MLCK、Cav1.2在高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎大鼠中的表达及其关系研究

目的:探讨高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎(HTGP)大鼠胰腺组织中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)与钙通道蛋白1.2(Cav1.2)的表达及其相互关系。方法:48只雄性SD大鼠随机分为正常饲料组和高脂饲料组,喂养4周后,测定血清甘油三酯(TG)含量。正常饲料组随机分为3个亚组:空白对照组、急性胰腺炎(AP)组、AP+MLCK抑制率ML-7干预组;高脂饲料组随机分为3个亚组:高甘油三酯血症(HTG)组、HTGP组、HTGP+ML-7干预组。腹腔注射雨蛙肽(50μg/kg)建立AP模型,造模后24h处死大鼠,测定血清淀粉酶(AMY)含量;光镜下观察胰腺病理变化;透射电镜下观察胰腺细胞超微结构与细胞间紧密连接(TJ)改变;免疫组织化学法检测胰腺组织MLCK、Cav1.2的表达及定位。结果:正常饲料组和高脂饲料组的TG水平分别为(1.16±0.33)mmol/L、(3.30±1.07)mmol/L,高脂饲料组的TG水平较正常饲料组显著升高(P<0.01)。诱导AP后血清AMY含量及胰腺病理评分升高,并且HTGP组血清AMY含量、胰腺病理评分较AP组显著升高(均P<0.05);ML-7干预后血清AMY含量降低及胰腺病理损伤减轻。HTGP组、AP组大鼠胰腺中MLCK、Cav1.2表达均较HTG组显著增加(均P<0.05),其中HTGP组MLCK、Cav1.2的表达较AP组显著增加(均P<0.05);ML-7能够有效抑制MLCK、Cav1.2的表达。HTGP组MLCK、Cav1.2的表达分别与胰腺病理评分呈正相关关系(r1=0.853,r2=0.779,均P<0.05)。透射电镜下可见AP组、HTGP组胰腺细胞超微结构损伤及TJ增宽,其中以HTGP组增宽更为明显;ML-7干预后TJ增宽减小。结论:HTGP大鼠胰腺组织MLCK、Cav1.2表达上调,其与疾病严重程度相关,且MLCK可能通过改变细胞间TJ及调控Cav1.2的表达参与HGTP的发病机制。

E-cadherin、β-catenin、MLCK在高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎早期大鼠模型中的表达及意义

目的探讨E-cadherin、β-catenin、肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)蛋白在高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎(hypertriglyceridemia associated acute pancreatitis,HTGP)早期大鼠模型中的表达及意义。方法 144只雄性SD大鼠随机分为普通饲料组(48只),高脂饲料组(96只),喂养4周,普通饲料组随机分为2个亚组:N组、ANP组,高脂饲料组随机分为4个亚组:HTG组、HTGP组、HTG+ML-7组、HTGP+ML-7组。N组、HTG组、HTG+ML-7组为假手术组,ANP组、HTGP组、HTGP+ML-7组通过十二指肠乳头逆行胆胰管注射质量浓度为40 g/L的牛黄胆酸钠建立急性坏死性胰腺炎模型,并于造模后3、6、12 h处死大鼠,应用HE染色观察胰腺形态学的变化,检测血清淀粉酶含量,免疫组织化学技术检测胰腺组织E-cadherin、β-catenin及MLCK蛋白的定位及表达。结果高脂饲料组与普通饲料组相比,TG水平含量显著升高(P <0. 01); HTGP、HTGP+ML-7组胰腺病理评分明显高于ANP组(P <0. 05);同时点造模组血清AMY相比,差异无统计学意义(P> 0. 05);同时点造模组血清Ca2+比较,差异无统计学意义(P> 0. 05); HTGP组与ANP组各时点相比,E-cadherin、β-catenin、MLCK蛋白含量显著升高(P <0. 05); E-cadherin、β-catenin、MLCK分别与胰腺病理评分呈正相关(r1=0. 644,r2=0. 474,r3=0. 685,P <0. 05);经MLCK抑制剂ML-7干预的HTGP+ML-7组胰腺损伤程度较HTGP组下降(P <0. 05),E-cadherin、β-catenin、MLCK蛋白表达减少(P <0. 05)。结论 E-cadherin、β-catenin及MLCK在急性坏死性胰腺炎早期表达升高,同时点HTGP组较ANP组升高明显,MLCK可能改变细胞间的黏附连接参与HTGP的形成。

肌球蛋白轻链激酶在大鼠高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎中的作用

目的:本实验的目的在于探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)在高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎(hypertrigly ceridemia-associated acute pancreatitis,HTGP)中的作用.方法:应用48只♂SD大鼠随机平均分为A组(高脂饲料饲养)、B组(普通饲料饲养),均饲养4 wk.满4 wk时行眶后静脉丛取血,检测血清甘油三酯(triglyceride,TG)含量.A组随机分为3个亚组:HTG、HTG+AP及H T G+A P+M L-7组;B组随机分为生理盐水组、AP、AP+ML-7 3个亚组.在雨蛙肽末次注射24 h后处理大鼠,利用HE染色观察胰腺形态学的变化及电镜观察胰腺的超微结构及紧密连接(tight junction,TJ)的改变;用底物酶法检测血清淀粉酶(amylase,AMY)含量;利用免疫组织化学技术检测胰腺组织MLCK、p-JNK蛋白的定位及表达.结果:与B组相比,经高脂饮食后A组TG水平显著升高(P<0.01);与AP组相比,HTG+AP组的胰腺病理评分、血AMY水平显著升高(P<0.05);HTG+AP、AP组超微结构破坏,TJ显著增宽,其中以HTG+AP组增宽最显著;与AP组相比,HTG+AP组中MLCK、p-JNK蛋白含量显著升高(P<0.05),且MLCK、p-J N K分别与胰腺病理评分呈正相关:r1=0.795,r2=0.789(均P<0.01);利用MLCK抑制剂ML-7干预可改善胰腺损伤程度及使血淀粉酶显著下降(P<0.01),且在HTG+AP组中抑制效果更明显;ML-7干预后还使TJ增宽改善及抑制p-JNK的表达(P<0.05).结论:MLCK可能与HTGP的严重程度有关,且他可能通过改变细胞间的TJ及调控JNK通路从而参与HTGP的形成.

高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎模型的建立研究

目的:探讨高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎(HTGP)模型的建立。方法:将42只雄性SD大鼠随机分为A组(12只)、B组(30只),分别用普通饲料、高脂饲料饲养。满4周时行眶后静脉丛取血,测大鼠血清甘油三酯(TG)含量。A组随机分为2个亚组:AP组和C组,分别用雨蛙肽50μg/kg腹腔注射干预及生理盐水作为对照。B组也随机分为5个亚组:HTG+AP1组、HTG+AP2组、HTG+AP3组、HTG+AP4组和HTG组,分别用雨蛙肽50μg/kg、40μg/kg、30μg/kg、20μg/kg腹腔注射和生理盐水干预;苏木素—伊红染色(HE)光镜下观察胰腺病理变化,用底物酶法测定大鼠血清淀粉酶(AMY)含量。结果:经高脂饲料饲养后B组大鼠TG为(3.11±0.73)mmol/L,较A组的(0.99±0.30)mmol/L显著升高(P<0.01);与AP组相比,HTG+AP1组、HTG+AP2组胰腺病理评分、血清AMY含量显著升高(P<0.05),但HTG+AP3组、HTG+AP4组与AP组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:高甘油三酯血症能够加重雨蛙肽诱导的急性胰腺炎的胰腺损伤。