用嗜肝DNA病毒模型筛选抗病毒中草药

对叶下珠等２１种中草药进行抗乙肝病毒药物研究，通过体外及体内逐步筛选发现，叶下珠和虎杖提取物对鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）及乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）均有较好的抑制效果，旱莲草对ＨＢＶＤＮＡｐ有一定的抑制作用。

中草药抗鸭乙型肝炎病毒的效果

采用鸭乙型肝炎动物模型对叶下珠、虎杖、五味子等中草药乙醇提取物进行了抗嗜肝DNA病毒效果评价。将一日龄北京鸭注乙肝病毒后随机分组,每组给予不同剂量药物,分别在给药前To、给药7天(T7).给药15天(T15)和停药后7天(P7)等不同时间,取血测定血清中DHBVDNA.对照组以生理盐水代替药物。结果显示出这些药物均有不同程度的抗DHBV治疗效果.尤以叶下珠为好.呈现出剂量反应关系;将这些药物联合作用.结果显示出比单味药有更好的治疗效果。

叶下珠对乙型肝炎病毒结构与复制的影响

采用叶下珠(Phyllanthus,urinaria)乙醇提取物进行了药物对乙型肝炎病毒(HBV)抗原抗体结合抑制试验、病毒DNA聚合酶抑制试验以及在2.2.15细胞培养中对乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达抑制试验和DNA复制抑制试验,结果叶下珠提取物对上述指标均有不同程度的抑制作用,提示叶下珠为一潜在的抗HBV药物。

抗嗜肝DNA病毒中草药的体外快速筛选

采用测定鸭乙型肝炎病毒未成熟核心颗粒复制复合体中内源性DNA多聚酶(DHBV RCs DNAp)及HBV DNAp的方法,对叶下珠等中草药提取物进行了对DNAp的抑制试验;同时采用测定抑制HBsAg与抗-HBs结合方法,观察药物提取物对HBsAg的灭活能力。结果显示出:①叶下珠提取物对DHBV RCs DNAp有较强体外抑制作用,在浓度为1mg/ml、0.1mg/ml和0.01mg/ml时其抑制率分别为72.6％、45.6％和5.2％,而其它药物抑制作用较弱或无抑制作用;②叶下珠、旱莲草和虎杖提取物对HBV DNAp有体外抑制作用,在浓度为1mg/ml时,抑制率分别为67.6％、65.5％和79.9％。③虎杖、大黄、夏枯草、金钱草、旱莲草和叶下珠等中草药提取物对HBsAg有较强的体外抑制能力,在浓度为10mg/ml时对HBsAg与抗-HBs结合的抑制率分别为97.6％、93.8％、84.5％、82.1％、83.2％和73.3％,并且抑制率与药物浓度间有剂量应答。

中草药的抗鸭乙型肝炎病毒效果及其联合作用

本文采用鸭乙型肝炎动物模型对叶下珠、虎杖、五味子等中草药乙醇提取物进行了抗嗜肝DNA病毒效果评价。一日龄北京鸭静脉注射鸭乙型肝炎病毒(DHBV)。七日后血清可检测出DHBV DNA,随即将动物随机分组,每组给予不同剂量药物,口服给药,一日两次,分别在给药前(T0)。

影响慢性乙型肝炎患者表面抗原阴转的因素

用自制的叶下珠(P.urinria)复方醇提取物对69例CHB患者进行临床治疗,并设对照组46例进行比较,结果显示服药组HBsAg阴转显著高于对照组(P<0.05)。进而探索性别、年龄、临床型别、乙型肝炎病毒(HBV)e抗原/e抗体系统以及重叠HCV、HDV或HEV感染对HB-sAg阴转的影响,结果显示出女性患者少而HBsAg阴转率高;药物对小年龄组HBsAg阴转的影响大;CPH患者易于转阴;当HBeAg存在时不利HBsAg阴转,而当抗-HBe存在时HBsAg易于阴转;115例CHB患者HCV、HDV、HEV与HBV的重叠感染率分别为2.6％、9.6％和2.6％,重叠HCV、HDV或HEV感染者未显示出有利于CHB患者HBsAg阴转。

乙型肝炎病毒前S1抗原检测方法及其临床意义探讨

用乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｓ１蛋白合成肽（２１￣４７ａａ）免疫家兔制备多克隆兔抗前Ｓ１抗体，建立前Ｓ１抗原ＥＬＩＳＡ检测方法，对前Ｓ１蛋白合成肽的最低检出限为０．１μｇ／Ｌ，可测到２．５×１０＾５个／ＬＤａｎｅ颗粒。

HBV感染者血、尿和唾液中前S1抗原检测

目的 探讨前S1抗原在HBV感染者血液、尿液和唾液中的存在情况及其与其它标志物的关系。方法 分别收集81例乙肝患者血液 81份、尿液 6 3份、唾液 6 7份及 73例无症状HBsAg携带者的血液、尿液和唾液标本各 73份 ,采用ELISA法检测HBsAg、HBeAg、前S1抗原和前S2抗原 ;用斑点杂交法测HBV -DNA。结果 前S1抗原在血液、尿液和唾液中的检出率分别为 6 7 5 %、2 7 2 %和 2 2 1% ,乙肝患者各指标的检出率均高于无症状HBsAg携带者。 结论 前S1抗原可在乙肝患者和无症状HBsAg携带者的血液、尿液和唾液中检出 。

前S_1蛋白在乙型肝炎诊断、治疗和预后中的作用

目的:评价前S_1蛋白在乙型病毒性肝炎早期诊断、疗效及预后等方面的作用。方法:用乙型肝炎病毒(HBV)前S_1合成肽及其免疫血清建立前S_1抗原和抗体ELISA检测方法,分别检测219份急性乙型肝炎(AHB)患者(44例)系列血清、535份慢性肝炎患者及HBsAg携带者系列血清和63份HBsAg阳性患者血清。HBV DNA检测采用核酸斑点杂交法和PCR法,其余指标检测采用ELISA法。结果:前S_1抗体在血液中存在时间短暂,前S_1抗原阴转越早、前S_1抗体阳转越早,AHB患者的病程越短、预后越好。结论:前S.抗体有可能成为AHB的早期诊断指标;前S_1抗原为反映HBV复制和抗HBV疗效的一个敏感指标。

前S_1抗原-乙型肝炎病毒的传染性标志

通过临床和流行病学研究探讨前Ｓ１抗原作为乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）一个传染性指标的意义。采取整群抽样和随机抽样方法收集血清１４４９份。ＨＢＶ—ＤＮＡ检测采用核酸斑点杂交法和ＰＣＲ法，其余指标测定采用ＥＬＩＳＡ法。结果显示，前Ｓ１抗原与ＨＢｅＡｇ同时在乙型肝炎患者血清中消失，它只能在ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性血清中检出；前Ｓ１抗原阳性传播ＨＢＶ的危险性高于前Ｓ１抗原阴性的乙型肝炎患者和无症状ＨＢｓＡｇ携带者，其家庭成员感染ＨＢＶ的危险性也比较高。提示，前Ｓ１抗原为一个反映ＨＢＶ复制和传染性的指标。

无症状HBsAg携带者血液、尿液和唾液中前S1抗原检测分析

目的 :探讨前S1抗原在无症状HBsAg携带者血液、尿液和唾液中的存在情况及其与其它指标的相互关系。方法 :收集 73例无症状HBsAg携带者的血液、尿液和唾液标本各 73份 ,采用ELISA法检测HBsAg、HBeAg、前S1抗原和前S2抗原 ;用斑点杂交法测HBV -DNA。结果 :前S1抗原在血液、尿液和唾液中的检出率分别为 5 8 9%、16 4%和 10 9% ,可以和HBeAg及前S2指标互相替换 ,血清中前S1抗原检出率高于尿液和唾液标本。结论 :前S1抗原可在无症状HBsAg携带者的血液、尿液和唾液中检出 ,是反映乙型肝炎传染性的一项很有意义的指标。

用鸭乙型肝炎病毒感染试验评价人乙型肝炎病毒灭活效果的研究

在所试剂量下，煮沸、戊二醛与二氯异氰尿酸钠均可使ＤＨＢＶ与ＨＨＢＶ形态及其ＤＮＡ－Ｐ破坏，使ＤＨＢＶ对雏鸭的感染性灭活；但除用二氯异氰尿酸钠处理外，均不能将其ＤＮＡ与表面抗原完全破坏。结果表明，用ＤＨＢＶ雏鸭感染法进行消毒试验，可间接，但较准确反映出对ＨＨＢＶ的灭活效果。本试验与其他标志物试验相比，较易推广。

乙肝散治疗慢性乙肝的临床和实验研究

以清热解毒、健脾化湿两法组成纯中药制剂乙肝散,治疗慢性乙型肝炎40例,并与齐墩果酸片随机对照,结果发现:治疗组病人除临床症状、体征、肝功能以及蛋白代谢等获得明显改善外,乙肝散对乙型肝炎病人HBeAg有较好的转阴作用,与对照组相比有显著差异(p<0.05)。体外试验采用由乙型肝炎病毒(HBV)DNA克隆转染人肝细胞(HePG_2)的2.2.15细胞系,对其进行乙型肝炎病毒HBsAg和HBeAg表达抑制的研究结果显示:乙肝散对HBeAg表达具有较明显的抑制效果,IC_(50)为656.95±40.19μg/ml,治疗指数为5.34±0.23,在各个不同剂量组均有不同程度的效果,呈现出剂量反应关系。

前S1蛋白与乙型肝炎病毒传染性关系的病例对照研究

随机选择２４例前Ｓ１抗原阳性慢性乙型肝炎患者为病例组、２２例前Ｓ１抗原阴性慢性乙型肝炎患者为患者对照组、１６例无症状ＨＢｓＡｇ携带者为携带者对照组。检测其家庭共同生活成员乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染情况。结果表明：病例组家庭成员ＨＢＶ感染率，ＨＢｓＡｇ、ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｃＩｇＧ３阳性和ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｅ、抗ＨＢｃＩｇＧ３阳性检出率均高于对照组，而且病例组家庭内ＨＢＶ感染危险度也大于对照组，比值比（ＯＲ值）分别为５．０和６．４，两对照组间未见差别。说明前Ｓ１蛋白是ＨＢＶ传染指标之一。

乙肝患者血液、尿液和唾液中平行检出前S1抗原

为探讨前Ｓ１抗原在乙型肝炎患者血液、尿液和唾液中的存在情况及前Ｓ１抗原与其它标志物的关系。本文收集了８１例乙型肝炎患者的血液８１份、尿液６３份和唾液６７份，采用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、前Ｓ１抗原和前Ｓ２抗原；用斑点杂交法测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果显示前Ｓ１抗原在血液、尿液和唾液中的检出率分别为７５．３％、３９．７％和３４．３％，与其它指标平行存在，血清中前Ｓ１抗原滴度与尿液及唾液中前Ｓ１抗原检出率呈正相关。提示前Ｓ１抗原可在乙型肝炎患者的血液、尿液和唾液中检出，与ＨＢｅＡｇ、前Ｓ２抗原和ＨＢＶ－ＤＮＡ良好相关。

合成抗菌肽对大肠杆菌的体外抑制作用

目的 观察不同浓度抗菌肽在不同时间内对大肠杆菌体外抑制和杀灭作用。方法 将2种不同浓度的抗菌肽分别加到1×105 cfu.mL-1大肠杆菌菌液中,振荡培养0.5～6 h, 其中取5个时间段菌液,一部分培养后进行细菌计数,另一部分放入肉汤中继续培养,16h后测定不同时间段的A值。结果 在细菌浓度一定,加入抗菌肽200 mmol.L-1,作用时间为0.5,6 h时,A值分别为0.15,0.63。加入抗菌肽400 mmol.L-1,作用时间0.5～6 h时,A值为0.002～0.001,对照组A值为0.98。结论 抗菌肽杀菌效果与抗菌肽和细菌量有关,抗菌肽活性分子足够量才能杀死细菌,未受到抗菌肽作用的菌体能继续分裂繁殖。

乙型肝炎病毒前S1抗原检测方法及其临床意义探讨(摘要)

目的建立乙型肝炎病毒前S1抗原ELISA诊断方法并探讨其临床意义。方法用前S1合成肽免疫家兔制备兔抗前S1抗体，建立前S1抗原ELISA检测方法，检测1590份各型乙型肝炎患者和健康人血清。结果本方法最低检出限为0．1μg／L（2．5×105个／LDane颗粒）。用兔抗前S1可以特异性地抑制抗原与抗体的结合。批内变异和批间变异的变异系数均不超过0．15。前S1抗原检出率以慢性活动性乙型肝炎最高。急性乙型肝炎中，前S1抗原与HBeAg平行存在，比HBsAg消失早，与HBV－DNA相关性高。结论本方法具有较高的灵敏度、较好的特异性、可靠的精密度，可作为病毒复制与传染性的标志。

急性乙型肝炎前S_1抗原及抗体的测定及临床研究

前S1蛋白是由乙型肝炎病毒（HBV）DNA的前S1区编码的多肽,它与前S2、HB-sAg均为HBV外壳的重要组成部分,目前对HBsAg、前S2抗原及抗体的研究比较多,但限于试剂来源,对前S1抗原抗体的检测及报告较少,本文仅就急性乙型肝炎的前S1系统测定报告如下,并初步分析其临床意义。

THE ROLE OF RECOMBINANT HUMAN FUSION PROTEIN IL－6／IL－2（CH925） IN HEPADNA VIRUS INFECTION TREATMENT

The effects of CH925, a novel immune modulator, on hepadna virus infection was evaluated. Day-old ducklings were inoculated intravenously with LJ-76 DHBV containing serum. Infected ducklings were then treated with the CH925 and the mixture of IL-2 and IL-6 intravenously and the control ducklings received equivalent normal saline (NS). Blood and liver samples were taken and assayed for DHBV DNA and /or DHBsAg. At the completion of the experiment there was a inhibition of viremia with the CH925 and IL-2 + IL-6. Serum DHBV DNA was detected in 6 of 10 ducks in 100 000 unit/kg dosage group, 7 of 10 ducks in 50 000 unit/kg dosage group and 6 of 10 ducks in IL-2 + IL-6 dosage group, compared with 9 of 10 NS control, and it showed a similar result in circulating DHBsAg. When samples of liver DNA were processed for hybridization, a little difference in the DHBV DNA replication was noted between ducks receiving CH925, IL-2 + IL-6 or NS placebo. It is suggested that CH925 might be a potential remedy in HBV infection treatment.

EXPRESSION OF HBV PRE S1 PEPTIDE INE. Coli AND PRODUCT CHARACTERIZATION

HBV Pre S1 sequence is supposed to play an important role in the infection of HBV. Presence of Pre S1 /anti-Pre S1 in serum has valuble clinical imphations. In order to improve the study of Pre S1, Pre S1 sequence was overexpressed in E. coli as a fusion protein with MBP (Maltose- binding Protein), and anti-Pre S1 antiserum was elicited in rabbits by Pre S1 MBP purified by affinity chromatography. The recombinant plasmid constructed from PMAL-cRI expressed the 106aa Pre S1 sequence at the C terminal of MBP by tac promoter. The resulting Protein is about 54kD in size. Western-blot analysis confirmed its reactivity with antiserum derived from synthetic Pre S1 peptide and serum from patients with acute hepatitis B (AHB). ELISA showed that Pre S1-MBP and Dane Particles purified from AHB patient’s serum reacted with antiserum against synthetic Pre S1 peptlde,and this reaction was specifically inhibited by synthetic Pre S1 peptide. ELISA also demonstrated that antiserum against Pre S1-MBP reacted with synthetic Pre S1 peptide, but not with synthetic HCV peptide or HEV peptide.