不同浓度透明质酸水凝胶对骨形态发生蛋白2基因修饰的BMSCs特性的影响

目的探讨不同浓度透明质酸水凝胶(hyaluronic acid hydrogel,HAH)包封携带骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)基因的腺病毒载体(Ad-BMP-2)转染兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后对细胞形态、增殖活性及蛋白表达的影响。方法提取、培养BMSCs;通过成骨、成脂诱导分化及细胞表面抗原检测对BMSCs进行鉴定。体外制备不同浓度的HAH并构建携带BMP-2腺病毒载体转染至BMSCs。实验分为5组:0g/L HAH+Ad-BMP-2 BMSCs组、2g/L HAH+Ad-BMP-2 BMSCs组、4g/L HAH+Ad-BMP-2 BMSCs组、8g/L HAH+Ad-BMP-2 BMSCs组和12g/L HAH+Ad-BMP-2 BMSCs组。激光共聚焦显微镜观察不同浓度HAH下Ad-BMP-2 BMSCs的形态特征,并进行三维重建。在第1、2、4、6、8、10、12、14天不同时相点使用CCK-8法检测Ad-BMP-2 BMSCs的增殖活性;ELISA检测各组BMP-2的表达情况。结果激光共聚焦显微镜下三维重建可见Ad-BMP-2 BMSCs在不同浓度HAH中呈现不同的形态:Ad-BMP-2 BMSCs在2、4、8g/L HAH中可多个方向铺展,具有充足的生长空间,在12g/L HAH中呈圆形。细胞增殖活性检测显示:多组间细胞增殖活性比较差异性具有统计学意义(P<0.05);4g/L HAH+Ad-BMP-2 BMSCs组和8g/L HAH+Ad-BMP-2 BMSCs组增殖活性最佳。ELISA检测BMP-2表达结果显示:各组均可表达BMP-2,8g/L HAH+AdBMP-2 BMSCs组表达BMP-2最高,且与其他4组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论不同浓度HAH中Ad-BMP-2 BMSC细胞形态、增殖活性、BMP-2的表达均不同,8g/L HAH包封下具有最显著的细胞活性。

透明质酸水凝胶包封对携带BMP-2基因的腺病毒转染骨髓间充质干细胞增殖活性及其表达的影响

目的:探讨携带骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)基因的腺病毒转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后应用透明质酸水凝胶(hyaluronic acid hydrogel,HAH)包封对BMSCs增殖能力及其表达目标蛋白BMP-2的影响。方法:体外分离、提取、鉴定BMSCs,并将提前构建好的Ad-BMP-2转染BMSCs并使用HAH进行包封,激光共聚焦显微镜下观察Ad-BMP-2转染的BMSCs在HAH包封下的三维形态。实验分为4组(各组培养条件无差异):A组(未转染BMP-2的BMSCs);B组(HAH+未转染BMP-2的BMSCs);C组(转染BMP-2的BMSCs);D组(HAH+转染BMP-2的BMSCs)。分别一周内不同时相点(1d、2d、3d……7d)使用CCK-8法检测各组OD值来评价细胞增殖活性;ELISA法检测各组BMP-2的量(pg/ml)来评价目标蛋白的表达状况。结果 :激光共聚焦显微镜三维重建可观察到BMSCs可在HAH中任意平面铺展,有充足的生长空间。BMSCs的增殖活性检测显示,随着培养时间延长,细胞增殖活性逐渐增强,A组、C组4d后的OD值较1d时明显增大(P<0.05);B组和D组5d后的OD值较1d时明显增大(P<0.05);至7d时,A组OD值为1.283±0.061,B组为1.844±0.075;C组为1.570±0.099;D组为1.976±0.142,包封HAH的B、D组OD值均优于没有包封HAH的A、C组(P<0.05)。BMP-2的表达在A、B组较弱,不同时间点间无显著性差异(P>0.05);C、D组的BMP-2表达各时间点均明显高于A、B组(P<0.05);从4d时起,C、D两组的BMP-2表达显著增加(与1d时比较P<0.05),且D组明显优于C组,差异有显著性(P<0.05)。结论 :三维环境下(即包封HAH后),Ad-BMP-2转染的BMSCs不仅有较强的增殖活性;而且对BMP-2的表达具有一定的促进作用。

穿刺针联合经皮椎体成形术在老年脆性腰椎椎体压缩性骨折治疗中的应用效果

目的观察穿刺针联合经皮椎体成形术(PVP)在老年脆性腰椎椎体压缩性骨折治疗中的临床价值。方法回顾性收集2021年1月至2022年12月安康市中心医院择期手术治疗的156例老年脆性腰椎椎体压缩性骨折患者,根据手术治疗方法不同分为观察组(n=78)和对照组(n=78)。观察组采用穿刺针联合PVP手术,对照组单纯采用PVP手术。对比分析两组患者围手术期指标(手术时间、术中出血量、术后下床时间以及住院时间),术前、术后3 d的椎体结构影像学指标,术前、术后3 d、术后6个月的疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分,术前、术后6个月的腰椎功能[日本矫形学学会(JOA)]评分、日常生活能力Barthel指数。结果观察组患者的手术时间为(98.16±11.97)min,明显长于对照组[(85.86±10.5)min],术中出血量、术后下床时间以及住院时间分别为(79.37±18.96)mL、(3.04±0.37)d、(10.41±2.06)d,均明显短于对照组[(184.43±21.25)mL、(4.22±0.43)d、(12.97±2.36)d],差异均有统计学意义(P<0.05)。术后3 d,两组患者的椎体各部位高度均明显高于术前,局部Cobb角均明显低于手术前,且观察组患者的椎体前缘、中部、后部高度分别为(30.69±4.15)、(35.84±3.77)、(38.92±4.86)mm,均明显高于对照组[(26.62±4.27)、(28.97±3.62)、(32.33±4.53)mm],局部Cobb角为(5.41±1.25)°,明显低于对照组[(8.69±1.39)°],差异均有统计学意义(P<0.05)。术后3 d与术后6个月,两组患者的VAS评分均明显低于术前,且观察组患者的VAS评分分别为(2.29±0.24)、(2.18±0.27)分,均明显低于对照组[(3.35±0.41)、(3.07±0.34)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。术后6个月,两组患者的JOA评分与Barthel指数均明显高于术前,且观察组患者的JOA评分与Barthel指数分别为(25.28±2.24)、(84.05±5.97)分,均明显高于对照组[(21.42±2.13)、(55.94±6.28)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论穿刺针联合PVP治疗老年脆性腰椎椎体压缩性骨折虽然手术时间延长,但创伤小且恢复快,能够更有效纠正椎体解剖结构,缓解术后疼痛,提升术后腰椎与活动能力,临床价值更高,更加符合老年脆性腰椎椎体压缩性骨折以及现代医学理念的要求。

hBMP2/hVEGF165双基因腺病毒修饰BMSCs复合n-HA/PA66修复骨缺损影像学观察

[目的]探讨携带h BMP2/h VEGF165双基因重组腺病毒共修饰BMSCs复合多孔n-HA/PA66修复兔桡骨大段骨缺损在不同时相点影像学动态变化和临床影像评估的可靠性。[方法]选取40只成年新西兰大白兔,雄性,体重2.8-3.1 kg,采用完全随机法分为2大组,每组20只,手术制作15 mm双侧桡骨中段骨缺损模型。A1组：左侧骨缺损处不植入任何材料为空白对照组;A2组：右侧骨缺损处植入h BMP2/BMSCs/n-HA/PA 66人工骨材料;B1组：左侧骨缺损处植入BMSCs/n-HA/PA66人工骨材料;B2组：右侧骨缺损处植入h BMP2/h VEGF165/BMSCs/n-HA/PA 66人工骨材料。分别于术后2、4、8、12周进行X线、CT三维重建观察和甲苯胺蓝组织染色观察。[结果]B2组各个时期Lane-Sandhu法X线射线评分均高于其他各组,差异有统计学意义（P〈0.05）,A2组优于B1组（P〈0.05）,A1组最差（P〈0.05）;且CT三维重建骨形成量和组织染色效果均优于同期其他各组。[结论]h BMP2/h VEGF165双基因重组腺病毒共修饰BMSCs复合多孔n-HA/PA66人工骨材料治疗兔大段骨缺损,影像学观察,直观、形象地显示了其持久、稳定、高效的骨修复作用,为基因治疗复合人工骨材料修复骨缺损提供了良好的实验依据。

骨形态发生蛋白2／血管内皮生长因子165转染骨髓间充质干细胞复合多孔纳米羟基磷灰石／聚酰胺66修复兔桡骨缺损

目的评估骨形态发生蛋白2／血管内皮生长因子165（hBMP2／hvEGF165）双基因腺病毒转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）复合多孔纳米羟基磷灰石／聚酰胺66（n—HA／PA66）对骨缺损的修复作用。方法选取60只成年雄性新西兰大白兔，制作15mm双侧桡骨中段骨缺损模型。按完全随机法分为3组，各组20只，根据双侧桡骨制作骨缺损模型，各大组分2小组，共6组。A1组：左桡骨缺损处不植入任何材料为空白对照组；A2组：右桡骨缺损处单纯植入n—HA／PA66人工骨材料；B1组：左桡骨缺损处植入hVEGF165／BMscs／n—HA／PA66人工骨材料；B2组：右桡骨缺损处植入BMP2／BMSCs／n—HA／PA66人工骨材料；C1组：左桡骨缺损处植入BMSCs／n—HA／PA66人工骨材料；C2组：右桡骨缺损处植入hBMP2／hVEGF165／BMscs／n—HA／PA66人工骨材料。分别于2，4，8，12周行x线片、HE和Masson染色观察桡骨缺损修复情况。结果c2组术后8周x线片、HE和Masson染色显示移植部位有大量软骨形成，且在边缘有大量骨组织生成，术后12周可见组织材料被外层骨组织包裹，骨缺损修复效果优于其他组（P〈0．05）；且术后各时相点C2组血管数目均优于其他组（P〈0．05），B1组各时相点血管数均多于B2组（P〈0．05），且两组明显多于A2、c1组（P〈0．05）；A2与c1组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论hBMP2／hVEGF165双基因转染BMSCs复合多孔n—HA／PA66具有明显提高修复兔桡骨干缺损的作用。