人肿瘤抑素相关T21RGD肽的表达与纯化

目的构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽（T21RGD）-内含肽-几丁质结合蛋白融合表达载体，实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化。方法人工设计合成T21RGD肽基因，经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2，酶切和测序鉴定正确后转化人大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导其融合表达，对表达蛋白进行几丁质珠亲和层析，DTF诱导柱上裂解以获得T21RGD肽。经Trcine—SDS—PAGE和反相高效液相色谱（RP—HPLC）对纯化产物进行鉴定。结果质粒酶切和测序结果显示，含T21RGD肽基因按正确方向和序列插入质粒，融合蛋白表达量达菌体蛋白总量的50％以上，Trcine—SDS—PAGE显示了T21RGD肽目的条带与预期相符，反相高效液相色谱测定峰纯度达97％。结论成功构建T21RGD肽融合表达载体，实现了融合蛋白在大肠杆菌中高效表达和T21RGD肽几丁质珠亲和层析一步纯化，为进一步研究T21RGD肽抗肿瘤活性和作用机制奠定基础。