毛冠鹿种内异染色质变化与染色体多态

采用原代和传代培养方法对8头毛冠鹿(Elaphodus cephalophus)的皮肤细胞进行了染色体研究,发现了一种核型与以前所报道的几种核型不一致,确定为一新核型。在该核型中,染色体众数2n=47,2条X染色体异型,一条为端着丝粒,另一条为近端着丝粒。C-带显示该核型中异染色质除了分布在2条X染色体长臂中之外,在第一对大的端着丝粒染色体中的一条近着丝粒区出现一异染色质“柄”。结合C-带及薄层扫描结果对毛冠鹿种内常染色体、性染色体中异染色质的含量和分布与染色体多态的关系进行了探讨。

LA-PCR法制备赤麂Y_2涂染探针与原位杂交

应用显微切割技术获得赤麂的Y2单条染色体,经LA-PCR(linker-adaptor PCR)扩增后用D IG标记制备探针,然后用Southern b lot杂交法对所制备的探针进行验证并对毛冠鹿的中期核型进行原位杂交.结果表明:用该法制备的涂染探针是成功的,原位杂交也获得了阳性结果,可以初步验证毛冠鹿中的Y染色体.

核干细胞因子基因在人肝癌组织及细胞中转录特征及临床意义

目的研究核干细胞因子(nucleostemin,NS)基因在肝癌组织和细胞中的表达特性,探讨其在肝癌发生中的意义。方法用PCR方法从人肝癌cDNA中分别进行NS片段和全长基因的扩增,并将扩增产物连接到pMD18-T载体进行测序验证;在40例肝癌和癌旁组织,以及3种肝癌细胞系cDNA中进行NS片段的PCR扩增及分析。结果分别从肝癌cDNA克隆到了NS基因的部分片段(450bp)及全长(1650bp);发现在肝癌组织中NS的表达高于癌旁组织,临床病例分析表明3期和4期病例NS基因上调表达显著高于下调表达;肝癌细胞株分析结果提示,NS基因随肝癌细胞转移能力的增加表达量增加。结论NS基因参与肝癌细胞的增殖过程,对肝癌的发生起促进作用。

rhVEGF_(165)在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达、纯化及其生物学活性

利用哺乳动物细胞表达系统,稳定表达和纯化高生物学活性的人重组血管内皮生长因子(VEGF165)蛋白。将VEGF165克隆于表达载体pCDNA4.0,与T-GS载体共同转染CHO-S(中国仓鼠卵巢细胞)细胞,MSX(Methionine sulphoximine)加压筛选高表达细胞株,5 L发酵罐培养,细胞培养上清液通过三步纯化得到rhVEGF165蛋白,通过Western blotting、Biacore和人脐静脉内皮细胞增殖实验等对表达蛋白的特异性、亲和力及生物学活性等进行检测。所建立的细胞株其rhVEGF165蛋白表达量约50 mg/L,纯化后纯度达到90%以上,细胞活性EC50为1.94 ng/mL。成功筛选到高表达rhVEGF165的CHO细胞株,纯化得到高活性、高亲和力的rhVEGF165蛋白。