11例腺瘤样瘤的免疫组织化学及超微结构研究

报告11例腺瘤样瘤,男9例,女2例.平均年龄51岁.除1例位于膀胱外,其余均在男、女生殖系统.检测瘤细胞内角蛋白,11例均呈弥漫阳性反应,Ⅷ因子均为阴性.电镜观察见瘤细胞腔面有刷状长的微绒毛,并见桥粒及张力微丝.

18例软骨母细胞瘤的免疫组化及超微结构观察

1942年Jaffe和Lichtenstein首次报道软骨母细胞瘤是一种少见的特殊类型骨肿瘤,把它和骨巨细胞瘤分开。截止1985年,英文文献约有800余例报道。本文报道18例软骨母细胞瘤的临床、病理、免疫组织化学及超微结构观察。1 材料和方法我们自1970～1992年共收集软骨母细胞瘤18例(外单位4例)。1.1 光镜检查材料制备18例活检组织用10%福尔马林固定。

上皮样血管肿瘤的病理诊断

上皮样血管肿瘤的病理诊断米粲血管肿瘤种类繁多且形态各异。有部分血管肿瘤可表现为上皮样（或组织样）细胞的特征，免疫组化检测，瘤细胞可呈上皮标记阳性。在外检常规诊断工作中，要掌握这些肿瘤的特点，注意与其它肿瘤鉴别，从而作出正确诊断，为临床诊治提供可靠依据...

印戒细胞肿瘤的病理诊断

印戒细胞肿瘤的病理诊断米粲（重庆医科大学病理学教研室６３００４６）在病理诊断中，最常见的印戒细胞癌，为胃及肠的印戒细胞癌，这是大家都非常熟悉的。其组织学图象为光镜下肿瘤由大量胞浆内充满粘液、细胞核偏于一侧的印戒细胞组成。组织化学染色，不同部位染色结果...

透明细胞肉瘤

透明细胞肉瘤(CCS)是一种罕见的组织起源尚未最后确定的软组织肉瘤。多发生在青年人,生长缓慢但复发转移率高。肿瘤位于深部软组织,与肌腱和腱膜相连。多为结节状或分叶状。组织学特征为瘤细胞多角形或梭形,胞浆透明,核仁突出,组成大小不等的巢状,其周绕以宽窄不等的胶元纤维分隔。1965年Enzinger首次报道21例肌腱和腱膜的CCS,以后陆续有报道。除Chung和Enzinger报道AFIP搜集的141例以外,多系个案报告。本文根据这些报道,综述CCS的病理形态、生物学行为、组织发生和鉴别诊断等问题。

BEP2D细胞恶性转化过程中Smad7基因对MAPK信号通路的调控

背景与目的:Smad7基因是转化生长因子(transforminggrouthfactor-茁,TGF-β)信号通路的抑制分子,有研究表明TGF-β通过活化SMAD通路和ras/MEK/ERK通路来诱导某些基因的表达。本研究旨在探讨在人永生化支气管上皮细胞BEP2D经辐射诱发恶性转化过程中,作为SMAD蛋白家族的抑制分子Smad7是否参与TGF-β对MAPK信号通路的调控。方法:将人工合成的Smad7siRNA及Smad7真核表达载体与pTet-Elk,pTet-Jun反式激活载体、报告基因荧光素酶共转染BEP2D细胞,TGF-β刺激,通过报告基因荧光素酶的表达丰度来检测Smad7对MAPK信号通路的调控。结果:永生化BEP2D细胞中,TGF-β刺激之后,Elk和Jun磷酸化活性升高(PElk=0.033,PJun=0.016);Elk或Jun同Smad7真核表达载体共转染之后,Elk磷酸化活性升高,Jun磷酸化活性降低(PElk=0.017,PJun=0.028);Elk或Jun同Smad7-siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低,Jun磷酸化活性升高(PElk=0.018,PJun=0.005)。恶性化BERP35T2细胞中,TGF-β刺激之后,Elk磷酸化活性增强(P=0.006),Elk同Smad7siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低(P=0.000);恶性化细胞中几乎检测不到Jun的活性。结论:在BEP2D细胞发生恶性转化过程中,Smad7基因干预MAPK信号通路,使ERK和JNK磷酸化活性的平衡失调,导致促增殖作用强于生长抑制作用,从而有助于细胞向恶性方向发展。

青蒿琥酯对人子宫内膜癌细胞RL95-2的生长抑制作用

目的研究青蒿琥酯在体外对人子宫内膜癌RL95-2细胞的生长抑制作用及其可能机制。方法通过MTT法实验观察青蒿琥酯在体外对RL95-2细胞的抑制作用;透射电镜观察癌细胞的形态学改变;免疫组化检测细胞浆Caspase3活性;流式细胞术观察青蒿琥酯对细胞周期的影响及检测细胞线粒体膜电位Δψm和细胞内ROS水平。结果青蒿琥酯对RL95-2细胞具有增殖抑制作用,其半数细胞抑制浓度(IC50)为26.29μg/ml。透射电镜见:细胞呈早期凋亡改变:核染色质聚集于核膜周围,呈团块状;免疫组化检测细胞浆Caspase3表达阳性;流式细胞仪检测:细胞周期阻滞发生在G/0G1期;细胞内ROS升高(P<0.05);细胞线粒体膜电位Δψm降低(P<0.05)。结论青蒿琥酯在体外作用于人子宫颈癌RL95-2细胞,可能通过诱导细胞凋亡抑制癌细胞增殖。

肾癌组织中NF-kB信号分子的表达及As_2O_3对人肾癌786-O细胞中NF-kB信号通路影响的研究

目的:探讨NF-K B信号通路与肾癌发生和发展的关系以及三氧化二砷(As_2O_3)对人肾癌细胞系786-0的NF-K B信号转导的影响。方法:采用ICC、ISH、Western blot和EMSA技术检测15例肾癌组织和10例正常肾组织中NF-K B信号分子IKKα/β、IK Bα、p65和ICAM-1的表达和NF-K B DNA结合活性;As_2O_3处理肾癌786-0细胞后NF-K B信号分子蛋白表达、p65mRNA表达和NF-K B DNA结合活性的改变。结果:肾癌组织中NF-KB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白表达量升高(P<0.01),但IK Bα蛋白明显降低(P<0.01);经2μmol/L浓度As_2O_3处理786-0细胞72h后,p65mRNA含量、NF-KB DNA结合活性及p65、IKKα/β、I K Bα和ICAM-1蛋白的表达量均降低(P<0.01)。结论:NF-KB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白增加可能与肾癌的发生和进展有关;2μmol/L以上浓度As_2O_3可以全面抑制786-0细胞中p65、IKKα/β、IK Bα和ICAM-1蛋白和p65 mRNA的表达,抑制NF-KB DNA结合活性,可能是As_2O_3、抑制786-0细胞增殖的另一种机制,NF-KB有可能成为抗肾癌治疗的靶点之一。

As_2O_3诱导人肾癌786-0细胞凋亡及其分子机制的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导786-0细胞凋亡的作用及其分子机制。方法用FCM和TUNEL等方法观察As2O3诱导786-0细胞凋亡,以ICC、RT-PCR、ISH、Western blot和EMSA技术等检测凋亡相关基因p53、bcl-2、c-myc、c-fos、NF-κBp65的mRNA和蛋白表达及NF-κBDNA结合活性的改变。结果2μmol/L以上浓度As2O3作用786-0细胞24h后开始发生细胞凋亡,出现凋亡的形态学改变和特征性亚二倍体峰(凋亡峰),使786-0细胞内p53活性升高(P<0.05),而bcl-2、c-myc、c-fos和NF-κBp65基因表达降低(P<0.05),NF-κBDNA结合活性也被显著抑制(P<0.01)。结论As2O3可能通过降低NF-κBp65基因表达和NF-κBDNA结合活性,下调bcl-2、c-myc和c-fos基因表达,而增加p53基因的表达,诱导人肾癌786-0细胞凋亡。

原发睾丸NK/T细胞淋巴瘤2例报告及文献复习

目的:探讨原发睾丸NK/T细胞淋巴瘤的临床病理特征、诊断和预后。方法:通过光镜、免疫组化对2例原发睾丸NK/T细胞淋巴瘤进行临床病理观察及原位杂交检测EB病毒,并结合文献加以分析。结果:2例原发睾丸NK/T细胞淋巴瘤。形态学示例1肿瘤细胞中等偏小,例2肿瘤细胞呈小、中、大混合,均呈弥漫生长,核不规则、扭曲,破坏睾丸正常组织结构,可见血管壁浸润破坏血管,可见小灶性凝固性坏死。免疫组化:瘤细胞CD45、CD2、CD56、胞浆型CD3(CD3ε)、CD45RO和Granzyme B阳性表达,CD57、CD20、CD79a、CD30、CK、MPO、TdT、BCL-2和PLAP阴性。原位杂交50%肿瘤细胞EBER1/2阳性。结论:原发睾丸NK/T细胞淋巴瘤极罕见,临床经过呈高度侵袭性,预后差。免疫组化染色CD56、CD3ε、EBER和细胞毒性颗粒相关蛋白(如GranzymeB等)阳性对诊断和鉴别诊断有重要作用。

上皮样肉瘤的临床病理研究

目的:探讨上皮样肉瘤(Epithelioid sarcoma,ES)的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法:按软组织肿瘤WH(O 2002年)分类标准收集2例上皮样肉瘤,应用光镜行HE及免疫组织化学染色观察。结果:远端型(即经典型)和近端型上皮样肉瘤各1例。远端型患者为女性,28岁,部位为左小腿;组织结构为典型的假性肉芽肿形成,肿瘤细胞呈上皮细胞样,中心有坏死。近端型患者为女性,36岁,部位为宫颈;组织结构可见结节形成,肿瘤细胞呈梭形细胞样,但坏死范围更大。免疫组化染色:两例肿瘤细胞阳性表达Vimentin、EMA、CK,阴性表达Desmin、NSE、S-100;前者还阳性表达低分子CK、CD34,后者还阴性表达Actin(横纹肌)、SMA、HMB-45。结论:上皮样肉瘤是一种少见的软组织恶性肿瘤,必需结合临床、组织结构及免疫表型特征才能作出准确诊断及鉴别诊断。

靶向腺病毒载体介导的EGFP基因在甲胎蛋白阳性肝癌细胞的特异表达

目的建立一种在甲胎蛋白(AFP)阳性的肝癌细胞中靶向表达目的基因的重组腺病毒载体。方法基于腺病毒载体Adeno-XTMExpressionsystem,以300bpAFP特异启动子替换穿梭质粒Pshuttle中CMV启动子,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因亚克隆至Pshuttle,HEK293细胞包装腺病毒,收集病毒后分别转染人正常肝脏LO2细胞,人肝癌HepG2细胞及HeLa细胞;通过Northern杂交检测EGFP基因在3种细胞中的转录水平,荧光显微镜下观察3种细胞中绿色荧光蛋白的表达。结果Northern杂交显示,HepG2细胞中有大量EGFP基因的转录,而正常肝细胞LO2和HeLa细胞中仅能检测到微量基因的转录;荧光显微镜检测发现HepG2细胞内有强绿色荧光表达,而在LO2以及HeLa细胞内见极弱绿色荧光。结论在AFP特异启动子作用下,腺病毒携带的目的基因在AFP阳性的肝癌细胞中得到显著转录和表达,而在非AFP阳性细胞仅微量转录,蛋白表达极弱。该腺病毒载体可作为AFP阳性的肝癌基因靶向治疗的适宜载体。

Genistein抑制人卵巢癌细胞系SKOV_3增殖和诱导凋亡发生的研究

背景与目的:许多研究表明Genistein对多种肿瘤细胞有抑制作用,但有关Genistein对卵巢癌细胞作用的报道很少。本研究旨在通过观测Genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3的抑制增殖和诱导凋亡作用,探讨其抗癌作用的机理。方法:应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度Genistein对SKOV3的生长抑制作用;吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法及电镜观察凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特征性DNA梯形带;免疫细胞化学李昱,等.Genistein抑制人卵巢癌细法及RT-PCR法分别检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白及其mRNA的表达。结果:Genistein对SKOV3细胞的增殖抑制作用呈时间及浓度依赖性,20μmol/L和40μmol/LGenistein作用72h后,细胞的生长抑制率达72.07%和74.93%。20μmol/LGenistein作用SKOV3细胞48h后出现细胞周期的G2/M期阻滞。荧光显微镜和电镜均观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。细胞凋亡率以Genistein20μmol/L组最高,达23.7%。凝胶电泳观察到特征性DNA梯形带。20μmol/LGenistein作用SKOV348h后,bcl-2基因表达水平降低,而p21WAF1/CIP1和bax基因表达增加(P<0.05);PCNA、Bcl-2及cyclinB1蛋白表达水平降低,Bax、p21WAF1/CIP1蛋白表达增加(P<0.01)。

青蒿琥酯对人子宫颈癌细胞株HeLa凋亡与增殖的影响

目的研究青蒿琥酯(artesunate,ART)对人子宫颈癌细胞HeLa凋亡与增殖的影响。方法通过MTT法观察ART对HeLa细胞的生长抑制作用;荧光染色观察ART作用前后细胞形态的改变;免疫组化检测HeLa细胞caspase-3表达;流式细胞术观察ART对细胞周期的影响,并检测细胞线粒体膜电位ΔΨm和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的改变。结果ART对HeLa细胞的生长抑制作用呈时间、剂量依赖关系;荧光染色观察见凋亡小体形成;透射电镜见细胞染色质凝聚,边集呈新月形;免疫组化检测细胞质caspase-3呈阳性表达;流式细胞术检测ART可引起HeLa细胞周期S期阻滞;细胞内ROS明显升高(P<0.01),ΔΨm显著降低(P<0.05)。结论ART作用于人子宫颈癌HeLa细胞,可能通过线粒体途径诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。

骨外粘液样软骨肉瘤的临床病理研究

目的:探讨骨外粘液样软骨肉瘤(Extraskeletal myxoid chondrosarcoma,EMC)的临床病理特征。方法:对9例EMC进行了免疫组织化学检测;其中2例进行了超微结构观察;7例获得了随访资料。结果:患者有7名男性和2名女性。年龄介于31～69岁间(中位数52.78岁)。患者的主诉是局部疼痛、压痛和可触及的肿块。肿瘤主要位于下肢(66.7%),由纤维组织分割为结节状。大多数肿瘤细胞呈纵横交错的条索状或花环状排列,粘液样基质丰富。免疫组化:EMC表达波形蛋白(100%,9/9),神经元特异性烯醇化酶(77.8%,7/9),S-100蛋白66.7%,6/9),突触素和嗜铬粒蛋白A(22.2%,2/9),不表达上皮膜抗原和结蛋白。电镜,条索样瘤细胞沉浸在丰富的粘多糖基质内;其中1例瘤细胞内见直径140～180nm的膜包致密核心分泌颗粒。结论:EMC是一种罕见的有显著形态学和细胞遗传学特征的软组织肉瘤。然而,其分化方向尚有待确定。部分EMC显示神经内分泌分化的免疫表型和(或)超微结构证据。EMC有很高的局部复发和转移潜力及死亡率。

Smad7对Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用

研究人永生化支气管上皮BEP2D细胞中,作为Smad蛋白家族的抑制分子,Smad7对TGF-β信号通路中Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用。培养BEP2D细胞,瞬时转染Smad7真核表达载体pCISmad7.neo,TGF-β刺激,提取细胞核蛋白及总蛋白,用Westernblot方法比较瞬时转染Smad7基因前后细胞核中Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的差异。结果,Smad3在TGF-b作用下有明显的核转位;转染Smad7后Smad3、Smad4的核转位显著受到抑制。表明在BEP2D细胞中,Smad7对TGF-β/Smads信号通路的拮抗作用主要通过抑制Smad3的活化、Smad3/Smad4异源复合物的形成及核转位,从而拮抗TGF-β对细胞的生长抑制效应。

Smad4分子在ERK/MAPK信号转导通路中的作用

为了探讨在人永生化支气管上皮细胞BEP2D细胞中,Smad4分子对ERK/MAPK通路的作用,我们用RNA干扰的方法分别设计了两对Smad4-siRNA,并使BEP2D细胞中Smad4靶向沉默,用Western印迹分析了细胞内ERK激酶和MEK激酶磷酸化水平的变化.结果发现,当Smad4表达沉默后,ERK激酶磷酸化水平未变,MEK激酶磷酸化水平有所降低;再加TGF-β1诱导后ERK激酶和MEK激酶磷酸化水平均显著降低至基础水平以下.结果表明在BEP2D细胞中,Smad4的缺失抑制TGF-β1对ERK/MAPK通路的活化,故提出TGF-β活化ERK/MAPK通路需要Smad4存在的假设.