基于网络药理学和分子对接技术探讨健脾益肾化痰方对肺癌的作用机制

运用网络药理学和分子对接技术探讨健脾益肾化痰方治疗肺癌的分子机制.通过TCMSP、化学专业数据库收集健脾益肾化痰方的活性成分,并通过PubChem、Swiss Target Prediction数据库获取活性成分的靶点,Gene Cards、Gene、CTD数据库收集肺癌相关靶点,将肺癌相关靶点与健脾益肾化痰方活性成分靶点取交集即为健脾益肾化痰方治疗肺癌的潜在靶点.利用Cytoscape软件构建健脾益肾化痰方干预肺癌的中药复方网络图、STRING数据库构建潜在靶点的蛋白质互作网络、Cytoscape进行可视化、Metascape数据库对健脾益肾化痰方抗肺癌的潜在靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集分析.选取Degree排名前6位的活性成分与靶点分别运用AutoDockTools进行分子对接及可视化.结果筛选到111个健脾益肾化痰方相关活性成分,涉及966个靶点,其中与肺癌相关的靶点有373个.健脾益肾化痰方可能通过β-谷甾醇、豆甾醇、苏齐内酯等核心成分,作用于SRC、MAPK1、ATK1等核心靶点,干预肺癌中肿瘤通路、PI3K-AKT信号通路和肿瘤中的蛋白聚糖等信号通路,参与了细胞迁移的正调控、细胞运动的正调节、细胞成分运动的正调节等生物过程以干预肺癌.表明健脾益肾化痰方可能通过多靶标、多途径干预肺癌.其核心成分可能是β-谷甾醇、豆甾醇、苏齐内酯等.为进一步研究健脾益肾化痰方防治肺癌的机制提供理论支持.

健脾益肾化痰方通过VEGF/PI3K/AKT/FOXO1诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞自噬的实验研究

目的:观察健脾益肾化痰方含药血清对肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖、凋亡、自噬及SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白的影响,探讨健脾益肾化痰方通过上述蛋白诱导肺鳞癌细胞SK-MES-1自噬的可能作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、32.2 g/kg健脾益肾化痰方组,各组分别灌胃生理盐水或药物,连续7 d后收集血清;采用CCK-8法测定人肺鳞癌细胞株的存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3脂质体转染干预肺鳞癌细胞后自噬发生情况;Western Blot法检测对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1细胞Beclin1蛋白和LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白表达的影响。结果:32.2 g/kg健脾益肾化痰方含药血清各浓度组均能够有效抑制肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖,其抑制率与药物浓度呈正相关;与正常对照组相比,32.2 g/kg健脾益肾化痰方16%含药血清组使SK-MES-1细胞凋亡率明显增高(P<0.05);8%、16%含药血清组自噬小体显著增多(P<0.05);16%含药血清组SK-MES-1细胞内自噬相关蛋白Beclin1、LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ表达显著上调(P<0.01);FOXO1蛋白表达显著上调,VEGFR、PI3K、AKT蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:健脾益肾化痰方含药血清能够诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞发生自噬,其作用机制可能是通过调节VEGF/PI3K/AKT/FOXO1信号通路,上调SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3蛋白表达,促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ有关。