GPA，GPB分子相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列直接测序方法的建立及应用评价

目的建立人类GPA，GPB分子相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列的DNA直接测序方法，并将此方法应用于RBC血型MNS抗原的分析。方法以整群随机抽样法选择从2011年11月至2012年5月在本中心无偿献血的175例健康成年人的全血样品为研究对象。以血清学方法与序列特异引物聚合酶链反应（PCR—SSP）方法鉴定其MNS血型。根据GenBank提供的NG-007470与NG-007483基因参照序列为依据，自行设计GPA相关基因GYPA全部外显子的7对引物与GPB相关基因GYPB全部外显子的5对引物，探索最佳反应体系与PCR扩增条件，且能同时扩增2个基因全长外显子碱基序列，使用ABl3730XLDNA测序仪进行序列分析，以Oli6installer分析软件分析碱基序列。结果所建立的测序方法可于同一反应体系、相同PCR扩增条件同时检测GPA，GPB相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列，并准确分析本组血液样本的MNS血型的特征。基因测序结果与血清学分析及PCR—SSP鉴定结果完全一致。结论首次建立了稳定、精确、简捷的基因直接测序分型方法，可用于检测MNS血型基因型，并分析GPA，GPB肽链中氨基酸序列的多态性，为MNS血型系统的研究以及人类群体遗传学及分子进化的研究等方面提供广泛的应用价值。

H抗原缺乏血型个体FUT1和FUT2基因的序列分析

目的 探讨H抗原缺乏血型个体的FUT1和FUT2基因分型及测序结果.方法 选择2005-2014年深圳血液中心检出的13例H抗原缺乏血型个体为研究对象.采用常规血型血清学红细胞抗原、抗体凝集试验,对研究对象血液样本进行ABO正、反定型,Lewis血型及H抗原的鉴定;其中A或B抗原弱表达的样本,采用吸收及放散试验方法进行进一步抗原特异性鉴定.采用唾液凝集抑制试验,检测研究对象唾液样本中的ABH抗原物质.采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）、DNA直接测序及克隆测序的分子生物学方法,分析研究对象血液样本DNA的FUT1和FUT2基因序列.结果 13例H抗原缺失血型个体中有10例为H抗原缺乏-分泌型血型,2例为H抗原部分缺乏-分泌型血型,1例为H抗原缺乏-非分泌型血型.13例H抗原缺乏血型个体中FUT1基因型分布如下：3例为h547-552delAG/h547-552delAG,4例为h880-882delAG/h547-552delAG,2例为h880-882delTT/h880-882delTT,1例为h328G＞A/h360-400delGGTATTCCGCATCACCCTGCCCGTGCTGGCCCC（共33个碱基）,1例为h328G＞A/h880-882delTT,1例为h35C＞ T/h328G＞ A;658C＞T,1例h658C＞T/h658C＞T.13例H抗原缺乏血型个体样本的FUT2基因型分布如下：4例为正常野生型Se357 Se357,7例为Se357 se357,385,1例为Se357,716 Se357,716,1例为se357,385 se357,385.结论 FUT1和FUT2基因的点突变和碱基缺失是H抗原缺乏血型的分子基础.