聚合酶链反应在检测脑性瘫痪患儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)在检测脑性瘫痪 (CP)患儿人巨细胞病毒 (HCMV)感染中的意义。方法 对 5 6例CP患儿用PCR检测尿巨细胞病毒 (CMV)DNA ,病毒分离检测尿标本 ,观察CMV特征性致细胞病变效应 (CPE) ,ELISA检测血清CMVIgM和IgG。结果 PCR检测CMVDNA阳性率为 5 3 .6% ,9例CMV病毒分离结果阳性 ;CMVIgM、IgG阳性率分别为 12 .5 %、3 7.5 % ;病毒分离 :CMVIgM阳性与CMVDNA阳性的符合率分别为 10 0 %、10 % ,前两者与后者比较均有显著差异 (P <0 .0 1) ;CMVIgG阳性与PCR阳性符合率为 6.7% ,两者无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 PCR检测CMVDNA能够早期快速检测到CP患儿CMV感染 ,可应用于CP患儿中CMV感染的检测 ,为早期干预提供可靠依据。

HCMV pp65截短蛋白原核表达条件优化

为了提高HCMVpp65蛋白片段在大肠杆菌中表达量,研究了不同发酵条件对其表达的影响,包括培养基、接种量、温度、摇床转速、pH、诱导时间以及诱导剂IPTG使用浓度等。结果表明,以LB培养基为发酵液,按5%接种量,37℃培养3h后IPTG诱导5h,重组菌菌体生物量为0.6g/L,目的蛋白表达量达18mg/L。用3.7L发酵罐进行放大培养,菌体生物量达0.85g/L,最高目的蛋白表达量达到25mg/L。

非特异性下腰痛患者血清中人巨细胞病毒pp65抗体检测与腰背痛的相关性

目的:通过对非特异性下腰痛患者血清中人巨细胞病毒pp65抗体的检测,试图探究人巨细胞病毒潜伏感染在非特异性下腰痛中的潜在致病作用。方法:实验于2002-05/2004-01在安徽医科大学第一附属医院康复医学科门诊完成。比较3组不同人群外周血清人巨细胞病毒pp65IgM抗体阳性水平。分别采集3组空腹静脉血2mL,作为待检血清。用间接酶联免疫吸附法即人巨细胞病毒pp65重组蛋白抗原包被96孔酶标板,依次加入待测血清。经酶标抗人抗体显色后,用酶标仪(BIO-RAD,model550,US-A)测定A值。结果以(样品A450-本底)÷(对照组A450-本底)≥2.1判为阳性。结果:非特异性下腰痛组人巨细胞病毒pp65IgM阳性率为48.21%(27/56),高于健康大学生组的17.86%(5/28),差异有显著性意义(χ2=7.294,P=0.007);非特异性下腰痛组的人巨细胞病毒pp65IgM阳性率高于脑瘫患儿组的26.42%(14/53),差异有显著性意义(χ2=5.514,P=0.019)。结论:非特异性下腰痛患者出现腰痛症状时可能与人巨细胞病毒的再激活有关,但需进一步确定人巨细胞病毒pp65抗体阳性水平与临床症状的相关性、是否需要相应干预和干预后的变化,以及进行相应组织细胞的病毒分离从而获得腰痛与人巨细胞病毒再激活感染病源学结论的直接证据。对人巨细胞病毒感染与非特异性下腰痛的相关性进?

HCMV先天性感染胎鼠脑组织中iNOS基因的表达

目的 研究人巨细胞病毒 (HCMV)先天性感染小鼠及在不同剂量诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂和促进剂的干预下脑组织中的iNOS基因表达情况。方法 将 6～ 8周龄BALB/c小鼠分为 6组 ,每组 6只 ,♀♂各半。A组腹腔注射HCMV 1 0ml,B组、C组腹腔注射HCMV 1 0ml后2d ,分别每天腹腔注射氨基胍 (AG) 2 0 0mg/kg、2 0mg/kg ,D组、E组腹腔注射HCMV 1 0ml后 2d ,分别每天腹腔注射左旋精氨酸 (L Arg) 30 0mg/kg、30mg/kg ,F组为DMEM对照组 ,每天每只 0 2ml。持续 17d。以上各组在孕鼠受孕第19天 ,剖腹取胎鼠 ,观察各组胎鼠生长发育及体重 ,有无皮下出血、淤血等情况 ,同时取胎鼠脑组织 ,作以下检测 :①硝酸还原酶法测定脑组织匀浆中NO代谢产物亚硝酸盐的含量。②RT PCR测iNOSmRNA的转录。结果 HCMV感染各组孕鼠在孕 19d ,其体重明显低于对照组 ,有部分胎鼠发育迟缓并可见明显的出血现象。感染各组胎鼠脑组织匀浆NO代谢产物明显高于DMEM对照组 (P <0 0 0 1) ,以B组尤为明显 ,A、C、E组间无差异显著性。RT PCR在感染各组均扩增出iNOSmRNA特异性条带表达 ,B组信号量最高 ,D组信号最弱。DMEM对照组未检测到iNOS特异性条带。结论 HCMV先天性感染可刺激胎鼠脑组织iNOS的表达 ,其表达产物NO可能参与了脑组织病理损伤?

二甲亚砜对人巨细胞病毒初次分离促进作用的实验观察

目的 观察二甲亚砜 (DMSO)对人巨细胞病毒(HCMV)初次分离的影响。方法 将临床收集的 11例患者尿标本接种至两组人胚成纤维细胞 (HF)细胞中进行HCMV分离。 1组为DMSO细胞组 ,即在培养液中添加了终浓度为1%的DMSO ;另 1组为常规细胞组接种组 ,设为对照 ,不作任何处理。待细胞出现HCMV特征性细胞病变 (CPE)时 ,通过PCR法测定HCMVDNA加以确证。结果 11例标本中 ,两组均有 5例标本出现HCMVCPE ,且标本号一致。但DMSO细胞组CPE出现时间比对照组提前约 9～ 12d。结论 DMSO对HCMV初次分离的阳性结果没影响 ,但可使HCMV特征性CPE的出现得以提前 ,加快了临床标本中HCMV的分离。

下腰痛症状与巨细胞病毒感染

目的:探寻人巨细胞病毒感染与下腰痛存在的相关性,旨在进一步阐述下腰痛的可能病因。资料来源:应用计算机检索Medline 1992-01/2004-04的文章,检索词为“backpain,human cytomegalovirus,virus”,限定文章语言种类为Eng-lish。同时检索http://www.wanfangdata.com.cn/1998-01/2004-12的文章,检索词为“腰痛、人巨细胞病毒”,限定文章语言为中文。资料选择:纳入标准:①腰痛的病因学研究。②人巨细胞病毒感染与疼痛的相关研究。排除标准:①较陈旧的文献。②重复研究。③综述文献。资料提炼:共检索到181篇巨细胞病毒感梁与下腰痛相关文献,其中25篇符合标准,排除的其余文章系同一类的重复性研究、较陈旧的及综述文献。资料综合:①下腰痛简介:成年人中60%～80%有下腰痛史,但85%的下腰痛原因不明,临床上不能针对病因开展有效治疗,由此导致5%～10%的下腰痛转为慢性或致残,因而倍受国内外学者关注。Muneshige等指出病毒感染理论是揭开慢性局部疼痛之谜有吸引力的假说。②人巨细胞病毒简介:成年人群中人巨细胞病毒感染非常普遍,其抗体阳性率为40%～100%。人巨细胞病毒感染的临床类型分为亚临床感染/隐性感染和症状性感染。③人巨细胞病毒可能引起下腰痛的途径:有先天性感染、围生期感染和后天性感染;试验研究显示许多脊柱结构,包括韧带、平面关节、椎骨骨膜、椎骨周围的肌肉和筋膜、血管、纤维环和脊神经根病变可导致下腰痛。结论:人巨细胞病毒感染与下腰痛可能具有相关性,但其确切关系尚待进一步观察验证。

一种培养鉴定风疹病毒的简便试验方法的建立

目的 建立使风疹病毒 (RV)在Vero细胞 (非洲绿猴肾传代细胞株 )上产生的细胞病变效应 (CPE)易于观察的简便试验方法 ,以利于病毒的分离、培养与鉴定。方法 在RV接种Vero细胞 4天后 ,用不同 pH值 (4 0、4 5、5 0、5 5、6 0、7 0 )的融合营养液处理细胞 ,继续按常规条件培养 1天后 ,在倒置显微镜下观察RV引起的特征性CPE 多核巨细胞 ,染色后计数多核巨细胞的形成率。同时检测在不同条件(融合时间、病毒接种初始滴度 )下 ,多核巨细胞形成率的变化。结果 感染RV的Vero细胞经过酸性融合营养液的处理 ,可出现RV特征性CPE 多核巨细胞。发现在 37℃、pH5 0的酸性融合营养液处理染毒细胞 10min后 ,继续培养 1天 ,出现的细胞病变形态最典型 ,染色后计数发现多核巨细胞的形成率最高 ,为 14 7% (P <0 0 1)。融合处理的时间对多核巨细胞的形成率没有影响。随着病毒接种初始滴度的降低 ,多核巨细胞的形成率也相应降低。结论 此方法简单、易行 ,使RV在Vero细胞上产生的细胞病变清晰易观察。

蚀斑法定量测定HSV-2病毒颗粒的优化实验条件

目的建立稳定易操作的HSV-2蚀斑技术,为纯化和定量测定HSV-2毒株的感染性研究提供依据。方法HSV-2病毒悬液接种至Hela细胞单层,分别经37℃吸附和室温吸附60min,用含0·75%琼脂糖或0·75%羧甲基纤维素RPMI1640液覆盖,3d后用1%结晶紫染色5min,记数蚀斑数量,在挑取蚀斑接种扩增及保藏的同时,应用PCR法对蚀斑培养物进行鉴定。结果蚀斑经1%结晶紫染色在Hela细胞单层上呈紫色,多为圆形,着色深,散在分布,与周围区域界限明显。用琼脂糖和羧甲基纤维素覆盖下所形成的蚀斑大小及形状不同,但病毒滴度差异无显著性(P>0·05)。经室温和37℃吸附的病毒滴度差异亦无显著性(P>0·05)。结论建立了简便易行的蚀斑形成测定方法,可准确滴定HSV-2病毒感染数量和感染力。

小鼠心肌组织裂解上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡

目的研究小鼠心肌上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡的作用.方法在Sp2/0细胞培养孔中,分别加入不同稀释度(1∶6,1∶12,1∶24)的小鼠心肌上清液和环磷酰胺,24h后镜下观察细胞形态,并于48h后流式细胞仪检测凋亡细胞的比率;同时,Sp2/0细胞和小鼠心肌细胞共培养,10h后观察Sp2/0细胞形态学变化;并用不同稀释度(1∶5,1∶10,1∶20,1∶40)小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液及环磷酰胺诱导Sp2/0,HeLa,Hep-2和Vero细胞凋亡,并比较其差异.结果不同稀释度的心肌裂解上清液均可诱导Sp2/0细胞的凋亡,尤以高稀释度更明显;小鼠心肌细胞与Sp2/0细胞共培养10h后,少部分Sp2/0细胞出现凋亡;小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液均可引起Sp2/0,HeLa,Hep-2和Vero细胞发生凋亡,但小鼠心肌裂解上清液作用明显,且作用时间持久.结论小鼠心肌组织裂解上清液具有明显诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡的作用.

单剂蛋白-微球免疫诱导的抗结核杆菌Mtb8．4的CD8^＋T细胞介导的强免疫应答

结核杆菌抗原Mtb8．4是结核杆菌特有的T细胞免疫优势抗原，能使结核杆菌纯蛋白衍生物(PPD)阳性供者的外周血单个核细胞(PBMC)产生增殖，并产生γ干扰素(IFN-γ)。美国Corixa公司Evans以聚丙交酯乙交酯(PLG)为基质制备的Mtb8．4蛋白-微球为坚实的固体球形结构，直径为2μm，5周测定期间蛋白呈梯度释放。

合肥市新报告HIV-1感染者传播性耐药特征及分子传播网络研究

目的研究安徽省合肥市2020年新报告HIV-1感染者的传播性耐药(transmitted drug resistance,TDR)及分子传播网络情况。方法收集合肥市2020年1—12月新报告HIV-1感染者,扩增pol基因区(2253~3314 nt),判定基因型耐药情况,构建分子传播网络并分析进入网络病例的相关特征。结果成功扩增pol基因区序列376条,主要的毒株为CRF07BC(157,41.8%)和CRF01AE(136,36.2%)。新报告感染者TDR为2.7%(10/376),10例携带监测性耐药突变(surveillance drug resistance mutation,SDRM),并且毒株CRF5501B所占比例较大(4/10)。分别以0.5%作为基因距离阈值构建了分子传播网络,CRF01AE的大型网络以已婚中年男男性行为者(men who have sex with men,MSM)为主,而CRF07BC则以教育水平较高的未婚MSM为主。通过logistic回归分析入网的影响因素发现CD4细胞计数在200~500个/μL者(aOR=3.219,95%CI:1.226~8.452)与CD4细胞计数>500个/μL者(aOR=5.375,95%CI:1.664~17.364)更易进入网络。结论合肥地区2020年新报告HIV-1感染人群以中青年MSM为主,TDR较低,但要加强CRF5501B的耐药监测。

合肥市男男性行为人群HIV-1感染者原发耐药性分析

目的研究合肥市男男性行为人群(MSM)中未经抗病毒治疗的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者的HIV-1基因亚型和耐药突变的发生流行情况。方法收集合肥市2011-2012年确认的35例HIV-l感染者外周静脉血,提取血浆中HIV基因组RNA,用逆转录PCR(RT-PCR)和巢式PCR方法扩增HIV-1 pol区核酸序列,基因序列测定、拼接后,上传至美国斯坦福大学HIV耐药数据库在线进行耐药性分析。结果获得的35个pol区有效序列中,CRF01_AE亚型比例最大,达57.1%(20例);其次为B亚型,达34.3%(12例)。没有针对蛋白酶抑制剂(PIs)的主要耐药性基因突变。发现针对非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)的耐药突变2例,其中仅1例携带V179D原发耐药变异。对依非韦伦(efavii-rens,EFV)、奈韦拉平(nevirapine,NVP)、依曲韦林(etravirine,ETR)和利匹韦林(rilpivirin,RPV10)存在不同程度的耐药,RT区耐药株传播率为2.9%。结论在合肥市MSM人群中,未经治疗的新发HIV感染者已经出现针对非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)的耐药突变株,应引起重视;原发耐药目前尚处于较低水平(<5%)。

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65重组抗原酶联免疫吸附法的建立与两种方法的比较分析

目的用我们研制的一种新人巨细胞病毒(HCMV)重组被膜磷蛋白pp65为抗原,建立快速、简便和特异的检测HCMVIgM的间接酶联免疫吸附法(RECELISA)。方法用自行设计、表达的新的HCMVpp65重组抗原,建立RECELISA,并检测100份临床疑似为HCMV感染者血清中HCMVIgM,同时与全病毒为抗原的间接ELISA法(简称全病毒ELISA法)和美国BioCheck试剂盒(简称BioCheck法)检测结果进行比较。结果RECELISA法重组抗原最适量为3.5μg/孔,HRP标记二抗为1∶800,血清稀释度为1∶100;稳定性试验阳性变异系数(CV)为9.5%,重复性试验平均CV值:批内CV4.5%,批间CV9.6%。RECELISA法、全病毒ELISA法和BioCheck法检测HCMVIgM的阳性率分别为44%、50%和45%;RECELISA法的敏感性为95.6%,其特异性(98.2%)高于全病毒ELISA法(90.9%);正确指数为92.8%,与BioCheck法一致性为97.0%。结论用pp65重组抗原建立的RECELISA法具有高度特异性与敏感性,且操作简单、快速,重复性好;与全病毒抗原相比,重组抗原可规模化、标准化生产,且更安全、经济,具有良好的临床应用前景。

合肥市健康人群A、C、Y、W135群流行性脑脊髓膜炎抗体浓度水平研究

目的掌握合肥市健康人群A、C、Y、W135群流行性脑脊髓膜炎(流脑)抗体浓度水平,监测免疫状况和流行趋势,探讨定量监测标准。方法应用分层随机抽样方法,以合肥市辖区县划分为7个研究地区,调查流脑流行季节流行前期健康人群945例。应用酶联免疫吸附试验,分析血清样本A、C、Y、W135群流脑抗体浓度水平。结果945例健康人群中,A、C、Y、W135群流脑抗体浓度中位数分别是12.06、4.08、2.36、1.25μg/ml,几何平均浓度(GMC)分别是11.75、4.57、2.32、1.35μg/ml;Y、W135群流脑抗体浓度单侧百分位数P95分别是8.74μg/ml和5.60μg/ml。A、C、Y、W135群流脑抗体浓度不同年龄组之间差异有统计学意义,A群和C群≤1岁最高,21～30岁最低;Y群和W135群21～30岁最高。结论合肥市健康人群流脑抗体浓度水平,A群较高,C群偏低,Y、W135群最低。需要规范监测方法,明确定量监测标准,以利于全国不同区域之间资料分析。

合肥市HIV-1感染者基因亚型和耐药性突变调查与研究

目的了解合肥地区艾滋病病毒Ⅰ型(human immundeficiency virus 1,HIV-1)基因亚型及耐药性HIV-1的流行情况,为制定防治措施提供科学依据。方法应用巢式RT-PCR扩增HIV-1 POL区聚合酶基因,经DNA测序后进行进化系统树分析和重组分析,以确定HIV-1基因亚型和重组体,并与国际耐药数据库比对,辨别耐药性突变位点,结合流行病学资料进行分析。结果收集93例合肥地区HIV-1感染者,经RT-PCR扩增并获得有效基因亚型序列77例,基因分型以CRF01_AE重组亚型为主,有46例(59.7%);其次是CRF07_BC亚型23例(29.9%)、B亚型6例(7.8%)和CRF08_BC亚型2例(2.6%)。耐药分析结果表明,在65例未治疗人群中,发现1例(1.5%)蛋白酶抑制剂(PIs)主要耐药基因突变,2例(3.1%)反转录酶抑制剂(RTIs)耐药基因突变。抗病毒治疗组出现耐药突变位点6例(50.0%)高于非治疗组3例(4.6%)(2=20.21,P<0.001)。结论本研究分析了合肥地区HIV-1基因亚型和耐药突变的流行情况,初步了解合肥地区的HIV-1遗传变异多样性并建立耐药检测体系,对合肥地区的艾滋病预防和控制工作有一定指导意义。

安徽省强制戒毒人群HIV、HCV和梅毒感染状况及影响因素分析

目的了解安徽省强制戒毒人群行为特征及HIV、HCV和梅毒感染状况,并探究其影响因素。方法以2018年7月1日―2020年6月30日新进入安徽省滨湖强制隔离戒毒所的强制戒毒人员作为调查对象,收集调查对象人口学和行为学信息,采集血液进行相关抗体检测,并进行单因素χ^(2)检验和多因素Logistic回归分析模型分析探究感染的影响因素。结果950名戒毒人员以男性为主,平均年龄(34.98±8.54)岁,吸食新型毒品者占84.5%(803/950)。HIV、HCV和梅毒抗体阳性率分别为1.2%、10.0%和9.2%。多因素Logistic回归分析结果表示,女性(OR=3.84,95%CI=2.35~6.27)、HIV抗体阳性(OR=6.19,95%CI=1.42~26.96)是梅毒感染的影响因素,最近1年接受过同伴教育(OR=0.44,95%CI=0.23~0.87)是梅毒感染的保护因素;而女性(OR=2.05,95%CI=1.08~3.89)、年龄≥50岁(OR=6.77,95%CI=1.35~33.95)、注射吸毒(OR=51.84,95%CI=27.65~97.19)是HCV感染的影响因素。结论安徽省强制戒毒人群以新型毒品吸食者为主,需加强对新型毒品的管制,同时针对女性、高龄组和有注射行为吸毒人群制定有效干预措施。

合肥市适龄儿童麻疹疫苗强化免疫效果评价

目的了解合肥市适龄儿童麻疹疫苗(MV)强化免疫活动(SIA)效果及影响因素,为调整和实施消除麻疹策略提供参考。方法应用分层随机抽样法,选择合肥市社区疫苗接种门诊、幼儿园、小学、中学等作为研究点,分析8月龄～14岁儿童SIA前后麻疹抗体水平。SIA前后分别调查儿童340名和348名,应用描述统计方法,分析SIA前后麻疹流行状况。结果合肥市适龄儿童MV总体接种率为98.04%。SIA后麻疹抗体阳性率、几何平均滴度(GMT)均上升,麻疹抗体阳性率为91.38%。1～4岁组、≥3次免疫史者GMT分别为最高,Logistic多元回归分析显示,1次免疫史者抗体保护水平低。2010年麻疹发病率为0.81/10万,较2009年下降91.86%,发病年龄以婴儿为主,≥2次免疫史者病例构成比最低。结论在麻疹逐渐减弱流行阶段,需要规范适龄儿童首剂次、2剂次MV常规免疫,开展必要强化免疫,加强免疫规划和病例监测质量管理。

合肥市麻疹实验室质量管理分析

目的本文旨在分析麻疹实验室质量管理方法,评估实验室监测能力。方法研究应用室内质量控制和室间质量考评模式。室内质量控制采用即刻法和L-J质控图相结合方法。室间质量考评内容包括血清学盲样分析,常规监测样本复核证实,现场考核。结果 2009-2011年,即刻法和L-J质控图结果分析,质控血清S/CO值未出现告警值和失控值。室间质量考评中,3个年度常规监测样本复核证实,每年分别为30份,结果均为100%符合;2010年盲样考评血清20份,正确率100%;2010年现场考核内容包括实验室建设、仪器设备、人员状况、质量管理、文件记录、常规监测状况等,综合评分97分。3个年度室间质量考评成绩均为优秀。结论建立长效稳定质量控制措施,实施综合实验室质量管理,提高了麻疹监测体系监督能力和效果。

4种食源性致病菌的多重PCR检测方法的建立

目的：建立一种快速、经济、实用的多重PCR方法,能同时检测4种常见致病菌。方法：根据沙门菌的侵袭蛋白A（invasion protein A,invA）、志贺菌的侵袭性质粒抗原H基因（invasion plasmid antigen,ipaH）、副溶血性弧菌的属特异性基因（thermolabile hemolysin,tl）和肠致病性大肠埃希菌的微绒毛粘连基因（eaeA）分别设计了4对引物,预计PCR扩增的目的片段依次为284、606、450、891 bp。对单个基因PCR和单管多重PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立了快速检测沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、肠致病性大肠埃希菌的单管多重PCR方法。结果：含沙门菌42 cfu/g、志贺菌36 cfu/g、副溶血性弧菌116 cfu/g、肠致病性大肠埃希菌91 cfu/g的肉馅样品经过增菌、DNA提取、扩增、电泳,在16-18 h内应用多重PCR体系能够检出。通过对12株目的菌和15株非目的菌检测,提示该体系特异性高。结论：初步建立能快速、灵敏、特异地检测沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、肠致病性大肠埃希菌的多重PCR体系,可以作为食物中毒病原菌检测的有效方法。