中国脊髓灰质炎病毒疫苗株基因特征及其神经毒力的初步观察

中国脊髓灰质炎（脊灰）病毒疫苗株普遍存在基因变异的现象，如重组、点突变等〔１〕。我们选出１０株有代表性的变异株，在具有人脊灰病毒受体基因的转基因小鼠ＰＶＲ－Ｔｇ２１〔２〕中做毒力分析，发现Ｓａｂｉｎ１基因型（ＶＰ１）与野毒基因型（３Ｄ）的重组株显示很强的神经毒力，其ＰＤ５０ｉｎＴＣＩＤ５０（简称ＰＤ５０）值为４．５，而Ｓａｂｉｎ１标准株的ＰＤ５０值大于８．０。另外两株Ⅰ型疫苗株只在关键性核苷酸位点发生突变，只在位点５２５－Ｕ发生突变的一株，其ＰＤ５０值为５．０，另一株在位点４８０－Ｇ及２７９５－Ａ突变，其ＰＤ５０值为５．８，均显示较强的神经毒力。一株Ｓａｂｉｎ２基因型（ＶＰ１）与Ｓａｂｉｎ３基因型（３Ｄ）的重组株，其神经毒力（ＰＤ５０≥５．９）亦明显高于Ｓａｂｉｎ２标准株（ＰＤ５０＞７．５）；而１株Ｓａｂｉｎ２基因型（ＶＰ１）与（Ｓａｂｉｎ１＋Ｓａｂｉｎ２）基因型（３Ｄ）重组株的神经毒力（ＰＤ５０＝７．５０）无明显提高。对Ⅲ型疫苗株的神经毒力分析发现，１株Ｓａｂｉｎ３基因型（ＶＰ１）与Ｎｏｎ－Ｓａｂｉｎ基因型（３Ｄ）重组株的神经毒力，高于仅在核苷酸位点４７２－Ｕ突变的一株疫苗株。值得提出的是，另一株Ⅲ型疫苗?

中国脊髓灰质炎病毒中Ⅱ_（17）和中Ⅲ＿2疫苗株部份基因序列的分析

对中国脊髓灰质炎Ⅱ型减毒活疫苗株──中Ⅱ１７和Ⅲ型减毒活疫苗株──中Ⅲ２的ＶＰ１段部份核酸片段进行序列分析，并分别与相应的Ｓａｂｉｎ２和Ｓａｂｉｎ３株有关片段的核苷酸序列进行比较。在４１６个核苷酸序列中，中Ⅱ１７与Ｓａｂｉｎ２有９９．３％同源性，中Ⅲ２与Ｓａｂｉｎ３株完全一致。从我国服用国产活疫苗地区急性弛缓性麻痹病例中分离到的部份２型疫苗株，分别与中Ⅱ１７和Ｓａｂｉｎ２相比较，发现与中Ⅱ１７株更为近缘，海南、山东、湖南株分别只有０、１或２个核苷酸的改变。

中国脊髓灰质炎病毒疫苗株基因变异的分析

从急性弛缓性麻痹（ＡＦＰ）病例分离的３２株脊髓灰质炎（脊灰）病毒，在ＷＰ１编码区，经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法鉴定，并经核酸测序进一步证实为疫苗株。其中５株为Ⅰ型疫苗株，１６株Ⅱ型疫苗株，１１株Ⅲ型疫苗株。以同样的分析方法检测这些毒株基因组的３Ｄ聚合酶编码区，发现２株Ⅰ型疫苗株在３Ｄ区的４３１个核苷酸序列为野毒序列，即这２株为Ｓａｂｕｎｌ因型（ＶＰ１）与野毒基因型（３Ｄ）重组株；其余３株Ⅰ型疫苗株未发现基因重组，１６株Ⅱ型疫苗株中１１株为Ｓａｂｉｎ２基因型（ＶＰ１）与Ｓａｂｉｎ３基因型（３Ｄ）重组株，３株为Ｓａｉｂｎ２基因型（ＶＰ１）与（Ｓａｂｉｎ１＋Ｓａｂｉｎ２）基因型（３Ｄ）重组株，其余２株未发现基因重组。１１株Ⅲ型疫苗株中只有１株发生重组，为Ｓａｂｉｎ３基因型（ＶＰ１）与Ｎｏｎ－Ｓａｂｉｎ基因型（３Ｄ）重组株。另外，对５＇末端非编码区与神经毒力相关的关键位点（Ⅰ型的４８０－Ｇ和５２５－Ｕ，Ⅱ型的４８１－Ａ及Ⅲ型的４２２－Ｕ）基因的检测发现，５株Ⅰ型疫苗株中，１株在位点５２５－Ｕ突变，碱基Ｃ置换Ｕ；３株在位点４８０－Ｇ突变，碱基Ａ置换Ｇ；另１株未发现突变。１６株Ⅱ型疫苗株均在位点４８１－Ａ突变，碱基Ｇ置换Ａ。

用L-hCAR细胞选择性地分离柯萨奇B组病毒

为研究L -hCAR细胞对柯萨奇B组病毒 (CoxsackievirustypeB ,Cox B)的敏感性和特异性 ,以及用L -hCAR细胞从粪便标本中分离Cox B的情况 ,将 43个肠道病毒标准株同时接种于Hep -2和L -hCAR细胞 ,在L -hCAR细胞上只有Cox B增殖。分别用Hep -2及L -hCAR细胞对Cox B 1～ 6型标准株进行滴定 ,两种细胞上的病毒滴度无显著性差异。在病毒分离试验中 ,用 94个已知为非脊髓灰质炎肠道病毒的粪便标本分别接种于Hep -2和L -hCAR细胞 ,在 14天的观察期间内 ,共有8份粪便标本在L -hCAR细胞上产生细胞病变效应。经鉴定 ,8份均为Cox B。结果表明L -hCAR细胞对Cox B敏感且特异 ,能用L -hCAR细胞选择性地从粪便标本中分离Cox