞3、6、9、12 h分别与1 h比较,HIF-1α表达量明显增加(P=0.000、P=0.000、P=0.000、P=0.000)。在低氧条件下,LPS刺激RAW264.7细胞HIF-1αm RNA的相对表达量水平(0.81±0.14)高于单纯的低氧组(0.21±0.05),2组比较存在统计学差异(P=0.000)。低氧条件下LPS上调了p38的磷酸化水平(P=0.009),抑制p38以及NF-κB的表达明显抑制HIF-1α的表达(P=0.011、P=0.039)。干扰HIF-1α的表达明显抑制了低氧条件下LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2(94.46±8.89)和IL-1β(83.96±7.71)的生成,分别与si RNA-Control组的PGE2(134.66±21.11)和IL-1β(121.34±20.42)比较,2组比较存在统计学差异(P=0.008、P=0.008);同时也抑制了低氧条件下LPS诱导的破骨细胞标志基因Traf6、Nfatc1的m RNA相对表达量(0.50±0.20,0.60±0.30)的表达,分别与si RNA-Control组(1.00±0.00、1.00±0.00)比较(P=0.000、P=0.000)。结论:LPS在低氧条件下通过p38/MAPK通路和NF-κB的活化诱导了RAW264.7细胞HIF-1α表达,干扰HIF-1α的表达能够抑制低氧条件下LPS诱导的炎症因子的生成以及破骨细胞的分化。