双抗TMV+CMV辣椒转基因工程植株的再生及抗病毒鉴定

在构建 Ｔ Ｍ Ｖｃｐ 和 Ｃ Ｍ Ｖｃｐ 双价表 达载体和 建立 辣 椒高 效转 化 体系 的基 础 上用 农杆 菌 介导法转化 辣椒栽培 品种农 大４０ 和湘 研一号。 对５２ 个抗 卡那霉 素再生植 株进行点 杂交 鉴定 ，结果 １６株为 Ｔ Ｍ Ｖｃｐ 和 Ｃ Ｍ Ｖｃｐ 阳 性，而 Ｐ Ｃ Ｒ 检测发 现 其中 有 ２ 株 为假 阳性 株。 进一 步 温室 攻毒 试 验 表明有７ 个 阳性转基 因植株 对 Ｔ Ｍ Ｖ 和 Ｃ Ｍ Ｖ 同时表 现为免疫 。

黄瓜花叶病毒壳蛋白基因转化辣椒及其在转基因株后代的表达

借助二元Ｔｉ载体系统，用农杆菌（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）与子叶外植体共培养，进行黄瓜花叶病毒壳蛋白（ＣＭＶｃｐ）基因转化三个辣椒品种的工作。经过抗卡那霉素的筛选和再生培养，得到转基因株。转基因株叶的切片在含卡那霉素的培养基上表现明显的抗性。经过对后代植株的ＤＮＡ和ＲＮＡ分子杂交以及蛋白质ＥＬＩＳＡ检测表明转基因株后代染色体上带有ＣＭＶｃｐ基因，后者在叶片中表达出ＣＭＶｃｐ。经过对表达植株叶面接种ＣＭＶ病毒，表现出明显的抗ＣＭＶ病毒的性能。

辣椒子叶离体培养再生植株

随意收集到的８个商品辣椒品种的子叶外植体在ＰＤ培养基上形成芽丛，转移到ＰＥ培养基上伸长为具２～３个节的茎芽，茎芽在ＰＲ培养基上生根，得到了再生植株。芽分化率达１００％，移栽成活率１００％。外植体切除芽后回到ＰＤ培养基上的反复操作可重复诱导芽的分化，提高繁殖系数。

双抗TMV+CMV辣椒转基因工程植株的再生及抗病毒鉴定

本研究在已构建ＴＭＶｃｐ和ＣＭＶｃｐ双价植物表达载体，建立辣椒高效遗传转化体系 的基础上，以农杆菌介导的转化法转化辣椒栽培品种：农大４０及湘研一号，对获得的５２株抗卡 那霉素再生植株进行点杂交鉴定及ＰＣＲ检测，点杂交获得１６株ＴＭＶ和ＣＭＶｃｐ基因同时表 现阳性的植株，ＰＣＲ检测发现有２株为假阳性。进一步温室攻毒试验表明，有７株转基因辣椒植 株对ＴＭＶ和ＣＭＶ同时表现免疫。

CAT和GUS基因在水稻玉米等作物原生质体中的瞬间表达

使用电击法和 PEG 法将 CAT 和 GUS 基因分别与 CaMV 35S 启动子构成的两种嵌合基因,转移到水稻、玉米、烟草、胡萝卜和香石竹(Dianthus caryophyllus)等品种的原生质体中,均得到了瞬间表达。在电击法中,大多数转化后玉米、烟草和胡萝卜原生质体表现出明显的基因活性。转化效率与所用仪器的电击参数有关。PEG 转化中 PEG 处理时间较国外报道稍有缩短,但转化后的水稻、烟草、胡萝卜和香石竹样品中均得到了阳性结果。

野生大豆未成熟种子总mRNA的分离及其cDNA的分子克隆

用氯化锂沉淀法从野生大豆(G.soja)未成熟种子中制备总RNA,经oligo(dT)-纤维素柱亲和层析,获得总mRNA,在兔网织红细胞体系中表现出一定翻译活性。以总mRNA为模板,oligo(dT)_(12)(?)为引物,反转录酶催化合成第一链cDNA,RNase H-DNA聚合酶Ⅰ协同合成第二链cDNA。双链cDNA的长度大约为200—5000 bp,且不存在发夹结构。将双链cDNA修补后钝端连接到pUC 19质粒的Sma 1位点,转化E.coli JM107,获得800多个白色重组子克隆。快速电泳检测及酶切分析表明,多数重组子带有插入片段,其中3个重组子的插入片段长度大致为1700 bp、2600 bp和1400 bp。

胡萝卜悬浮细胞原生质体的培养及植株再生的研究

采用继代培养4～5 d 后的胡萝卜悬浮细胞,经酶解获得大量原生质体,并在不同的培养基上经培养,细胞进行分裂,形成愈伤组织,获得了完整的再生植株。探讨了影响原生质体培养及植株再生的多种因素,实验表明:①原生质体的培养密度在5×10~4/mL～5×10~5/mL 范围内均可,以2.5×10~5/mL 为佳。②对于细胞的分裂、细胞团的生长以及愈伤组织的形成,以改良的 B_5培养基最好,N_5培养基其次,MS 较差。③适当降低原生质体培养基中的甘露醇浓度,有利于细胞的分裂和生长。④在本实验所涉及的培养方法中,以液体浅层培养为优。⑤诱导愈伤组织分化,以 1mg/L KT 为佳。⑥不同培养基对愈伤组织的生长速度和分化频率产生一定影响,以 MS 培养基提高分化频率效果较好。

美国遗传学教材的比较分析

遗传学是一门飞速发展的生物科学,它是农业、医学和生物科学的重要理论基础。有人把它称为生物科学的核心科学(Core Science),这是有道理的。因为它的分支学科已遍及生物科学各领域,如人类遗传学、动物遗传学、植物遗传学、微生物遗传学等等,也包括诸如免疫遗传学、体细胞遗传学、分子遗传学、遗传工程等新兴学科。如果以具体的研究对象分类,还有玉米遗传学、果蝇遗传学、大肠杆菌遗传学等等,则遗传学的分支学科可达百种之多。仅此一端已足以看出遗传学的重要意义。

他们是怎样培养遗传学研究生的?——访问加州大学戴维斯分校

加州大学即加利福尼亚大学,是美国最大的一所大学,拥有13万学生,其中,研究生约占1/3。加州大学有九个分校,分设在柏克莱,戴维斯、厄尔温、洛杉矶、里弗赛德、圣地亚哥、旧金山、圣巴尔巴拉以及圣克鲁兹。

双抗(抗病毒及抗虫)植物表达载体的构建及番茄的转化鉴定

将抗病毒的ＣＭＶ－ｃｐ 基因和抗虫的Ｂｔ－ｔｏｘｉｎ 基因依次插入到植物表达载体ｐＥ３ 的ＨｉｎｄⅢ和ＫｐｎⅠ位点，通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定，然后以土壤农杆菌ＧＶ３１１－ＳＥ介导转化番茄，胭脂碱检测，染色体ＤＮＡ 的点杂交及ＰＣＲ扩增证明ＣＭＶ－ｃｐ 基因和Ｂｔ－ｔｏｘｉｎ 基因已同时导入转化再生的番茄植株。ＲＮＡ 点杂交证明ＣＭＶ－ｃｐ 基因和Ｂｔ－ｔｏｘｉｎ 基因已在转基因番茄植株中同时获得表达。

玉米线粒体类质粒S-1的克隆和鉴定

S型细胞质雄性不育玉米的线粒体类质粒S-1为一个长6.4kb的双链线状DNA分子。本文对基本上全长的S-1(只用限制性内切酶PstⅠ在两端各切掉128bp)在pUC18和pBR322两种质粒中进行了克隆,得到4种杂合的质粒。限制性酶切图谱证明它们分别是S-1以不同方向克隆在两种质粒中的结果,Southern印迹杂交也证明S-1克隆在pBR322中。

修饰的B.t.k-δ-内毒素基因在大肠杆菌及烟草中表达的抗虫性

利用合成的寡聚核苷酸引物及 PCR 扩增技术对 B.t.k-δ-内毒素基因进行了克隆和修饰。在大肠杆菌中表达的抗虫试验表明该修饰过的 B.t.k-δ-内毒素基因对鳞翅目昆虫如烟青虫和棉铃虫有较强的毒杀作用。随后,通过农杆菌介导将该基因转入烟草,RNA 点杂交及抗虫试验表明 Bt 基因在烟草中得到表达,其表达水平足以防治烟青虫的为害。

细菌CAT基因在转基因番茄植株上的表达

本研究利用叶盘(Leaf disc)法将细菌 CAT 基因(氯霉素乙酰转移酶基因)转入番茄栽培品种462的细胞中,通过组织培养,获得了能在含卡那霉素培养基上生长的转化体再生植株.经 DNA 分子杂交及蛋白质检测,证明 CAT 基因已插入植物基因组中,并已在植物组织中表达。

用于转化玉米的载体的构建及其鉴定

将在植物中能表达的GUS基因插入到质粒pBS中,得到两种重组质粒pBSG_1和pBSG_2,经限制性内切酶分析表明,它们分别是GUS基因以不同方向插入到pBS中的结果,Southern杂交也证明GUS基因巳插入到pBS中。用类似的方法构建了含植物中能表达的NpTII报告基因及S_1片段的质粒pBIS,。所构建的三个质粒均含有与玉米核DNA有同源性的S_1类质粒片段,可用于转化玉米原生质体。

美国农业生物技术研究动态

一般认为生物技术是指利用生物系统来生产传统化学方法不能生产的过分复杂和贵重的物质或产品的技术。 新的生物技术是在10余年前从分子生物学和微生物学的研究中发展起来的。

英国植物育种研究所今昔

英国植物育种研究所是世界上久负盛誉的育种所,隶属于著名学府剑桥大学。自1912年建所以来,该所迄今已有76年的历史。 该所的第一任所长是著名的小麦育种家比芬(Biffen),他因在当时(1910年)用孟德尔定律培育出Little Joss小麦新品种而闻名于世。

遗传工程与农业

遗传工程是发展农业具有很大潜力的一项高技术。本文着重介绍了细胞和组织培养以及基因转移的发展现状和成就,并对植物、动物、微生物在遗传工程研究中取得的进展进行了比较。

遗传工程用于玉米育种工作的前景

本文是1981年5月美国有关学会向全国著名玉米工作者发出的民意测验总结。题目全文是《遗传工程和细胞组织培养在玉米育种工作上的应用》。遗传工程和细胞组织培养作为新技术已受到人们的重视,这个总结具有一定的参考意义。

基因工程

生物技术(Biotechnology)亦称生物工艺,是八十年代才开始流行的新名词,但它所包括的技术或学科在七十年代或更早就已经创始,如DNA分子的体外重组,植物体细胞杂交的成功,食品工业中酶的利用,微生物发酵的利用等等。因此生物技术是一门跨学科的综合性的科学(Interdisciplinary Science),主要包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等四个方面。鉴于生物技术的重要意义,工业发达国家如美国、日本等将它与电子技术、空间技术并列称为到2000年时影响国计民生的三大前沿科学之一,或将它列为即将到来的产业革命的标志之一。为了使广大读者了解生物技术的内容,本刊特邀请北京农业大学的有关专家分别撰文介绍。

未来美国农业的一角——美国的生物工艺学及其它

众所周知,美国农业科学的研究力量是雄厚的。除赠地大学设有完善的研究室、美国农业部的研究人员往往长期参加合作研究之外,全国划分了几个大区,分别设置有农业研究中心;还有为数众多的私人经营的种子、农药、化学、石油等公司也都集中了大批研究人员。目前,上述各方面的研究人员都在努力从事作物增产和降低能源消耗等研究,研究的中心问题之一是举世瞩目的新发展起来的一门科学——生物工艺学(Biote-