人腮腺微血管构筑

用血管铸型扫描电镜法，观察人腮腺微血管的构筑，从铸型上看，腮腺各小叶的界限分明。小叶的表层为管径粗细一致的毛细血管，它们在腺泡和闰管周围相互吻合成毛细血管网。腺泡和闰管周围毛细血管网起自腺泡微动脉。腺泡微动脉主要起自小叶内动脉，但也可起自小叶间动脉。纹状管周围为毛细血管后微静脉和微静脉用互吻合形成的网状静脉丛。腺泡周围毛细血管通过毛细血管后微静脉注入纹状管周围的微静脉丛，然后注入小叶内静脉。小叶间导管起始部的周围，为一层由毛细血管和毛细血管后微静脉共同形成的微血管网，随着小叶间导管向总导管的延伸，其周围的微血管形成了内、外两层。内层为毛细血管和毛细血管后微静脉共同形成的微血管网，外层为微静脉和微动脉交织而成的血管丛。

婴儿和足月胎儿下颌下腺的微血管构筑

用血管铸型扫描电镜法，观察了婴儿和足月胎儿下颌下腺的微血管构筑。腺泡微动脉自小叶内部行至腺泡周围分成毛细血管网，或穿出小叶至小叶的基底面，沿小叶表面延伸并分成毛细血管网，腺泡毛细血管网排列稀疏。足月胎儿的纹状管周围为毛细血管后微静脉和微静脉交织吻合成的网状微静脉丛。婴儿的纹状管周围为排列密集的毛细血管网。足月胎儿的腺泡毛细血管汇入纹状管周围微静脉丛，婴儿的与纹状管周围毛细血管网相连。小叶间导管周围的微血管分内、外两层：内层为排列密集的毛细血管网；外层为小叶间导管微动脉及其分支和小叶间导管静脉及其属支共同构成的血管丛。小叶间可见静脉－静脉吻合血管。

孤儿肽在自发性高血压大鼠和家兔心血管系统的分布

目的研究孤儿肽（ｏｒｐｈａｎｉｎＦＱ，ＯＦＱ）在自发性高血压大鼠和家兔心血管系统的分布。方法采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法和免疫组织化学方法。结果ＲＴ－ＰＣＲ的结果显示，ＯＦＱ的前体ｍＲＮＡ在自发性高血压大鼠的主动脉、肺动脉、肾动静脉均有较高的表达，其表达水平与脑组织表达水平相似，心房组织也有弱的表达，但在心室组织未见ＯＦＱ前体ｍＲＮＡ的表达。免疫组织化学结果显示，心肌细胞ＯＦＱ免疫反应阴性，心房内膜的内皮细胞和主动脉、肾动静脉的内皮细胞及血管平滑肌细胞均含有ＯＦＱ免疫反应阳性颗粒，此外在肾小球也观察到了ＯＦＱ反应阳性细胞。结论ＯＦＱ可能是对心血管系统和肾脏功能有一定调节作用的调节肽，但其具体的功能及调节机制尚待进一步研究。

反义凝血酶受体和p21双基因共表达对损伤的大鼠颈总动脉的影响

目的 :观察反义凝血酶受体 (ATR)和 p2 1双基因治疗对WKY大鼠颈总动脉损伤后新生内膜的抑制效果 ,探寻基因治疗再狭窄的有效途径。 方法 :将 42只雄性WKY大鼠随机分成基因治疗组 (导入rAAV/AP组 ,n =18)、载体对照组 (导入rAAV/GFP组 ,n =18)和正常对照组 (n =6 )。构建含有ATR和 p2 1双基因及含有绿色荧光蛋白 (GFP)基因的腺病毒伴随病毒(AAV)载体pSNAV/AP和 pSNAV/GFP ,用重组单纯疱疹病毒 (rHSV )生产体系包装重组腺病毒伴随病毒 (rAAV ) :rAAV/AP和rAAV/GFP。将rAAV/AP或rAAV /GFP导入拉伤的WKY大鼠的颈总动脉。分别于术后 2、 4、 6周取材 ,用半定量—逆转录多聚酶链反应和免疫组织化学方法检测凝血酶受体 (TR)和 p2 1在动脉壁中的表达。图像分析和统计学检验双基因的疗效。 结果 :逆转录多聚酶链反应和免疫组织化学结果显示外源基因已导入血管壁的新生内膜和中膜并获得稳定表达。图像和统计学分析说明 :基因治疗后 2、 4和 6周 ,双基因治疗组 ( p2 1和ATR)的颈总动脉内膜厚度分别较载体对照组组内膜减少 5 9 2 %、 5 8 7%、 6 4 1%;中膜厚度分别减低 7 8%、 10 8%、 8 3%;中膜细胞密度减低 30 0 %、2 9 4 %、 2 6 2 %。 结论 :ATR和p2

携带TIMP-4 cDNA的重组腺病毒载体的构建

目的克隆细胞外基质金属蛋白酶组织抑制因子4(tissue inhibitor-4 of metalloproteinases,TIMP-4)基因,构建包装携带TIMP-4基因的重组腺病毒载体(Ad/T4),为基因治疗血管再狭窄的实验研究打下基础。方法以人心脏cDNA文库为模板,应用PCR克隆TIMP-4基因,经DNA测序确定克隆结果。构建具有强启动子CMV,携带TIMP-4和报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-T4,利用AdEassy系统,在大肠杆菌BJ5183经同源重组产生重组腺病毒质粒pAd/T4。脂质体介导转染293细胞,包装重组腺病毒载体(Ad/T4)。结果克隆出含TIMP-4全部编码序列的cDNA片断,并通过亚克隆和同源重组等将其重组入腺病毒,构建包装了重组腺病毒载体Ad/T4。结论Ad/T4中含有TIMP-4和GFP的完整表达盒,可用于基因治疗的实验。

大鼠舌下腺微血管的三维构筑

本文采用血管铸型扫描电镜观察法和墨汁灌注光镜观察法对大鼠舌下腺的微血管构筑进行了观察。结果表明:在小叶内,小叶内动脉逐渐分支。在腺泡和闰管周围续于毛细血管,它们相互吻合形成排列稀疏的腺泡周围毛细血管网。腺泡周围毛细血管逐渐汇集成毛细血管后微静脉、微静脉,它们在纹管周围交织吻合形成微静脉丛或直接注入小叶内静脉,在纹管周围未见窦状毛细血管网。排泄管呈树权样分枝状,上皮下为一层排列密集的毛细血管网,它们由小叶间动脉分出的微动脉供血,输出微静脉注入沿途的小叶间静脉。在排泄管的起始部,上皮下毛细血管可注入纹管周围的微静脉丛。

双基因共表达在血管再狭窄研究中的应用

目的 观察携带反义凝血酶受体 (ATR)和p2 1的双基因载体共表达后对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,为再狭窄基因治疗寻求新途径。 方法 以携带ATR或 和p2 1的单、双基因载体重组腺病毒伴随病毒(rAAV)感染培养的人主动脉平滑肌细胞 (hASMC) ,用半定量RT PCR检测各基因的整合与表达 ,MTT法测定病毒感染后不同时间点的细胞存活率。将携带AP双基因的rAAV导入WKY大鼠拉伤侧的颈总动脉 ,免疫组织化学法分别检测凝血酶受体 (TR)和p2 1两基因在动脉壁中的表达。 结果 RT PCR结果显示 ,TR单基因的mRNA表达降低 ,p2 1单基因表达升高 ,AP双基因得到了共表达 ;MTT法测定的生长曲线显示 ,双基因对hASMC增殖的抑制作用大于两个单基因 ;免疫组织化学证实 ,AP双基因导入后 ,TR基因的表达受到完全抑制 ,p2 1基因的表达明显增加 ,血管新生内膜与平滑肌细胞的增殖受到了抑制。 结论 ATR和p2 1双基因共表达在体外可明显抑制ASMC的增殖 ,在体内可明显抑制血管内膜新生和中膜的增生。

NaOH消蚀法制备胎儿脱细胞真皮基质的研究

目的:探索NaOH消蚀法对胎儿真皮基质的成分及其形态结构的影响。方法:使用NaOH消蚀法制备胎儿皮肤的脱细胞真皮基质(ADM),应用组织化学和免疫组织化学染色方法检测细胞的余留及细胞外基质成分的破坏情况,应用扫描电镜观察ADM的构筑。结果:NaOH消蚀处理16h即可去除真皮细胞成分。制备的ADM韧性好,勿需戊二醛交联。弹性纤维的含量有所减少而胶原纤维形态完整,排列正常,保留了基本的真皮构筑。HLA-DR呈阴性,Fibronectin(FN)呈弱阳性,Laminin(LN)和Ⅳ型胶原均呈阴性。结论:NaOH消蚀法简易经济,去除细胞成分较彻底,所制备的ADM韧性好,胶原纤维形态完整,排列正常,但对基膜的成分及结构破坏较重。

反义TR和p21双基因共表达对人主动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的作用

目的观察携带反义凝血酶受体(ATR)或/和p21的单、双基因重组腺病毒伴随病毒(rAAV)载体对人主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖与凋亡的影响。方法以携带ATR或/和p21的单、双基因rAAV感染人ASMC。半定量RT-PCR检测各基因的整合与表达;MTT法测定感染不同时间点的细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期与凋亡细胞数目的变化;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色检测凋亡细胞的比率。结果单、双基因在ASMC中均获得整合,且双基因发生了共表达;病毒感染4d时,ATR组、p21组和AP双基因组的细胞存活率与对照组相比分别降低了16.7%、21.6%和29.4%;三组的G0/G1期细胞数分别为(61.8±2.9)%、(82.5±4.0)%和(80.4±6.1)%;凋亡细胞数为(4.8±0.5)%、(5.7±0.1)%和(9.2±0.9)%;AO/EB染色显示的凋亡细胞比率分别为:对照组(1.5±0.8)%、ATR组(7.2±3.3)%、p21组(10.7±5.6)%、AP组(18.3±2.7)%。结论(1)双基因共表达对抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用均较单基因具有较强的生物学效应。(2)为再狭窄的基因治疗提示了更优化的途径。

血管内皮生长因子对皮肤血管生成影响的研究进展

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是促进血管内皮细胞生长的最有效的有丝分裂原,它通过与其相应的受体结合而发挥生物学作用。它在正常皮肤组织中有少量的表达,而在皮肤创伤、瘢痕组织形成以及皮肤肿瘤等病理过程中发挥着重要的作用。目前,无细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)已被广泛用作真皮替代物,但其血管化机制并不清楚。而VEGF在ADM血管化过程中起到非常重要的作用。

Peroxiredoxin Ⅲ在大鼠超负荷心肌肥厚过程中的表达变化

目的：探讨Peroxiredoxin Ⅲ（PrxⅢ）在大鼠超负荷心肌肥厚过程中的表达变化。方法：雄性SD大鼠随机分为假手术对照组和模型组，模型组大鼠实施腹主动脉缩窄术，制备压力超负荷心肌肥厚模型。分别于术后24h，2、4、6周，测定血液动力学变化；称量心体质量；光镜和电子显微镜观察左心室的组织变化；提取左心室RNA，RT-PCR分析PrxⅢ的表达变化。结果：术后24h两组大鼠的血液动力学和心肌形态无明显变化。术后2、4、6周时，模型组大鼠的SBP、DBP、LVSP、LVED及左心室体质量指数逐渐增加，心肌纤维逐渐增粗，线粒体逐渐增多，肌节增长。术后24h PrxⅢ的表达稍有降低，但无统计学意义，2周时则明显降低，4周有所上升但仍低于对照，6周时明显上升且高于对照组。结论：PrxⅢ mRNA表达呈现先降低后增高的趋势，即在心肌肥厚中早期表达降低，而在心肌肥厚形成后表达明显升高，表明PrxⅢ参与了超负荷心肌肥厚的发生。

VEGF_(165)对脱细胞真皮基质血管化影响的研究

[目的]观察十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)和NaOH复合消蚀法制备的胎儿脱细胞真皮基质(ADM)的组织相容性,以及血管内皮生长因子(VEGF)对ADM血管化的影响。[方法]将足月胎儿皮肤用SDS和NaOH复合消蚀,制备ADM(厚0.3 mm)。用重约300 g的SD雄性大鼠45只,随机分为ADM、ADM+rAAV/LacZ和ADM+rAAV/VEGF1653组进行真皮片皮下包埋实验。术后的2、4、6周分别取材,经HE染色或以VEGF165、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的单克隆抗体进行免疫组织化学染色,检测3种蛋白质在移植后的皮肤中的表达情况。观察并比较各组中ADM血管密度,进行图像处理和统计学分析。[结果]ADM无细胞成分,胶原纤维结构规整;术后2周包埋ADM组织中可见到新生血管,及VEGF阳性细胞;无明显的炎性细胞浸润。ADM临近组织中MMP-1和TIMP-1均明显表达,MMP-1的表达高于TIMP-1;术后4周各组细胞数量和新生血管均高于2周。此时MMP-1的表达高于TIMP-1,但TIMP-1的表达较2周时有所增强;术后6周rAAV/VEGF165实验组中VEGF阳性细胞和血管密度明显高于ADM空白组和rAAV/LacZ对照组(P<0.05)。此时TIMP-1的表达则高于MMP-1。[结论]SDS和NaOH复合消蚀法制备的ADM去除细胞彻底,并保持了真皮中原有细胞外基质构筑的完整,而且免疫原性低,组织相容性好;VEGF165与ADM复合移植,具有促进ADM血管化作用;MMP-1和TIMP-1的相互作用参与植入体内的ADM的血管化过程。

匹伐他汀提高心肌过氧化物酶Ⅲ、细胞外超氧化物歧化酶表达减轻心肌肥厚

目的:探讨匹伐他汀对大鼠心肌肥厚模型氧化应激水平、过氧化物酶Ⅲ(PrxⅢ)和细胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、心肌肥厚组和匹伐他汀组。心肌肥厚组和匹伐他汀组大鼠背部皮下注射异丙肾上腺素7 d制备心肌肥厚模型,对照组注射等体积生理盐水。匹伐他汀组大鼠于注药前7 d即给予匹伐他汀灌胃共14 d。注药7 d后测定大鼠右颈总动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP),计算平均动脉压(MAP)。取心称量全心质量(HW)和左心室质量(LHW),计算心重指数(HW/BW,LHW/BW);分离并测量室间隔(VST)与游离室壁(LVWT)厚度;光学、电子显微镜观察心肌的形态结构;检测血清乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌内丙二醛(MDA)、过氧化氢(H_2O_2)含量、PrxⅢ和ECSOD的mRNA与蛋白水平表达变化。结果:光镜和电镜观察显示,心肌肥厚组和匹伐他汀组大鼠呈心肌细胞肥大表现,但匹伐他汀组形态改变轻于心肌肥厚组;与对照组相比,心肌肥厚组和匹伐他汀组大鼠MAP、HW/BW、LHW/BW、VST、LVWT、血清LDH活性、MDA和H_2O_2含量均明显增加,但匹伐他汀组却低于心肌肥厚组;心肌肥厚组和匹伐他汀组大鼠心肌组织PrxⅢ和EC-SOD的mRNA和蛋白表达量高于对照组,而匹伐他汀组大鼠PrxⅢ和EC-SOD表达量又高于心肌,肥厚组。结论:匹伐他汀能降低大鼠心肌肥厚模型氧化应激水平,改善心肌形态结构和功能的改变,这可能与抗氧化酶PrxⅢ和EC-SOD的表达增强密切相关。

NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质修补腹壁疝

背景:与其他疝修补材料相比,脱细胞真皮基质具有易血管化、抗感染、从而可用替代传统补片用于感染腹壁缺损重建等特点。目的:观察NaOH消蚀法制备的脱细胞真皮基质作为修补材料应用于腹疝的应用价值。方法:以全厚猪皮制成脱细胞真皮基质,45只SD雄性大鼠制备腹壁疝模型,随机数字表法分为腹壁疝组:直接缝合皮肤,Marlex网组和脱细胞真皮基质组:分别应用大小为3.5cm×4.0cm的Marlex网和脱细胞真皮基质缝合皮肤;观察修复后1周时有无腹壁疝发生,脱细胞真皮基质组修复后1,2,3,5,10周分别取材,其中每周各组取4只用于苏木精-伊红染色,光镜观察。修复后第5周Marlex网组和脱细胞真皮基质组各取6只用于抗张力试验。结果与结论:术后1周脱细胞真皮基质组与Marlex网组腹壁疝发生率均显著低于腹壁疝组(P<0.001)。脱细胞真皮基质的胶原纤维无明显变化,即有少量成纤维细胞植入,术后2周可见新生血管,术后5周脱细胞真皮基质内部血管密度基本稳定。将单独脱细胞真皮基质片与Marlex网行抗张力试验,Marlex网的抗张力显著高于脱细胞真皮基质(P<0.001)。但植入体内5周后,脱细胞真皮基质筋膜组织的抗张力高于Marlex-筋膜组织(P<0.05)。提示复合消蚀制备的脱细胞真皮基质可以作为良好的疝修补材料。

携带反义凝血酶受体和p21双基因共表达腺病毒伴随病毒载体的构建与包装

为探讨双基因共表达对再狭窄的防治作用 ,分别构建了含反义凝血酶受体 (ATR)或 /和 p2 1单、双基因及报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)的腺病毒伴随病毒 (AAV)载体 .上述载体经脂质体介导转染BHK 2 1细胞 ,G4 18筛选获得整合有外源基因的细胞株 .克隆形成过程中显示单、双基因转染后细胞增殖受到了不同程度的抑制 ,克隆形成速度减慢 ,细胞形态改变 ,且双基因的作用明显大于单基因 .以绿色荧光出现说明报告基因得到表达后 ,又以DNA印迹证实ATR和p2 1单、双基因已整合于细胞基因组中 ,并维持了凝血酶受体 (TR)基因的反义位置 .半定量RT PCR证实TR基因表达降低 ,p2 1基因表达升高 ,ATR和p2 1(AP)双基因得到了共表达 .以具有可提供复制和包装功能的重组单纯疱疹病毒rHSV rc/ΔU12分别感染载有不同基因的BHK细胞株 ,包装产生重组AAV (rAAV)病毒 ,并经点杂交法测定其滴度 (每毫升病毒液中所含病毒颗粒数 ) .rAAV/AP中ATR与 p2 1的病毒颗粒数分别为 1 0 2× 10 13 /ml和 1 0 8× 10 13 /ml,单基因rAAV/ATR的滴度为 6 5 4× 10 12 /ml,rAAV/P2 1为 1 0 6× 10 13 /ml,为进一步的体内外实验奠定了物质基础 .

柯萨奇病毒B3VP1重组腺病毒载体疫苗rAd/VP22-L-VP1的构建及表达

背景:VP22是单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type1,HSV-1)UL49基因编码的碱性蛋白质,具有蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD),能够把与之融合的蛋白或与之结合的DNA等大分子跨膜送递到邻近细胞,在基因靶向预防中表现出优势。目的:构建表达单纯疱疹病毒1型VP22与柯萨奇病毒B3主要中和抗原VP1融合蛋白的重组腺病毒载体疫苗,观察外源基因在HEK293细胞中的良好表达。方法:PCR法扩增目的基因HSV-1VP22和CVB3VP1,经Linker连接,将VP22-L-VP1插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,构建重组穿梭质粒AdTrack-CMV/VP22-L-VP1。再将此载体与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,生成重组腺病毒质粒pAd/VP22-L-VP1,脂质体介导pAd/VP22-L-VP1转染HEK293细胞包装重组腺病毒rAd/VP22-L-VP1。HEK293细胞上进行病毒扩增和滴定并检测外源基因的表达。结果与结论:构建的重组腺病毒载体pAd/VP22-L-VP1经过第4轮扩增,其滴度达到6.77×107pfu/mL,体外感染293细胞可见VP22和VP1融合蛋白的表达。说明实验成功构建并包装重组腺病毒rAd/VP22-L-VP1。

软组织X线解剖学

微创手术治疗骨折是骨科发展不可阻挡的趋势[1]。熟悉骨骼周围的解剖结构,如肌肉、肌腱、韧带、关节囊和神经血管的分布,是确保微创手术安全完成的重要条件。X线检查和术中透视是诊断骨折、评估骨折复位固定质量的常用手段[2-3]。如果在X线检查中能够观察到肌肉、肌腱、韧带、关节囊和神经血管的分布,将有助于更好地理解骨折与周围软组织结构的关系,有助于术中选择合理的手术入路、内固定物植入的位置和方向,确保手术安全。

脱细胞真皮基质和聚丙烯补片修补大鼠腹壁疝的实验研究

目的 探讨复合消蚀法制备的脱细胞真皮基质（ADM）和聚丙烯补片（Marlex网）修补大鼠腹壁疝的应用价值.方法 用全厚猪皮制备ADM,选用SD雄性大鼠45只,完全随机分为腹壁疝组7只、Marlex网组10只和ADM组28只,观察3组术后1周时有无腹壁疝的发生,术后第5周Marlex网组和ADM组随机选取6只用于抗张力试验.结果 术后1周时,ADM组与Marlex网组腹壁疝发生率均明显低于腹壁疝组（分别为0.04%、0.00%、100.00%,P＜0.01）,但ADM组与Marlex网组差异无统计学意义（P＞0.05）.将单独ADM片与Marlex网行抗张力试验,Marlex网的抗张力远高于ADM[（417±44）N比（111±27）N,P＜0.01].但植入体内5周后,ADM-筋膜组织的抗张力高于Marlex-筋膜组织[（103±27）N比（71±19）N,P＜0.05].结论 复合消蚀法制备的ADM可能比聚丙烯补片更适合作为疝修补材料.

关于冠状动脉分叉病变角度命名的商榷

冠状动脉左主干发出左前降支和左旋支形成分叉、前降支发出对角支形成分叉、左旋支发出钝缘支形成分叉等等，以往研究只关注斑块在分又部位的分布，不重视分叉血管之间的角度。由于血管介入技术的迅速发展，分叉病变的位置直接影响介入技术的选择和预后。国内外关于分叉病变角的名称不统一（图1-3），为了有效地进行学术交流和临床研究，借鉴数学关于“角”（∠）的命名原则，提出新的冠状动脉分叉角名称（图4）。命名原则如下。