黄瓜疫霉菌生防菌的筛选及鉴定

为了筛选对黄瓜疫霉菌有抑制作用的生防菌,采用土壤稀释法从湖南、北京等地采集的土壤样品中分离到269株放线菌和细菌,以黄瓜疫霉菌为靶标菌,通过平板对峙培养法,筛选出2株对黄瓜疫霉菌有明显拮抗作用的生防菌株。采用5倍稀释发酵液对黄瓜疫霉菌进行抑菌活性检测,放线菌X54和细菌P3的抑制率达到70%以上。通过培养形态特征观察、生理生化试验及16Sr DNA分子鉴定,放线菌X54为弗吉尼亚链霉菌(Streptomyces virginiae),细菌P3为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。

半巢式RT-Realtime PCR检测南芥菜花叶病毒

根据南芥菜花叶病毒(Ar MV)外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计合成了3条巢式PCR引物和1条Taq MAN荧光探针,建立了半巢式RT-Realtime PCR检测Ar MV的新方法。该方法有机地结合了巢式PCR和Taq MAN探针检测技术。第二步半巢式-RT-Realtime PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、Realtime PCR等方法高。结果表明:该方法检测灵敏度可达0.06 fg/μL植物总RNA。

半巢式RT-Realtime PCR检测番茄丛矮病毒

番茄丛矮病毒(ToBSV)是我国进境植物检疫对象,也是进境种子苗木等必检项目。该病毒能侵染番茄、曼陀罗、葡萄、豇豆等20余科120余种植物。该研究根据ToBSV全基因组中p33蛋白基因,设计引物和Taq Man探针,建立了半巢式实时PCR检测ToBSV的新方法。该研究巧妙地融合了巢式PCR和Taq Man探针技术,第二步半巢式-RT-Realtime PCR既进一步放大了第一步检测信号,也是对第一步PCR产物的确认,与单一的巢式PCR或Realtime PCR等方法相比其检测的准确性、灵敏度更高。该方法检测灵敏度可达50 fg/μL植物总RNA。

粉丝中植物源性成分的PCR定性检测方法研究

本研究针对绿豆、豌豆、玉米、红薯与马铃薯这 5个物种的特异基因序列 ,设计出多对引物 ,并分别从每个物种中选择特异与扩增效率最好的一对引物进行实验。通过特异性实验、重复性实验及灵敏性实验后 ,最终获得 5对引物 ,即绿豆引物MP4、豌豆引物PEP2、玉米引物CP1、红薯引物SP2、马铃薯引物POP2。采用这 5对引物进行PCR扩增 ,就可以检测出粉丝中这 5种植物源性成分。本方法准确、灵敏、快速 ,检测的灵敏度达 5 %。

巢式-多重RT-Realtime PCR检测马铃薯黑环斑病毒的研究

马铃薯黑环斑病毒(Potato black ringspot virus,PBRSV)是马铃薯重要病毒病害之一。本研究根据PBRSV基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)保守序列,设计合成了两对巢式PCR引物和1条Taq-MAN荧光探针,建立了巢式-多重RT-Realtime PCR检测PBRSV的新方法。该方法采用E.Z.N.ATM试剂盒快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR、多重PCR和探针检测技术。实验结果表明,该方法检测灵敏度可达450fg/μL植物总RNA。利用4对引物和1条TaqMAN探针对PCR阳性产物进行确认,本方法检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Realtime PCR等方法高。

巢式-多重RT-Realtime PCR检测马铃薯Y病毒脉坏死株系的方法

马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato virus Yvein necrosis strain,PVYn)是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本研究根据PVYn基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependentRNA polymerase,RDRP)基因序列保守区域,设计合成了两对巢式PCR引物和一条TaqMAN荧光探针,建立了巢式-多重RT-Real-time PCR检测PVYn的新方法。该方法采用E.Z.N.ATM快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR、多重PCR和探针检测技术。实验结果表明,本方法检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Real time PCR等方法高。该方法检测灵敏度可达3 fg/μL植物总RNA。利用四对引物和一条TaqMAN探针对PCR阳性产物进行确认,检测的准确性比其它方法高。

2006～2016年山东口岸进境再生资源截获有害生物情况分析

目的分析2006~2016年山东口岸进境再生资源疫情截获情况,提出检疫监管的合理化建议。方法从截获有害生物年变化规律、再生资源类型、有害生物类别、来源地、分支局、检疫性有害生物等方面进行统计,得出相关结论。结果截获有害生物种次变化趋势分别呈现明显的两个高峰和低谷时间段。废纸、废塑料、废有色金属、废五金电器截获有害生物种类最多。昆虫、杂草截获种类最多,昆虫截获种次最多。美国、日本、韩国、加拿大、英国位居截获来源地前5位。潍坊出入境检验检疫局、烟台出入境检验检疫局、淄博出入境检验检疫局、荣成出入境检验检疫局、黄岛出入境检验检疫局位居有截获记录分支局前5位。假高粱(及其杂交种)、豚草、三裂叶豚草、黑高粱、南方菟丝子、刺蒺藜草位居检疫性有害生物截获种次前6位。结论山东口岸进境再生资源具有种类较多、来源较广、携带有害生物风险高且疫情复杂的特点,建议综合运用多种手段提高再生资源有害生物疫情检出率,有效保护国门生物安全。

食品中沙门氏菌的NASBA快速检测技术

根据NCBI沙门氏菌属invA基因保守序列设计引物,建立NASBA检测方法,进行特异性试验和灵敏度试验,并采用人工添加菌株污染样品进行方法验证。结果表明,引物SM-F/SM-R特异性强,能够从污染样品中扩增出277 bp的特异性片段,试验中未出现假阳性和假阴性结果;灵敏度高,对目标菌检出限达到5.5 pg/μL总RNA;检测周期短,NASBA反应在42℃90 min即可进行有效扩增,24 h内可完成样品中目标菌的筛选。NASBA技术适用于基层检验机构和现场快速检测食源性致病菌。

浅谈大豆带病种子的诊断及危害

本文以检疫工作实践为基础,总结介绍了进境大豆检疫中几种常见种传病害的病粒症状、危害情况及防治措施。通过对大豆带病种子的直接检验,可现场识别部分种传病害,大大提高检验检疫效率。

辣椒制品中铁粉控制技术的研究

总结了近两年韩国对我国辣椒制品中的铁粉超标通报情况,根据通报情况,主要针对辣椒种子粉中的铁粉含量的分布规律进行了实验,并探讨了辣椒制品中的铁粉控制措施。按照文章所提出的控制措施,可将辣椒种子粉中的铁粉含量控制在10×10-6以下。

应用DGGE技术研究牙鲆在低温贮藏过程中的微生物动态变化

为延长水产品货架期,利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法,研究了牙鲆在低温贮藏条件下主要微生物的动态变化。提取鱼肉中微生物核酸,进行降落PCR扩增,得到多种微生物特异性保守核酸序列。利用变性梯度凝胶电泳分析扩增出的微生物核酸序列。DGGE图谱表明,新鲜牙鲆在贮藏初期微生物群落较为丰富,随着贮藏时间增长,只有几种优势菌存在。经DNA序列分析表明,牙鲆的特定腐败菌为腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、气单胞菌属(Aeromonas spp.)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。

半巢式RT-Realtime PCR检测马铃薯Y病毒脉坏死株系

马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato virusY,PVYn)是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本文根据PVYn基因组中RNA依赖的RNA聚合酶基因序列保守区域,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式RT-Realtime PCR检测PVYn的新方法。该方法采用E.Z.N.ATM快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术。第二步半巢式RT-Realtime PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、Real time PCR等方法高。实验结果表明,该方法检测灵敏度可达4fg/μL植物总RNA。

半巢式反转录实时荧光PCR检测马铃薯黑环斑病毒

本研究根据基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)保守序列,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式反转录实时荧光PCR检测PBRSV的新方法。该方法采用E.Z.N.ATM快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术。第二步半巢式反转录实时荧光PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Realtime PCR等方法高。实验结果表明,该方法检测灵敏度可达300fg/μL植物总RNA。

半巢式RT-Realtime PCR方法检测藜草花叶病毒

[目的]根据藜草花叶病毒(SoMV)全基因组中多聚蛋白质基因序列保守区,分别设计2套TaqMAN探针和引物,建立半巢式实时荧光PCR检测SoMV的新方法。[方法]提取病毒核酸进行反转录操作合成cDNA,依据设计好的2套TaqMAN探针和引物,分别进行实时荧光PCR特异性与灵敏度检测,并进行2套引物探针的扩增效率对比试验。[结果]方法特异性强,灵敏度高达0.4 fg/μL植物总RNA,2套引物探针的扩增效率试验对比结果显示扩增效率几乎完全一样。[结论]该方法适用于藜草花叶病毒的检疫鉴定。

豆象干标本基因组DNA提取方法的改进

[目的]筛选豆象干标本基因组DNA的有效提取方法。[方法]以口岸截获时间不等的豆象干标本为材料,在传统方法上加以改进,对从干标本中提取豆象基因组DNA的方法进行了研究。将其所提取的基因组DNA的纯度和浓度与CTAB法和SDS法进行了比较,并对DNA进行了完整性及PCR验证。[结果]与CTAB法和SDS法相比,豆象干标本提取方法提取的DNA OD260/OD280值均在1.7~1.9,且浓度合适。DNA完整性及PCR验证结果表明,豆象干标本提取方法比较适合后续PCR试验的开展。[结论]豆象干标本提取方法适合该研究中豆象干标本基因组DNA的提取,可推广到检验检疫工作中截获豆象的检疫鉴定中,以缩短检验检疫工作周期,提高检验检疫工作准确性。

水母入侵的潜在危害与口岸侦测技术设想

水母是一种在世界范围内频繁出现的入侵物种,本文介绍了水母入侵的现状和潜在危害,并提出了口岸侦测技术的设想。

2008—2017年全国口岸进境矿产品携带疫情分析

[目的]分析2008—2017年全国口岸进境矿产品携带有害生物疫情情况,提出进境矿产品查验及检疫鉴定工作合理化建议。[方法]分别从截获有害生物年变化规律、生物类别、矿产品类型、检疫性有害生物与一般有害生物情况、主要检疫性有害生物与主要来源地关系、来源地等方面对全国口岸2008—2017年进境矿产品截获的各类疫情进行统计分析。[结果]2008—2017年进境矿产品中有害生物截获种类和种次稳步增长,仅在2016年截获种次急剧增加;有害生物以昆虫、杂草截获种类最多,占截获种类总数的79.50%,昆虫截获种次最多,占截获总种次的60.82%;有害生物、检疫性有害生物的截获种类和种次均以非金属矿产品最多,金属矿产品次之;四纹豆象、双钩异翅长蠹、红火蚁、鹰嘴豆象、黑双棘长蠹、美国白蛾位居检疫性有害生物截获种次前6位,小杆线虫目、书虱、蚁科、米象、仓潜、家蝇、市蝇、滑刃属线虫位居一般性有害生物截获种次前8位;6种检疫性有害生物在9个来源国(地区)中的截获比例均在60%以上;共有93个国家和地区截获到有害生物,其中印度、朝鲜、拉脱维亚、巴西、土耳其、立陶宛、日本位居前7位。[结论]针对疫情截获情况,提出了进境矿产品查验及检疫鉴定工作的合理化建议,有效保护国门生物安全。

烟台地区葡萄主要病虫害发生特点及综防技术

通过走访与田间调查,阐述了烟台地区几种常见的葡萄病虫害发生特点,提出综合防治技术,以为果农病虫害防治提供技术指导。

烟台港口建设项目竣工环保验收监测工作探讨

建设项目环境保护验收监测是环保竣工验收的前期工作和基础,烟台港口众多建设项目竣工后,都要进行环保验收监测环节。本文结合实际工作,就如何做好项目竣工后的环保验收监测工作提出对策和建议,为今后验收监测工作的开展提供参考。

基于种特异性标记鉴定不同虫态草地贪夜蛾的技术研究

【目的】草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的卵、低龄幼虫、蛹甚至成虫和其他鳞翅目害虫混合发生时,常难以准确识别;植保监测站以及海关等获取的可能包括草地贪夜蛾等大量昆虫残片的混合样品,也需要快速准确的物种鉴定。本文构建了基于种特异性标记的草地贪夜蛾的快速准确鉴定方法。【方法】利用线粒体DNA COⅠ基因通用引物LCO1490/HCO2198扩增11种供试鳞翅目昆虫的COⅠ序列,然后根据草地贪夜蛾的保守序列片段设计6对PCR特异性引物、1对qPCR特异性引物和探针,提取供试昆虫的DNA,并以此为模板对引物进行种特异性检测。【结果】PCR引物SF_F3/SF_R3和qPCR引物60F/154R可特异性扩增不同虫态(卵、幼虫、蛹和成虫)的草地贪夜蛾基因组模板;灵敏度检测表明,PCR和qPCR引物对草地贪夜蛾DNA模板的最低检测浓度分别为1ng/μL和10pg/μL。【结论】本研究建立的基于种特异性标记的物种快速鉴定方法,提高了不同虫态的草地贪夜蛾的鉴定效率和准确度。