新城疫病毒HN基因构建的核酸疫苗抗肿瘤作用研究

目的 :探讨HN基因在NDV抗肿瘤上发挥的作用。方法 :以pVAX1为表达载体构建了含NDVHN基因的pVHN核酸疫苗 ,以脂质体介导方法在体外转染OS732细胞 72h后 ,用 3,5 二羟基甲苯法测定OS732细胞膜唾液酸含量的变化。 6周龄BALB/c鼠左后肢皮下接种 2× 10 6个S180肿瘤细胞 ,分别于肿瘤接种后的第 7天 (肿瘤直径为 2～ 3mm)和第 17天瘤内注射 10 0 μg核酸重组体 ,同时设pVAX1对照组和单纯荷瘤对照组。荷瘤鼠经治疗后框窦采血 ,分离血清 ,测定血清唾液酸含量。取脾 ,采用FACS方法测定淋巴细胞亚群数量的变化。结果 :pVHN体外转染OS732细胞后 ,能显著降低细胞表面唾液酸含量 (P <0 .0 5 )。pVHN应用于荷瘤鼠显著降低血清中唾液酸含量 (P <0 .0 5 ) ,引起CD8+ T淋巴细胞亚群数量的增加 (P <0 0 5 )。结论 :单独HN基因在体外转染能够降低肿瘤细胞表面唾液酸含量 ,体内表达后引起T淋巴细胞亚群数量改变。

pVVP3和pVHN核酸疫苗的构建、表达及对肿瘤细胞的作用

用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性 .RT PCR、DNALadder、TUNNEL染色检测VP3基因的表达及表达产物诱导OS732细胞凋亡作用 .酶切鉴定证实成功地构建了两个核酸疫苗 ,并能在真核细胞内表达 .含HN的核酸疫苗pVHN表达后具有血凝活性并致肿瘤细胞表面唾液酸含量降低 (P <0 0 5 ) .pVVP3的转染能导致OS732细胞凋亡 ,凋亡率可达87% .试验结果表明 。

物流信息技术专业学生职业核心能力培养

本文从物流信息技术专业的学生职业核心能力进行分析,探索了物流信息技术专业生产性校企合作模式,并对生产性校企合作培养物流信息技术专业学生职业核心能力进行研究,对初步实施的效果做出分析,思考今后的发展对策,为同类高职院校的生产性实训教学提供了有益的借鉴经验。

联合应用新城疫病毒及其HN基因对小鼠黑色素瘤抑制效应的研究

背景与目的尽管新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)对多种肿瘤具有抑制作用,但其抑瘤机制尚不完全清楚。以前的研究结果表明,该病毒的血凝素神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)基因在该病毒的抗肿瘤作用上发挥重要作用且HN蛋白表达后能够定位于肿瘤细胞膜上,以HN蛋白作为肿瘤细胞的外源抗原来研究其抑瘤作用尚未见报道。本研究拟探讨HN蛋白作为外源抗原在新城疫病毒抗肿瘤的作用以及二者联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应。方法在C57BL/6小鼠右后肢皮下接种B16黑色素瘤细胞2×105个。荷瘤第2天左后肢肌肉注射含新城疫病毒HN基因的重组质粒,荷瘤第7天,瘤内注射新城疫病毒2×109pfu;同时设单独HN基因或NDV治疗组及注射PBS的对照组。通过抑瘤率观察动物体内的抑瘤效果;通过特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyteCTL)实验,ICAM-Ⅰ、CD48及新城疫病毒HN蛋白在肿瘤细胞表面表达检测,探讨HN蛋白所介导的抑瘤作用。结果联合应用新城疫病毒及该病毒HN基因对肿瘤的抑制效果明显好于单独HN基因及新城疫病毒,抑瘤率达82.8%,特异性CTL反应增强,对靶细胞的杀伤率为18.4%;单独HN基因及新城疫病毒治疗组的抑瘤率分别为56.6%、41.0%,特异性CTL活性分别为4.4%、10.1%;

专业课程教学应与职业核心能力的培养有效结合

0、引言 随着职业教育的发展,要服务经济社会发展的需求,必须对职业教育目标,对职业人才规格的准确把握,传统职业教育强调单一专业技能的培养,已不适应现在社会对人才的需求。职业核心能力是人们职业生涯中除岗位专业能力之外的基本能力,它适用于各种职业,能适应岗位不断变换,是伴随人终身的关键能力、基础能力和可持续发展能力,在当今社会,

高校物联网实训室建设与应用

物联网专业人才培养需要建设物联网实训室。在高校物联网实训室建设时必须对接行业,走行业特色之路,培养行业所需的特色人才。

RFID信息安全策略分析

由于RFID系统涉及到电子标签(以下称标签)、识读器、互联网、数据库系统等多个对象,其安全性问题也显得非常复杂,文中针对RFID应用存在的信息安全问题主要存在于标签、无线通信、互联网络和数据这四个层面。

试论体验教学法在《网络营销》课程中的运用

《网络营销》是一门基于网络平台实践性较强的电子商务专业课程,学生只在课堂进行理论学习是无法完全理解和掌握实际操作的技术。体验即营销!进入体验经济时代,传统式营销将逐渐被体验式营销所代替。网络营销是一个实践的过程,网络营销即体验营销!体验的过程就是实践的过程,利用体验的过程可以培养学生的实践能力。在教学过程中采用了体验式教学方法仅提高学生的实践能力,而且还发展学生的创造性思维,效果很好。

基于SNIFFER的计算机网络攻防安全实验设计

本文针对目前高校计算机网络安全技术教学的缺陷,通过基于Sniffer进行攻防实战来设计计算机网络安全技术实验教学,并提出网络攻防安全策略。

对接物流行业特色高职物联网应用技术专业人才培养的研究与实践

本文分析了高职院校物联网技术人才培养的特点,以湖南现代物流职业技术学院物联网应用技术专业人才培养为例,提出了对接行业特色的高职物联网应用技术专业人才培养思路,走行业特色之路,培养行业所需的特色人才。

基于RFID技术的供应链优化策略

文中探析了射频识别技术对供应链的管理透明度的影响,实现供应链管理最为敏捷的协同与集成,并针对在供应链环境下RFID技术所发挥的能效,提出了在供应链各个环节优化的策略。

基于“螺旋式创新”模式的高职特色教材开发研究——以《物流信息技术与应用》为例

高等职业教育在我国高等教育中占有半壁江山,是我国职业教育人才的主要孵化器,对我国的职业技能教育和人才培养起着不可替代的作用,但是现在高职的教材与职业教育的属性存在着巨大的偏差。本文以《物流信息技术与应用》国家级"十二五"规划教材开发为例,探索了"螺旋式创新"模式的高职特色教材开发研究,取得了相应的成效。

条码是贴在企业CRM上的标签

随着条码技术在制造行业、流通行业及物流行业的广泛应用,越来越多的企业对条码的应用进行了深度的思考。本文根据企业运作的实际,在分析传统CRM优缺点的基础上,提出了使用条形码与CRM集成的解决方法。

新城疫病毒(昌黎株)F蛋白基因的克隆和序列分析

以鸡胚尿囊液繁殖的新城疫病毒 (昌黎株 ) ,经差速离心浓缩后 ,提取 RNA,参考国外发表新城疫病毒 F基因序列 ,设计并合成了一对长度皆为 2 6 bp特异性引物。经 RT- PCR扩增出 NDV昌黎株部分 F基因序列 ,将其插入本室构建的 Fp KS(- ) ,进行序列测定。序列分析表明该部分 F基因长度为810 bp,编码 2 6 7个氨基酸 ,有 4个半胱氨酸残基和 2个糖基化位点 ,裂解位点区 (112 - 117)氨基酸序列为 R- R- Q- K- R- F,与所有强毒株在这一区域的序列 (R/ K- R- Q- R/ K- R- F)相符 ,证明

RTK在矸石山1:5000地形图测量中的应用

矸石山地区地形复杂,常规方法测量地形图比较困难,采用载波相位差分技术(),既能加快观测速度, RTK又能保证精度要求。

从事航测外业控制工作的体会

航外控制测量是为航内加密,测图提供准确、完整、清晰的象片控制点(以下简称象控点)成果资料,以保证成图的质量和出图的周期,文中就象片控制点的布设及刺点,实践中遇到的问题做一些分析,并提出了改进方法。

新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤的治疗

目的 :寻求有效的肿瘤基因治疗方法 ,研究新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因在无胸腺裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法 :建立BALB/c裸小鼠荷人结肠癌模型 ,瘤内注射脂质体包裹的真核重组子 pVHN和pVVP3。观测 pVHN和pVVP3治疗荷HCT裸鼠的效果 ,免疫组化法检测肿瘤细胞Bcl 2和PCNA的表达。结果 :经HN基因和VP3基因联合治疗组的小鼠与荷瘤对照组小鼠相比 ,肿瘤体积明显缩小 ,抑瘤率可达 70 %。病理组织切片表明 ,治疗组裸鼠体内肿瘤细胞大量凋亡 ,局部地方可见细胞消失。免疫组化表明 ,Bcl 2和PCNA蛋白在荷HCT裸鼠对照组与各治疗组均有表达 ,其中Bcl 2表达在荷瘤对照组与pVHN治疗组差异有显著意义 (P <0 .0 5 ) ,PCNA表达在荷瘤对照组与 pVHN +pVVP3治疗组差异极其显著 (P <0 .0 1)。结论 :NDVHN基因与凋亡素VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤细胞的增殖有一定抑制作用 ,可诱导其凋亡 ,其凋亡可能与下调Bcl 2表达有关。

联合应用凋亡素基因、新城疫病毒HN基因及IL-18基因对黑色素瘤的抑制效应研究

以前的研究结果表明，来自于鸡贫血病毒的凋亡素基因、来自于鸡新城疫病毒的HN基因和IL-18基因具有不同的抗肿瘤效应，但上述基因抗肿瘤的机制不同，本研究在双启动子真核表达质粒pIRES中的CMV启动子下游插入凋亡素基因，IRES启动子下游插入IL-18HN嵌合基因，构建能同时表达三种基因的真核表达质粒pIRVP3IL-18HN。复制C57BL／6小鼠荷黑色素瘤模型，并将质脂体包裹的重组质粒进行瘤内注射，共注射3次，每次100μg质粒，拟观察凋亡素、新城疫病毒HN基因和IL-18基因以核酸疫苗的形式联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应。结果显示pVIL-18HN、pVlL-18和pVVP3IL-18均有抑制肿瘤作用，但pIRVP3IL-18HN组抑瘤率高于pVIL-18HN组、pVIL-18VP3组、pVIL-18组和Hanks液对照组。研究结果提示，上述3种基因联合应用具有协同抑瘤效应。

新城疫病毒F基因在新型杆状病毒表达系统中的表达及重组病毒的免疫原性

将新城疫病毒 (四平株 ) F基因插入到 p Fast Bac 质粒中 ,构建了重组质粒 p FF。 p FF转化大肠杆菌 DH10 Bac后 ,F基因在助手质粒 (helper plasmid)提供转座酶的情况下 ,通过转座进入 Bacmid,构建了重组 Bacmid(re- Bacmid)。在含有 X- gal/ IPTG、庆大霉素、卡那霉素和四环素的琼脂平板上 ,筛选白色菌落后 ,提取 re- Bacm id转染 Sf- 9昆虫细胞。在昆虫细胞内 ,re- Bacm id经复制、表达、装配 ,形成重组杆状病毒 ,并表达 F蛋白。经 SDS- PAGE和 Western- blot分析 ,表达的 F蛋白的分子大小为 6 30 0 0 ,并证明在昆虫细胞内表达的蛋白能部分糖基化。表达的 F蛋白约占细胞总蛋白的 10 %。动物试验证明 。

新城疫病毒(青岛株)F蛋白基因的克隆和序列分析

参考新城疫病毒 ( NDV)长春株的 F基因序列设计了 1对特异性引物 ,应用 RT-PCR对 NDV青岛株(野毒 )的 F基因进行了扩增 ,扩增产物克隆后测序。扩出的 F基因核苷酸长度为 792 bp,编码 2 6 1个氨基酸 ,包括完整的 F2片段和部分 F1片段。裂解位点区 ( 1 1 2～ 1 1 7aa)氨基酸序列为 Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Phe,与国外发表的强毒株序列相符 ,证明青岛株为强毒株。根据该基因推导的氨基酸序列 ,与国内外发表的 NDVF蛋白氨基酸序列相比 ,同源性为 88.1 %～ 94 .3%。