沙门氏菌属随机扩增多态性DNA PCR条件的优化

目的:以5′-CCGAAGCTGC-3′为引物,利用随机引物扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对沙门氏菌属的几种菌株进行扩增,以确定RAPD的最终优化条件。方法:首先选用25μl体系PCR和50μl体系PCR做对比,以确定进行RAPD实验最佳的PCR体系。其次进行PCR反应体系条件的优化,对PCR复性温度、引物浓度、Mg2+浓度进行条件优化。最后对初步确定的优化结果进行不同琼脂糖胶浓度梯度的优化以确定RAPD的最终优化条件。结果:RAPD优化条件为PCR复性32℃,25mmol/LMg2+溶液体积2.0μl,10μmol/L引物体积0.2μl,琼脂糖胶浓度1.0%。结论:在优化条件下,以引物5′-CCGAAGCTGC-3′对沙门氏菌属的3种标准菌株,9株食品分离株进行扩增,得到的电泳条带最多,且最清晰。

CdS量子点制备与单增李斯特菌抗体偶联的研究

以CdCl2和Na2S为原料,以巯基乙酸为稳定剂,采取水相合成方法制备了CdS量子点。结果表明,合成CdS量子点最佳条件是:作用时间3h,[Cd2+]∶[S2-]为2∶1,50μL稳定剂,pH8.0,反应温度30℃。通过EDC.HCl和NHS的作用,成功地将单增李斯特菌抗体IgG与CdS量子点偶联。偶联后的IgG-CdS荧光强度显著增强,为偶联前的4倍。血清凝集反应和直接免疫荧光实验证明,偶联CdS量子点的单增李斯特菌抗体的特性没有发生变化,在荧光显微镜下可快速灵敏地检测出单增李斯特菌。本方法特异性强、稳定性和重复性高,可用于食品中致病菌的快速检测。

随机扩增多态性DNA技术在沙门氏菌同源性分析中的应用

目的:利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphicDNA,RAPD)对从食品、蛋品样本或从业人员中收集到的67个地方菌株、4个模式菌株,涉及29种血清型的沙门氏菌进行同源性分析,为沙门氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供理论依据。方法:选用筛选得到的10个碱基引物(CCGAAGCTGC)运用RAPD技术对不同来源的71株沙门氏菌进行随即引物扩增,得到的RAPD图谱使用NTSYS-pc2.10e软件进行聚类分析。结果:相似性系数在0.70时,71株沙门氏菌可以分为七大类群,其中最多的一群内聚集的菌株达54株,相似性系数在0.90时,可以分为26个群,最多的一群内聚集的菌株达18株,相似性系数为1.00时,有9个组群,最多的一组群内聚集的菌株达11。同源性结果和血清学鉴定的结果有90%的吻合率。结论:RAPD检测技术可以用于沙门氏菌食源性疾病的流行病学调查和溯源。

GC-MS技术在鉴定食源性致病菌研究中的应用

通过有机溶剂提取、TLC分离及GC-MS对食源性致病菌中常见的4个属9种19株病原菌的全细胞脂肪酸组分进行了分析。结果表明:沙门氏菌属、埃希氏菌属、弧菌属和志贺氏菌属全细胞脂肪酸组分都含有十四烷酸、十六烷酸和十八碳烯酸,这三种脂肪酸占总脂肪酸含量的90%左右,含量最高的是十六烷酸,含量在40%以上,其次是十八碳烯酸,含量在30%左右。脂肪酸组成在属间差异显著。大肠杆菌O157不含有十三烷酸和十五烷酸,副溶血弧菌不含有十二烷酸和十三烷酸,志贺氏菌含有特异性的环戊烷十三烷酸。这些特征可作为各个属分类鉴定的依据。模式菌株和地方菌株在含有双键的脂肪酸上,双键的位置有一定的差异,因此通过这些差异可以鉴定模式菌株与地方菌株。

GC-MS联用分析测定志贺菌全细胞脂肪酸组成

目的:通过气相色谱-质谱法分析志贺菌全细胞脂肪酸,建立志贺菌全细胞脂肪酸的指纹图谱,为志贺菌的鉴定提供依据。方法:用气相色谱-质谱法分析了4种志贺菌的全细胞脂肪酸。结果:志贺菌全细胞脂肪酸主要脂肪酸有C12,C13,C14,C15,C16,C17,C18:1。志贺菌属脂肪酸成分都具有一定的特征,4个种之间也表现出一定的差异,标准菌株与地方菌株极其相似,同种不同来源的地方菌株表现出一定差异。结论:本结果为志贺菌的化学分类和快速鉴定提供参考资料。

志贺氏菌RAPD鉴定方法的建立

[目的]为志贺氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供理论依据。[方法]利用5个随机引物对4种不同来源的志贺氏菌进行RAPD扩增,并对得到的扩增图谱进行聚类分析。[结果]5个随机引物中,引物S3、S5表现出较好的多态性。在引物S5的扩增图谱中,志贺氏菌属中各菌均有1条600 bp左右和1条1 000 bp左右的共同谱带,而利用该引物扩增其他属细菌,扩增谱带很少或没有。这说明引物S5对志贺氏菌属细菌是特异性的。根据引物5的聚类分析结果,可将8株志贺氏菌分成4个类群。除宋内氏志贺氏菌外,其他3种6株菌间的相似系数均为1.00,与传统的血清型分型结果完全一致。[结论]采用引物S5的RAPD反应可用于志贺氏菌的快速检测。

麦芽提取物在发酵饮料中的应用

麦芽提取物是一种完全源自谷物的天然食品,它含有丰富的麦芽糖、果糖、葡萄糖、蛋白质、小分子肽、人体必须的氨基酸和多种维生素、矿物质,还含有具有保健功能的β-葡聚糖和生育酚。用麦芽提取物生产的麦芽汁发酵饮料营养丰富,风味浓郁、独特、醇厚。与传统麦芽汁发酵饮料生产工艺相比,生产过程不需要糖化,从而使得工艺更为简单,生产周期更短,设备投入减少,降低了成本。

麦精在面包中的应用

研究了麦精的不同添加量对面包烘焙品质的影响,并进行了面包的贮藏试验,得出了面包中麦精的最适添加量。研究发现,麦精的添加在一定程度上提高了面包的口感,改善了面包的感官品质、质构以及面包的持水性。此外添加麦精可以缩短发酵时间和烘焙时间,面包中麦精的最适添加量为4%。