光周期对棉花愈伤组织发生及体胚发生相关基因表达的影响

【目的】研究光周期对棉花愈伤组织发生及体胚发生相关基因表达的影响。【方法】利用石蜡切片对不同培养时期下胚轴细胞形态进行观察;RT-PCR技术对体胚发生相关基因表达量进行分析。【结果】石蜡切片观察发现,光处理后继代培养3 d的下胚轴在b处理(暗处理3 d后光处理3 d)下形成层细胞增殖较快;继代培养7 d时,新陆早33号、45号、50号和珂字棉312号在皮层部位都观察到次生分生细胞团的出现;其中,新陆早45号在b处理和c处理(暗处理12 h后光处理12 h,培养6 d)下以及珂字棉312在四个光周期处理下形成层部位也观测到明显的次生分生细胞团。实时荧光定量PCR表明,光周期b处理下的下胚轴材料GhLEC1、GhSERK1基因相对表达量较高。【结论】光周期b处理更有利于愈伤组织发生,并且该处理下体胚发生相关基因的表达量相对最高。

石蜡切片在不同保存条件下抗原稳定性分析

目的采用不同的保存条件处理石蜡组织切片,检测组织切片内抗原在不同保存条件下的稳定性,从而找到合适的石蜡组织切片保存条件。方法分别将Alk、CA125、CD10、Cox2、ER、p16、p63、Her2、Pax5、PD-L1等10个抗原阳性表达的组织蜡块连续切片后,65℃烤片2 h,作为无蜡封组;蜡封组将空白石蜡切片捞取在石蜡切片组织的表面,以达到蜡封、隔绝空气的目的。将无蜡封组和蜡封组石蜡切片在室温、2~8℃和-20℃保存,并在0 h、1月、2月、3月、4月、5月、6月、7月时,使用相同批号的免疫组织化学试剂进行染色,分析不同保存条件下抗原的稳定性。另外,无蜡封组和蜡封组在37℃条件下进行2周的老化试验,以观察高温老化条件下组织切片内抗原的稳定性。结果蜡封组染色效果均差于无蜡封组。石蜡切片在保存7月时,Alk、ER、Pax5抗原项目染色明显减弱,Her2抗原阳性组织切片室温保存4月时染色已为阴性,其它抗原项目抗原虽有丢失,但免疫组织化学染色结果差异不显著。结论-20℃条件下,组织切片保存抗原稳定性最好,2~8℃条件下保存效果次之,室温保存效果最差;细胞核抗原稳定性最差;无蜡封处理的石蜡切片抗原保存效果好于蜡封处理。低温保存是储存石蜡组织切片的良好条件,但蜡封处理后的石蜡切片免疫组织化学染色弱于无蜡封组。

基于改进RetinaNet的宫颈异常细胞检测算法

宫颈异常细胞特征细微难以提取、小目标容易漏检、细胞边界回归不准确导致异常细胞检测精度不高,鉴于此,本文提出了一种结合注意力的全尺度特征融合RetinaNet(AFF-RetinaNet)宫颈异常细胞检测算法.首先,采用ResNeSt-50作为特征提取网络提取宫颈异常细胞的细微特征;其次,引入平衡特征金字塔(BFP)结构,对所有特征层进行全尺度融合,增强小目标的语义信息,并利用BFP中的非局部注意力模块获取图像的全局信息,以进一步增强特征空间的语义信息;最后,采用CIoU Loss作为回归分支的损失函数,以提高对异常细胞边界回归的准确率.另外,针对实际应用场景,基于AFF-RetinaNet算法实现了全视野宫颈细胞病理学图像(WSI)推理流程,并基于该推理流程对WSI中的异常细胞进行了检测.AFF-RetinaNet在宫颈异常细胞数据集上的平均精度均值(mAP)为83.4%,其中对小目标的mAP值(mAP-s)达到了24.4%,相较于基准RetinaNet算法分别提高了3.2个百分点和10.8个百分点.基于AFF-Retina的WSI推理结果在感兴趣区域中的mAP为70.8%.实验结果表明:AFF-RetinaNet算法可以增强对小尺寸异常细胞的检测能力,有效提升宫颈异常细胞的检测精度.基于AFF-RetinaNet的宫颈WSI推理流程可辅助医生快速定位高分辨率宫颈WSI中的异常细胞,有望减轻医生的阅片负担.

不同稀释液对混合酶标抗体稳定性的影响

目的 探讨不同稀释液对混合酶标抗体稳定性的影响,筛选出一种适用于混合酶标抗体的稀释液,可同时保护辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)偶联二抗和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)偶联二抗鸡尾酒混合物的稳定性。方法 以Tris-HCl缓冲盐溶液为基础溶液,设置4种不同的稀释液配方(A、B、C、D),每种配方包含不同类型的稳定剂,如蛋白、金属离子、表面活性剂、抑菌剂等,采用不同的稀释液配置混合酶标抗体,在冷藏(2~8℃)和37℃条件下存储,通过ELISA、酶活测定及免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色法检测其稳定性。结果 D液配方[Tris(50 mmol/L)+牛血清白蛋白(1.5%,g/100mL)+Tween-20(0.3%)+Proclin-950(0.1%,g/100 mL)+氯化钠(150 mmol/L)+L-Ascorbic Acid(1 mmol/L)+L-methionine(5 mmol/L)+L-histidine(5 mmol/L)+酪蛋白酸钠(1%,g/100 mL)+氯化锌(0.1 mmol/L)+海藻糖(8%,g/100 mL)]保存试剂的稳定性最好,在37℃条件下保存10周,HRP偶联二抗和AP偶联二抗的工作液效价最高,HRP和AP的活性剩余比率分别为93.46%和96.07%,IHC结果 无明显差异。结论 该配方稀释液可用于混合酶标抗体工作液的配置。