藏族药二十五味松石丸调控肠道菌群改善非酒精性脂肪性肝炎的作用机制研究

探究藏族药二十五味松石丸(Ershiwuwei Songshi Pills,ESP)对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠肠道菌群的影响。将48只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组(control),模型组(MCD),藏族药二十五味松石丸高(ESP 0.8 g·kg^(-1))、中(ESP 0.4 g·kg^(-1))、低(ESP 0.2 g·kg^(-1))剂量组和吡格列酮组(pioglitazone,PGZ 10 mg·kg^(-1)),每组8只。空白组普通饲料喂养,其余5组蛋氨酸-胆碱缺乏(methionine-choline-deficient,MCD)饲料喂养5周构建非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型,造模的同时灌胃(ig)给予相应的药物进行干预;实验过程中记录小鼠体质量、日饮水量及日摄食量的变化;实验结束后收集肝组织,苏木精-伊红染色(HE)染色观察肝脏病理变化,油红O染色观察肝脏脂肪堆积情况,检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和肝组织中甘油三酯(TG)的含量;采用16S rRNA高通量测序技术检测小鼠肠道菌群的变化。结果显示,与模型组相比,二十五味松石丸高、中、低剂量组和吡格列酮组血清中的AST、ALT和肝组织中TG含量显著降低,对肝细胞脂肪变性和肝脏中脂肪堆积均有改善作用。16S rRNA测序结果显示,模型组肠道菌群丰度和多样性指数降低,二十五味松石丸组小鼠肠道菌群的丰度和多样性指数升高,并且在门水平上降低了厚壁菌门Firmicutes与拟杆菌门Bacteroidetes的比例;在改变肠道菌群组成方面,降低了肠道菌群中Erysipelotrichia和Faecalibaculum的丰度,提高了Desulfovibrionaceae、Rikenellaceae、Lachnospiraceae和Ruminococcaceae的丰度。该研究发现藏族药二十五味松石丸对MCD饮食诱导的NASH具有保护作用,其作用机制可能是通过调节肠道菌群的变化,改变肠道菌群的组成,抑制肠道菌群的失调,进而改善NASH。

基于Keap1/Nrf2与TLR4/NF-κB p65信号通路研究藏族药二十五味松石丸改善对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的作用机制

该研究基于Keap1/Nrf2与TLR4/NF-κB p65信号通路研究藏族药二十五味松石丸(Ershiwuwei Songshi Pills, ESP)改善对乙酰氨基酚(acetaminophen, APAP)致小鼠肝损伤的作用机制。将昆明小鼠随机分为空白组,模型组,二十五味松石丸高(400 mg·kg^(-1))、中(200 mg·kg^(-1))、低(100 mg·kg^(-1))剂量组和乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)组。各给药组小鼠均连续给药14 d后,除空白组外,其余各组小鼠腹腔注射200 mg·kg^(-1)APAP,12 h后收集小鼠血清与肝脏组织。通过肝脏病理切片苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE),并检测小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)水平以及肝组织匀浆中谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity, T-AOC)水平,观察与分析二十五味松石丸对APAP致小鼠肝损伤的保护作用。通过ELISA法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)、白细胞介素(interleukin-1 beta, IL-1β)与(interleukin-6,IL-6)水平,Western blot法测定小鼠肝细胞核内核转录因子E2相关因子2(nuclear transcription factor E2 related factor 2,Nrf2)、细胞质kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、肝脏内Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)以及细胞核内核因子-κB p65(nuclear factor-kappa B,NF-κB p65)蛋白表达,实时荧光定量PCR测定小鼠肝脏中谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit, GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶调节亚基(glutamate-cysteine ligase regulatory subunit, GCLM)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、还原型辅酶/醌氧化还原酶[NAD(P)H dehydrogenase quinone 1,NQO-1]基因mRNA相对表达水平,初步探究藏族药二十五味松石丸改善APAP致小鼠肝损伤的作用机制。结果显示,与模型组相比,二十五味松石丸给药组小鼠肝脏病理损伤程度有所改善;血清中AST、ALT水平有所降低;肝脏中GSH、SOD、CAT、T-AOC水平有所升高,MDA、MPO有所降低;血清TNF-α、IL-6水平有所降低;小鼠肝脏细胞质Keap1、细胞核NF-κB p65表达有所减少,细胞核Nrf2表达有所增加,肝脏TLR4表达无显著性差异;GCLC、GCLM、HO-1、NQO-1等抗氧化基因mRNA相对表达量也有所增加。研究结果表明,二十五味松石丸可减轻APAP引起的氧化损伤与炎症反应,其作用机制可能与Keap1/Nrf2信号通路以及TLR4/NF-κB p65通路上的信号转导因子有关。

藏族药二十五味松石丸治疗慢性胆汁淤积小鼠的血清代谢组学研究

采用喂养含3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(3,5-diethoxy carbonyl-1,4-dihydro-2,4,6-trimethylpyridine,DDC)的饲料建立慢性胆汁淤积小鼠模型,基于液相色谱-质谱(LC-MS)检测技术的代谢组学分析方法,探究二十五味松石丸(Ershiwuwei Songshi Pills,ESP)对慢性胆汁淤积小鼠的内源性代谢物的影响。结果发现ESP能够有效改善模型组小鼠的病理性损伤以及降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)水平。代谢组学筛查得到模型组与空白组、模型组与ESP组13个共有的差异代谢物,分别是尿酸(uric acid)、乙醇醛(glycolaldehyde)、犬尿氨酸(kynurenine)、黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide)、L-3-苯乳酸(L-3-phenyllactic acid)、I-尿胆素(I-urobilin)、白三烯D4(LTD4)、牛磺胆酸(taurocholic acid)、trioxilin A3、1D-肌醇1,4-二磷酸(D-inositol-1,4-diphosphate)、PC[16:0/20:2(11Z,14Z)]、PC[14:0/22:2(13Z,16Z)]、PC[20:4(5Z,8Z,11Z,14Z)/20:4(5Z,8Z,11Z,14Z)]。ESP干预后,13个差异代谢物的含量均有明显回调,通路分析显示,ESP主要通过影响花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢、色氨酸代谢、初级胆汁酸的生物合成等途径来达到治疗效果。该研究从代谢物角度阐释了二十五味松石丸抗慢性胆汁淤积的作用机制。

波棱瓜子总木脂素对慢性酒精性肝损伤大鼠肝组织TGF-β/CTGF表达的影响

目的:探讨波棱瓜子总木脂素对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏TGF-β/CTGF表达的影响及保护作用机制。方法:大鼠分为:模型对照组、水飞蓟素50 mg/kg组、波棱瓜子总木脂素100、200、400 mg/kg组,连续灌胃给药8 w,并同时建立慢性酒精性肝损伤大鼠模型,另设正常对照组。取肝脏,计算大鼠的肝脏系数。通过酶联免疫吸附(Elisa)法检测大鼠血清中转化生长因子-β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)以及肝匀浆超氧化物歧化酶(SOD)的活力,观察大鼠肝组织病理切片胶原纤维染色(Masson)结果,免疫组织化学染色观察TGF-β、CTGF蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,肝脏组织经过Masson三色胶原染色后发现,模型对照组有胶原纤维的生成,肝脏系数显著升高,血清中TGF-β、CTGF含量显著升高,肝组织中SOD活力显著升高,肝组织中TGF-β、CTGF蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型对照组相比较,波棱瓜子总木脂素400 mg/kg组大鼠的肝脏系数显著降低(P<0.01),血清中TGF-β、CTGF含量显著降低,肝匀浆SOD活力显著增高(P<0.01),肝脏损伤程度减轻,胶原纤维的生成减少,肝组织中TGF-β、CTGF蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:波棱瓜子总木脂素可以通过抑制CTGF的生成,对酒精性肝损伤大鼠的肝组织具有一定的保护作用。