CA-7000全自动血凝仪性能评价的探讨

目的对SYSMEX公司生产的CA-7000全自动血凝仪进行性能评价。方法用level I和levelⅡ2个浓度值的质控品对其检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶原时间（APTT）、纤维蛋白原（Fg）进行批内、批间不精密度;用卫生部室间质评物来检测PT、APTT、Fg正确度;取20个健康人群来检测PT、APTT、Fg进行生物参考区间转移的验证;检测高值和低值标本PT、APTT和Fg并进行携带污染率评价;参考CLSI的H21-A4文件确定其检测PT的正常值;用高低值标本来检测Fg的检测限、线性范围和可报告范围的评价。结果CA-7000检测PT、APTT批内CV%〈3.75%,Fg批内CV%〈5.0%;PT、APTT批间CV%〈5.0%,Fg批间CV%〈6.67%;检测PT、APTT、Fg的偏倚分别小于5.0%、5.0%、6.67%;检测PT、APTT、Fg的携带污染率符合要求;检测PT的正常值为10.99S;检测Fg的检测限为0.48g/L、线性范围为1.059~6.34g/L、可报告范围为56g/L。结论CA-7000全自动血凝仪各项性能指标符合要求,可用于临床检测。

一种检测多种NPM1突变体的ARMS-PCR方法的建立

本研究旨在建立一种简单、灵敏的,能检测多种NPM1突变体的方法,以降低NPM1突变的漏检率。通过构建NPM1基因野生型和最常见的突变型A、B、C、D重组质粒作为检测对象,根据NPM1不同突变体碱基排列方式不同,设计1对特异性引物,使得上游引物3'末端的碱基与突变体A、B、C、D匹配,而与野生型NPM1不匹配;通过条件优化,建立检测多种NPM1突变的ARMS-PCR的方法。通过对该方法的检测范围、灵敏度的评估及与直接测序法的比较,判断该方法的可行性。结果表明,成功构建NPM1基因野生型和突变型A、B、C、D 5种重组质粒,经测序鉴定和目的片段一致。ARMS-PCR方法可以检测到ABCD 4种突变体,检测范围在103copies/ml-109copies/ml,其灵敏度为0.01%,而当突变体含量低于10%时采用直接测序则检测不出突变。结论:本研究建立了一种可以检测NPM1 4种高频突变的ARMS-PCR方法。该方法灵敏度高,可以检出95%以上的突变,为临床检测NPM1基因突变提供一种新型的检测方法。

江西省急性髓系白血病NPM1和FLT3-ITD基因突变分析

目的检测急性髓系白血病患者NPM1和FLT3-ITD基因突变情况,分析其突变和临床之间的关系。方法提取患者骨髓标本DNA,采用AS-PCR技术检测FLT3-ITD和NPM1基因突变情况,分析基因突变与白血病FAB分型关系。结果在187例患者中,检测出52例NPM1基因突变,突变率为27.8%;有28患者被检测出FLT3-ITD基因突变,突变率为14.97%;同时具有NPM1和FLT3-ITD基因突变的有13例,突变率为6.95%。其中NPM1基因突变在M5、M2中较为多见,而FLT3-ITD基因突变在M1、M4中较为多见。结论检测NPM1和FLT3-ITD基因突变可以给临床治疗提供指导意义。

Sysmex XE-2100D血细胞分析仪白细胞分类和手工分类的比较

目的探讨Sysmex XE-2100D血细胞分析仪白细胞分类和手工分类结果的差异,以验证该仪器白细胞分类结果的准确性。方法取Sysmex XE-2100D血细胞分析仪检测后未触犯推片规则的20份病人标本,重复检测2次。对每份标本分别制作2张血涂片,由两位有经验的检验人员进行人工分类,每张涂片分类200个细胞。比较仪器分类的平均值是否在手工分类结果 99%可信区间内,在可信区间内为合格。结果Sysmex XE-2100D进行中性粒细胞(N%)、淋巴细胞(L%)、单核细胞(M%)分类时合格率均为90%;进行嗜酸性粒细胞(E%)和嗜碱性粒细胞(B%)分类时其合格率分别为95%和75%。结论Sysmex XE-2100D血细胞分析仪进行白细胞分类准确性较高,对于未触犯推片规则的分类结果可以直接发报告。

BCR/ABL双色双融-荧光原位杂交技术的信号模式探讨

目的研究BCR/ABL双色双融合探针荧光原位杂交技术(dual color dual fusion BCR/ABL probe-fluorescence in situ hy-bridization,DCDF-FISH)在白血病遗传学异常检测中的常见信号模式,探讨各种信号模式与染色体异常的关系。方法采用BCR/ABL的DCDF-FISH技术和染色体核型分析技术对初诊的40例慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)、30例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)以及10例其它(包括AML和骨髓增生性疾病)患者骨髓标本进行检测,比较DCDF-FISH各种信号模式与染色体关系。结果DCDF-FISH检测见11种信号模式:2R2G为正常细胞信号模式;2R3G、3R2G及3R3G为无BCR/ABL融合基因的异常信号模式;1R1G2F、1R1G1F、1R2G1F和2R1G1F模式的核型都为t(9;22);1R1G3F核型模式为t(9;22)伴有Ph+;2R2G1F为三条以上染色体易位t(9;22;V);1R2G2F为t(9;22)伴多一条22号染色体,这些信号模式的细胞内都存在着BCR/ABL融合基因。结论BCR/ABL DCDF-FISH检测时存在着多种信号模式,明确各种信号模式的意义,对临床疾病的诊断、预后有重要指导意义。

MicroRNA与乳腺癌关系的研究进展

MicroRNAs(miRNAs)是一类广泛存在于真核细胞中的长约21-22 nt的单链、非编码小RNA,具有转录后基因调控的功能,参与调控胚胎发育、细胞生长和凋亡、细胞分化、细胞能量代谢等多种生理过程以及糖尿病、心血管疾病、神经系统疾病、肿瘤等多种病理过程。近些年来研究发现,miRNAs与乳腺癌之间的关系十分密切。本文综述与乳腺癌发生、发展密切相关的miRNAs。

车门内饰板设计开发

车门内饰板对汽车内饰整体的美观性、乘坐舒适性、使用方便性及安全性等起着至关重要的作用,车门内饰板设计在车身设计中已占有重要的地位。文章通过归纳分析车门内饰板的典型结构形式、其与周边各系统部件的关系以及试验验证方法,提出了车门内饰板的设计开发思路,总结归纳了设计开发方法及要点,用以确保车门内饰板设计开发的正确性,从而确保整车内饰品质,满足用户使用需求。

轿车仪表板总成的开发

一种成功的轿车仪表板总或。既要融入轿车的整体．体现出它是轿车不可分前的一部分：又要体现出轿车的个性．使人看到仪表板就会想到车子的形象，正因为如此。仪表板设计在轿车车身的设计中已经占有相当重要的地位，盛为一部成功的汽车设计中必不可少的一部分。

采用定点突变PCR构建c-kit D816V突变的重组质粒标准品

目的构建含野生型c-kit基因第17号外显子片段以及含D816V突变型的重组质粒,用作检测c-kit基因D816V突变的阳性对照和阴性对照标准品。方法通过设计定点突变的克隆引物和野生型克隆引物,以健康人外周血基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增获得突变和野生型c-kit基因17号外显子片段,将其插入pEGFP-C1载体质粒中获得重组质粒,并通过酶切和测序鉴定重组质粒,通过紫外分光光度计检测标本的浓度和纯度。结果从健康外周血细胞基因组DNA中成功扩增得到野生型和定点突变的c-kit DNA片段,并将其插入到质粒载体pEGFP-C1中,构建的阳性和阴性对照质粒经酶切和测序鉴定与目的片段完全一致。阴性和阳性质粒标准品的浓度分别为140.1μg/ml和189.9μg/ml,其OD260/OD280值分别为1.821和1.802。结论成功构建了含野生型和D816V突变的c-kit重组质粒,为检测c-kit基因D816V突变提供阴性和阳性对照以及质控品。

检测PML/RARα基因的双重荧光定量PCR方法的建立

目的建立在一个反应体系中同时检测融合基因PML/RARα和内参基因ABL的双重荧光定量PCR方法。方法从DNA聚合酶含量、Mg2+浓度和引物浓度等方面进行优化,建立检测PML/RARα和ABL基因双重荧光定量PCR体系,从分析灵敏度,批内、批间精密度以及检测临床样本阳性率等方面对双重荧光定量PCR反应体系进行性能评价,并同时和北京思尔成公司荧光定量PCR试剂盒进行比较,分析两者的一致性。结果成功构建双重荧光定量PCR反应体系,检测质粒灵敏度为103copies/ml,检测NB4细胞的灵敏度为10-3,反应体系批内、批间精密度Ct值的变异系数CV都小于5%,检测20例确诊为APL病人,其检测阳性率,和北京思尔成公司的PCR反应试剂一致。结论成功开发出稳定的双重荧光定量PCR试剂盒,其操作简单,成本低,误差小,能够有效地用于APL分子生物学分型诊断、用药指导、预后观察及MRD监测。

含PML/RARα(L型)与ABL双基因质粒标准品的制备及应用

目的建立一个含PML/RARα(L型)与ABL双基因质粒标准品,用于PML/RARαL型)的定量检测。方法从NB4细胞中提取总RNA并逆转录为cDNA,以此为模板,设计PML/RARα(L型)与ABL基因特异性引物进行PCR,PCR产物经琼脂糖电泳、胶回收、PCMV4载体克隆后转化DH5α工程菌,提取质粒进行酶切、测序鉴定,提取质粒用于制作荧光定量PCR标准曲线,同时对质粒的稳定性能进行评价。结果结果NB4细胞提取的总RNA完整性良好,构建的质粒经酶切鉴定后与目的条带一致,测序结果与目的片段几乎完全一致,且质粒的原始浓度为9×1012copies/ml,倍比稀释至9×104copies/ml,均能得到良好的标准曲线(R2≈1),且质粒的稳定性好,提示含PML/RARa(L型)与ABL双基因荧光定量PCR质粒标准品构建成功。结论本研究建立了制备含PML/RARα(L型)与ABL双基因质粒标准品方法,并成功制备出稳定的含PML/RARα(L型)与ABL双基因质粒标准品。

PML/RARα融合基因不典型FISH信号模式的APL的实验与临床特征研究

目的探讨伴有PML/RARα不典型FISH信号模式的急性早幼粒细胞白血病的临床和实验室特征。方法采用PML/RARα的DCDF-FISH技术、染色体核型分析及FLT3-ITD突变检测技术对初诊的52例急性早幼粒细胞白血病患者骨髓标本进行检测,比较FISH信号模式与其他检测结果的关系。结果在检测的52例标本中,51例存在PML/RARα融合基因,阳性率高达98.1%;51例FISH阳性患者中38例为典型的1R1G2F信号,13例呈不典型信号模式,其中2例为1R1G1F,3例为1R1G3F,6例为2R2G1F,1例为1R2G1F,1例为2R1G1F。将不典型FISH信号模式组和典型FISH信号模式组进行比较,我们发现不典型组的高白患者比率较典型组高(P>0.05);且不典型FISH信号模式组中复杂核型与FLT3-ITD突变的发生率明显高于典型信号组(P<0.05)。结论具有不典型FISH信号模式的APL患者常伴有复杂核型,FLT3-ITD突变等预后不良的指标,其具体作用方式仍有待进一步探讨。

体外定点突变PCR法构建abl T315I突变的重组质粒标准品

目的利用聚合酶链反应(PCR)定点突变技术构建含人类abl基因第6号外显子片段的野生型及含T315I突变型重组质粒,作为检测abl T315I基因突变的阳性对照和阴性对照标准品。方法先设计包括突变位点的两对引物,以健康人外周血基因组DNA为模板,扩增获得野生型和突变型abl基因第6号外显子片段,将其插入pSG5M-flag载体质粒中,并将所获重组质粒分别进行酶切与测序鉴定,通过紫外分光光度计检测标本的浓度和纯度。结果DNA测序表明在预期位点上发生突变,abl基因第315位氨基酸密码子由苏氨酸(Thr)残基突变为异亮氨酸(Ile)残基,所构建abl基因野生型和突变型质粒,经酶切和测序鉴定与目的片段完全一致。结论PCR技术诱导定点突变准确、高效。所构建含野生型和T315I突变的abl基因重组质粒,可为检测abl基因T315I突变提供阴性和阳性对照以及质控品,同时也为T315I突变的相关研究奠定了基础。

汽车产品Benchmarking的应用

随着市场上车型越来越多,各大汽车厂开始对其他竞争车型进行对标分析。通过对Benchmarking概念进行解析,阐述了汽车产品Benchmarking的主要内容,包括布置分析、结构分析、性能分析、人机分析、成本质量分析及法规分析。通过对2款车型千斤顶手柄进行对标,说明零部件对标要领及其关注点。把产品Benchmarking的理念应用到整个产品开发过程中,可以为新开发车型合理定位,帮助控制开发车型生产成本,提高企业的研究开发能力。

轿车车身结构的技术动向(续2)

4．2．2保护车身侧面碰撞的结构设计 有统计称，汽车碰撞事故中的死亡人数，侧面碰撞约占1／3，因此，侧面碰撞与正面碰撞同样受到重视，各国都制定了相应的法规，中国于2006-07-01开始执行侧面碰撞法规。为了满足侧面碰撞时保护乘员的要求，目前采用的方案有如下几种。

后排座椅中间位置三点式安全带固定点布置

汽车安全带固定点标准自美国1968年开始首先作为轿车必须遵守的法规后，相继有欧洲、日本和澳大利亚等国家和地区作为法规实施。我国于1985年笫一次公布了部颁标准，之后逐步进行完善，并干1993年发布第一版GB14167—1993《汽车安全带安装固定点》标准，于2006年进行修订，

轿车车身结构的技术动向(续1)

进入20世纪后,轿车车身结构设计技术发展迅速,出现了许多新的技术。文章通过介绍车身布置新方案、空气动力特性、车身安全特性以及声振粗糙度(NVH)性能,阐述了轿车车身结构的新动向,如取消中柱;通过采用高强度钢、铝合金及塑料等材料,以及采用新型车身结构来满足碰撞要求,同时减轻整车质量。车身结构也越来越考虑到减少车身噪声源和噪声强度。

鲍曼不动杆菌感染的临床分布特征与耐药性分析

目的对我院鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)的临床分布特征和对抗菌药物的耐药情况进行分析,为防控其在院内播散及抗菌药物的合理使用提供依据。方法收集我院2018年1月至2020年12月临床标本中分离的AB,采用VITEK-2 Compact系统(法国Bio-Mérieux)或MALDI-TOF MS(法国Bio-Mérieux)进行菌株鉴定,采用VITEK-2 Compact AST-GN16系统(bioMérieux,法国)及纸片扩散法进行体外药敏试验。Whonet 5.6和SPSS 25.0统计软件分析数据。结果2018年至2020年期间,我院AB三年检出率总体呈上升趋势。检出患者年龄构成以70岁以上最多。AB主要分离来自痰液(63.10%)、脓液/伤口分泌物(8.86%);AB的检出科室主要分布在综合重症监护室(ICU)(33.14%)和神经内科(15.50%);AB对临床常用抗菌药物的耐药性普遍较高,除替加环素耐药率为5.02%以外,对其他8种抗菌药物耐药率均在40%以上;不同标本来源的AB对同一抗生素的耐药率也不尽相同,痰液标本分离的AB对大部分临床常用抗菌药物的耐药率均高于其他标本来源。结论我院AB感染问题仍然十分严重,临床医生应依据药敏结果和临床分布特征采取针对性治疗。医院需强化无菌观念、加强物体表面消毒及环境卫生监测,可有效控制AB耐药性的产生及防止其在院内快速播散。

PCR-RFLP联合AS-PCR检测bcr/abl融合基因T315I突变方法的建立

目的 建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）联合等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）检测bcr/abl融合基因T315I点突变的方法,以提高bcr/abl基因T315I突变检出率.方法 方法学建立.构建abl基因野生型和T315I突变型重组质粒作为检测对象,设计一对野生型和突变型abl基因序列的通用引物,分别以野生型和T315I突变型质粒作为模板,PCR扩增出目的片段,经酶切初筛检测abl基因T315I突变情况,另设计一对仅针对T315I突变的特异性引物进行AS-PCR检测.并对具有该基因突变的1例慢性粒细胞白血病患者进行检测,同时对该方法的灵敏度和特异性进行检测.结果 PCR扩增的目的片段（273 bp）经限制性内切酶Dde Ⅰ酶切后,野生型abl基因片段产生141、68、46和18 bp4条片段,而T315I突变型abl基因片段酶切后产生159、68和46 bp3条片段.PCR-RFLP方法可以检测T315I突变,检测灵敏度为6％.再以酶切产物作为模板进行AS-PCR,优化反应条件,AS-PCR所能检测到的T315I最低突变浓度为0.18％.所测临床标本结果显示,该患者发生了bcr/abl融合基因T315I突变.结论 PCR-RFLP联合AS-PCR检测方法特异性好、灵敏度高,能够给临床检测abl基因T315I突变提供一种新型的检测方法.