lncRNA DGCR5通过靶向调控miR-21抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的探讨lncRNA DGCR5对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法将pcDNA-NC、pcDNA-DGCR5、anti-miR-NC、anti-miR-21质粒分别转染至CNE-1、HNE-1细胞中,记为pcDNA-NC组、pcDNA-DGCR5组、anti-miR-NC组、anti-miR-21组;将pcDNA-DGCR5分别与mimic-NC、mimic-miR-21共转染至CNE-1、HNE-1细胞中,记为pcDNA-DGCR5+mimic-NC组、pcDNA-DGCR5+mimic-miR-21组;采用qRT-PCR检测miR-21和DGCR5的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell、流式细胞术检测CNE-1、HNE-1细胞增殖活性、迁移、侵袭和凋亡;双荧光素酶报告实验检测DGCR5和miR-21靶向调控。结果与癌旁组织和人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞SUNE-1、CNE-2、CNE-1、HNE-1、HONE-1中DGCR5表达水平显著降低(P<0.05),miR-21表达水平显著增加(P<0.05);过表达DGCR5和抑制miR-21表达细胞CNE-1、HNE-1活性、迁移和侵袭数量显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。DGCR5靶向调控miR-21的表达,过表达miR-21能逆转过表达DGCR5对CNE-1、HNE-1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用。结论lncRNA DGCR5可能通过靶向调控miR-21抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡。

过表达circRNA_LARP4对鼻咽癌细胞的肿瘤干细胞样特性和线粒体膜电位的影响

目的探讨过表达circRNA_LARP4(circ_LARP4)对鼻咽癌CNE2和5-8F细胞肿瘤干细胞样特性及线粒体膜电位的影响。方法鼻咽癌CNE2和5-8F细胞转染circ_LARP4过表达载体,qRT-PCR检测circ_LARP4过表达效率。克隆形成实验检测克隆形成率,肿瘤细胞成球实验检测成球数和成球直径,流式细胞术检测线粒体膜电位变化,试剂盒检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western blot检测Ki67、P21、八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)、Nanog、ABCG2、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)的蛋白表达水平。结果与Control组比较,circ_LARP4组CNE2和5-8F细胞中circ_LARP4表达水平显著上调(均P<0.05),克隆形成率显著降低(均P<0.05),成球率和成球直径显著减少(均P<0.05),线粒体JC-1红/绿荧光比显著降低(均P<0.05),Ki67蛋白水平显著下调,p21蛋白水平显著上调(均P<0.05),OCT4、Nanog和ABCG2蛋白水平显著降低(均P<0.05),Bax/Bcl-2显著增高(均P<0.05),SOD含量显著降低,MDA含量显著升高(均P<0.05)。通过Starbase 2.0和dbDEMC2初步筛选出circ_LARP4在鼻咽癌中的可能靶分子miR-135b-5p和miR-195-5p,并初步发现二者可以逆转circ_LARP4对细胞增殖干性和凋亡的影响(P<0.05)。结论过表达circRNA_LARP4能够降低鼻咽癌CNE2和5-8F细胞的肿瘤干细胞样特性及线粒体膜电位。

解聚素-金属蛋白酶17缺失对鼻咽癌细胞活性氧产生及线粒体功能的影响

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloprotease 17,ADAM17)缺失对鼻咽癌细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生及线粒体功能的影响。方法将3组ADAM17基因干扰质粒ADAM17 shRNA及空质粒ADAM17-shRNA-NC转染鼻咽癌细胞株(CNE1),RT-PCR及Western blot法检测干扰效率,选择干扰效果最好的shRNA进行后续试验。CCK-8法检测各组细胞增殖能力;克隆形成试验检测细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况和线粒体膜电位变化;荧光显微镜检测细胞线粒体氧化损伤产物ROS水平;丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测细胞氧化应激标志物MDA和SOD含量;Western blot法检测细胞线粒体损伤标记物Bax/Bcl-2、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3、c-Myc的表达。结果ADAM17-shRNA2组干扰效果最好。与shRNA-NC组相比,ADAM17-shRNA2组细胞的增殖速率明显下降(t=8.964,P=0.036);形成的集落数明显减小(t=10.351,P=0.014);细胞凋亡数量明显增加(t=11.25,P=0.008);细胞内代表ROS水平的荧光强度明显增强;线粒体膜电位明显下降(t=9.233,P=0.013);SOD含量明显降低(t=7.233,P=0.034),MDA含量明显升高(t=7.415,P=0.038);细胞中Bax/Bcl-2、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3的水平均明显升高(t分别为8.985、9.021和7.789,P分别为0.023、0.011和0.031),c-Myc蛋白表达水平明显减少(t=10.352,P=0.004)。结论干扰ADAM17基因表达通过促氧化诱导SOD水平下降,MDA水平升高,进而缓解细胞膜的氧化损伤;同时促进细胞线粒体ROS表达水平,降低线粒体膜电位,体外抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

多层螺旋 CT薄层扫描和后处理重建在眼外伤致眼眶壁骨折诊断中的应用

目的：探讨眼外伤致眼眶壁骨折采用多层螺旋CT薄层扫功和后处理重建的诊断价值。方法选取眼外伤致眼眶骨折患者40例，均为邢台市人民医院2013年4月至2014年4月收治，应用东芝Aquilion64排螺旋CT机完成薄层扫描，并通过vitrea工作站行三维后处理重建。结果本次选取患者40例，直接骨折12例，爆裂骨折18例，复合骨折10例。共有骨折50处，其中视神经管及眶尖骨折3处，眶内侧壁23处，眶外侧壁7处，眶上壁10处，眶下壁7例。骨折范围：单壁18例，双壁12例，三壁7例，四壁3例；领近骨折：合并颧弓骨折9例，额骨眶板骨折5例，鼻骨骨折10例，筛板骨折4例，面骨骨折14例，鼻突骨骨折28例，蝶骨小翼骨折3例。观察眼眶周围软组织和球后肌、视神经、眼外肌等情况，眼外肌移位增粗17例，眼睑及颜面眶周肿胀34例，筛窦积血20例，泪滴征9例，在眶内积气9例，球后挫伤8例，球内异物1例，眼球皮裂3例。结论眼眶骨折目前诊断方法中，螺旋CT重建技术为理想手段，应用多层螺旋CT后处理重建，可使诊断眼眶骨折的水平提高，对三维立体空间中眼眶壁骨折的实际形态、位置、大小，与周围解剖关系或直观了解，为治疗方案的制定提供可靠依据，以促使预后改善，并可用作司法鉴定。