GDNF和LIF对小鼠精原干细胞体外增殖的影响

【目的】探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和白血病抑制因子(LIF)对小鼠精原干细胞(SSCs)体外增殖的影响,为后续SSCs的诱导分化、转基因动物生产、基因治疗等研究奠定基础。【方法】收集6～8日龄小鼠睾丸,采用机械法和2步酶消化法获得细胞悬液。通过多次差异贴壁法分离纯化SSCs和支持细胞,采用碱性磷酸酶(AP)染色和RT-PCR检测Ngn3和Oct4基因2种方法对SSCs进行鉴定。采用单独添加GDNF(添加量为0,10,20,40ng/mL)或LIF(添加量为0,500,1 000,1 500U/mL)的无血清DMEM/F12培养基培养SSCs,于培养第3,5,7天取样,同时用添加GDNF和LIF(各因子单独添加量两两组合)的无血清DMEM/F12培养基培养SSCs,于培养第3,4,5天取样,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测GDNF、LIF对SSCs体外增殖的单因子效应和配伍效应。【结果】与对照组相比,不论培养时间如何,单独添加20和40ng/mL的GDNF可以显著促进SSCs增殖(P<0.05),而单独添加不同量LIF对SSCs增殖的影响不显著(P>0.05);同时添加20ng/mL GDNF和1 000U/mL LIF可以显著促进SSCs的增殖,在该条件下当精原干细胞接种密度为(6×104)～(10×104)mL-1,共培养5d时,其OD490值为0.696。【结论】DMEM/F12培养基中单独添加20ng/mL GDNF或同时添加20ng/mL GDNF和1 000U/mL LIF可以显著促进小鼠SSCs的体外增殖。

镉对中华蟾蜍蝌蚪生长、变态和Dios、TRs表达以及肝脏的影响

镉(cadmium,Cd)是一种典型的工业毒素和环境污染物,对两栖类生物具有强烈的毒性作用。为了探讨镉对两栖类生物的毒害作用,选择中华蟾蜍蝌蚪作为受试生物,研究了不同浓度Cd对中华蟾蜍蝌蚪生长、变态和Dios、TRs表达以及肝脏的的影响,结果表明,500μg·L^(^(-1))Cd可以极显著降低蝌蚪的变态率、全长、尾长和体重(P<0.01);Real-time PCR结果显示,在变态高峰期,500μg·L^(^(-1))Cd可以显著下调Dio2、TRα和TRβ mRNA的相对表达量(P<0.05),显著上调Dio3 mRNA的相对表达量(P<0.05);透射电镜试验结果显示Cd可以破坏中华蟾蜍蝌蚪肝脏细胞胞浆中的细胞器和胆管中的微绒毛。综合以上结果,可知,高浓度的Cd可以紊乱甲状腺的内分泌和导致肝脏的病变,进而影响中华蟾蜍蝌蚪的生长和变态。

Cd^(2+)处理后麻雀脑组织中糖皮质激素受体和盐皮质激素受体表达变化

目的检测在Cd^(2+)处理后糖皮质激素受体(GR)和盐皮质激素受体(MR)在麻雀Passer montanus脑组织中的表达变化。方法 6只麻雀随机分成2组,每组3只。处理组饮水中添加500μg·L^(-1)Cd^(2+),对照组不添加。用Clustal W2将麻雀的GR和MR氨基酸序列与其他物种氨基酸序列进行相似性比对分析。采用Real-time PCR检测基础水平下麻雀各组织中GR和MR基因的表达水平。Cd^(2+)处理后,测定GR和MR基因在脑组织中的表达变化。结果麻雀与斑胸草雀Taeniopygia guttata和原鸡Gallus gallus的GR和MR氨基酸序列的相似性大于90%;GR和MR基因在麻雀肝脏、肠、心脏、眼球、脑、肺、肌肉、肾脏和性腺9个组织中均有表达;Cd^(2+)处理后,处理组脑组织中GR和MR mRNA表达水平均上调,且显著高于对照组(P<0.05)。结论 GR和MR在麻雀各组织中广泛表达;推测GR和MR基因在Cd^(2+)的应激反应中具有重要作用,具体作用还有待于进一步论证,同时该研究为野外工作提供了一定的实验依据。

粪便和毛发取样法在麝科动物中的研究进展

麝(Moschus)是亚洲东部特有的小型反刍动物,是珍稀濒危资源动物。因麝机警灵敏,胆怯性急,耐受力差,传统的取样方法会造成不同程度的伤害,不利于保护野生种群和可持续利用麝资源。收集粪便和毛发样品是在不触及动物或低干扰动物正常活动的情况下进行的,有助于麝资源的保护。文章系统总结了麝科动物粪便和毛发的取样方法及其在麝科动物遗传多样性、疾病、应激反应、生殖生理等方面的应用研究,并对粪便和毛发取样法在麝科动物的应用前景进行展望。

改进的直流侧串联型有源电力滤波器

提出一种单相输出可调压的新型直流侧串联型有源电力滤波器(active power filter,APF),对单相整流类负载进行功率因数校正和谐波治理有很大的技术优势。从理论上分析了改进型直流侧APF的电路拓扑和基本工作原理,给出了主电路的主要参数设计和选取标准,为系统的综合设计提供了理论依据。与传统的交流侧串联型APF相比,该APF串联在整流桥的直流侧,简化了电路结构,减少了有源开关的数量;与直流侧串联型APF相比,该改进型APF实现了输出电压的可调,简化了相应的控制和驱动电路,进一步减小了储能电容容量。仿真和实验结果证明了所提出拓扑的正确性和可靠性。

林麝粪便中睾酮HLPC和ELISA检测方法的比较

以圈养林麝为研究对象,采集发情期雄麝粪便,通过比较和评价高效液相色谱(HLPC)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对林麝粪便睾酮检出效率;选择检测结果较好的方法对空气中放置不同时间的粪便睾酮水平、发情期睾酮水平、林麝交配质量和麝香分泌量之间的关系,进行初步评价。结果表明,所有样本经聚合酶链反应(PCR)技术检测均为林麝样本;对睾酮标准品进行检测,HPLC最低检测限为74ng/mL,ELISA试剂盒检测最低限度为10pg/mL。两种方法检测粪便样本,发现HPLC没有睾酮信号峰,而ELISA检测样本浓度为2.408ng/mL。ELISA检测粪便在空气中暴露0、2、4d睾酮水平差异不显著(P>0.05),但与0d相比,6d的睾酮水平显著下降(P<0.05)。交配能力弱组与交配能力强组麝香产量无显著差异(P>0.05)。结果证明,HPLC适用于林麝粪便睾酮水平高于74ng/mL的检测;粪便于室温空气暴露6d,会显著影响粪便检测的睾酮水平(P<0.05)。因此,采集4d前的林麝粪便均可用于睾酮检测;林麝睾酮水平与交配能力相关。

两种方法从林麝粪便提取DNA效率及分析

采集林麝DNA样本获得快捷、有效的DNA提取方法是其分子标记,良种遗传选育的分子基础。以林麝粪便为研究对象,用常规和改良的方法比较提取林麝粪便DNA的效率,两种方法分别设为对照组和试验组。采集林麝粪便后分别在空气暴露0、2、4、6d。用对照组和试验组两种方法提取粪便DNA,以林麝GAPDH为目的基因,用PCR方法扩增样本。琼脂糖凝胶电泳分离DNA目的条带,以空气暴露0d的粪便DNA条带光密度值为参考,2、4、6d粪便DNA条带光密度值与0d进行比较获得相对光密度值。结果发现,随着时间延长,林麝粪便逐渐失去光泽,表面粗糙;对照组和试验组两种方法均能有效提取林麝DNA。试验组2d和4d与0d相比较DNA水平显著上升,6d与0d没有显著差异;对照组仅在2d提取的DNA水平上升,而4d和6d显著下降到0d的水平。以对照组为参照,两组各时间点相比,试验组获得的DNA水平显著高于对照组。研究结果表明,试验组提取DNA的方法可显著提高林麝粪便DNA的获得率。

改进型直流侧有源电力滤波器参数设计及仿真

针对直流侧串联型有源电力滤波器(active power filter,APF)输出不可调压和控制电路较复杂的特性,提出一种输出可调压的改进型直流侧串联型APF拓扑。从理论上分析了改进型直流侧串联型APF电路拓扑和基本工作原理,根据电路功率因数预调节原理,给出了主电路参数设计方法。利用零极点配置法对电压环和电流环进行了设计。同时主电路功率开关采用同频率控制,进一步简化控制电路。与并联型APF相比,该拓扑简化了主电路结构,进一步减少有源开关的数量,具有输入电流谐波低、功率因数高、输出电压调节范围宽、成本低等优点。仿真结果证明了所提出拓扑的正确性和可靠性。

牛精子冷冻损伤研究进展

人工授精技术是目前通过冷冻精液进行牛遗传改良而应用最为广泛的生物技术。虽然如此,由于精液产品的质量而导致人工授精的遗传影响被限制,在精液的冷冻-解冻过程中40%～50%的活精子失去完整性或功能受到损伤。作者在参阅国内外相关文献的基础上,通过阐述冷冻-解冻对精子细胞的损伤作用及机理、精浆对牛冷冻精液质量的影响、冷冻-解冻过程中精子的过氧化损伤,以及冷冻-解冻后精子相关基因与蛋白质的变化等,以期为牛高质量冷冻精液的研究提供一定参考,进一步提升冷冻精液质量。

林麝源化脓隐秘杆菌、溶血性曼氏杆菌和肺炎链球菌三重实时荧光定量PCR检测方法的建立

为快速准确检测化脓隐秘杆菌、溶血性曼氏杆菌和肺炎链球菌,分别根据化脓隐秘杆菌plo基因、溶血性曼氏杆菌ICEMh1基因和肺炎链球菌pspC基因的特异性序列设计引物和探针,以重组质粒a.p-m.h1-s.p为标准品,通过优化反应条件,建立一种检测化脓隐秘杆菌、溶血性曼氏杆菌和肺炎链球菌三重实时荧光定量PCR方法,对其特异性、灵敏度和可重复性进行测试。结果表明,建立的方法对标准品阳性质粒的最低检测量为20拷贝,标准曲线在1.25×10^6 copies/μL^1.0×101 copies/μL范围内具有良好的线性关系。对2016年-2018年在陕西省收集的病料中化脓隐秘杆菌、溶血性曼氏杆菌和肺炎链球菌检出率分别为66.67%、5.5%和44.44%。建立的三重实时荧光定量PCR方法能快速、准确和稳定地检测化脓隐秘杆菌、溶血性曼氏杆菌和肺炎链球菌。

空气暴露时间对林麝粪便孕酮水平的影响

为探索林麝粪便在空气中暴露不同时间与孕酮水平的关系,以妊娠期林麝粪便为研究对象,通过高效液相色谱(HPLC)和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种方法检测孕酮水平,选择合适的检测方法评价不同新鲜度粪便孕酮水平,比较妊娠期和非妊娠期林麝孕酮水平。结果发现,高效液相色谱检测孕酮水平的最低检测浓度为32μg/mL,用粪便样本检测时未见色谱峰,酶联免疫吸附试验检测孕酮水平为460ng/mL,已显著低于高效液相色谱分析的浓度。随粪便在空气中暴露时间延长,孕酮水平降低,其中空气暴露后4d和6d的粪便孕酮水平显著低于0d(P<0.05);妊娠期林麝粪便孕酮水平显著高于非妊娠个体((P<0.05)。结果表明,与ELISA相比,HPLC要求样本浓度高,粪便长时间空气暴露可导致孕酮水平降低,孕酮可作为预测林麝妊娠的候选激素,研究工作可为后续林麝的妊娠诊断和选育提供参考。

基于Net Framework的林麝管理系统的构建

针对当前林麝养殖管理、遗传育种智能化水平较低的现状,融合养殖管理技术与分子遗传学设计了林麝资源管理平台,支持林麝资源及林麝养殖的日常管理,并可以通过养殖过程数据、林麝遗传谱系数据和有效分子标记数据进行林麝智能选配育种;基于当前主流的“公司+农户”的养殖场景,采用Net Framework和SQL Server构建了B/S架构的平台软件系统,实现了养殖场管理、个体管理、品系管理、养殖过程管理、系谱分析绘制、亲缘系数计算、分子序列比对、个体/群体选配、可视化数据分析、系统配置等功能模块;通过测试发现,该平台功能完备、实现正确、人机交互界面友好,能够满足林麝日常养殖管理和配种选育需要,也可为改善林麝种质资源提供数据依据。

陕西省鸟类新纪录——中华攀雀

2015年4月17日,笔者在陕西省渭南市蒲城县荆姚镇许家（34°47＇49″N,109°26＇16″E）进行鸟类调查时,观察到1只体型纤小的棕色鸟类,并拍摄到清晰照片。该鸟主要特征为：嘴短、细小而尖,上嘴灰黑色,下嘴近灰色;头顶灰褐色,额、眼先、经眼下部和颊上部到耳羽暗棕栗色,并形成一条较宽的暗棕栗色带斑;其余上体部分为沙褐色,下体皮黄色,颏、喉稍淡;脚铅黑色。根据其外部形态特征,经查阅《中国鸟类野外手册》（马敬能等,2000）和《中国鸟类志》（赵正阶,2001）,

犬瘟热的诊断与防治

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的急性、热性和高度接触性传染病。病犬以呈双相热、鼻炎、严重的消化道障碍以及呼吸道炎症为特征,部分病例在致病末期出现神经症状。

肉鸡生产中主要疾病的诊治

1胸囊肿 胸囊肿就是肉鸡胸部皮下发生的局部炎症,是肉用仔鸡最常见的疾病,不传染也不影响生长,但影响屠体的商品价值和等级,造成一定的经济损失。胸囊肿的产生是由于龙骨外皮层受到长时间的磨擦和压迫等刺激,造成皮质硬化,形成囊状组织,里面逐渐积蓄些粘稠的渗出液，成为水疱状囊肿。

低浓度阿托品滴眼液联合角膜塑形镜夜间佩戴治疗屈光度-0.50^-2.00 D近视青少年的临床效果

目的探讨低浓度阿托品滴眼液联合角膜塑形镜夜间佩戴治疗屈光度-0.50^-2.00 D近视青少年的临床效果。方法选取我院收治的120例-0.50^-2.00 D近视青少年,依照不同治疗方案分为常规组(60例,夜间佩戴角膜塑形镜)和研究组(60例,低浓度阿托品滴眼液+夜间佩戴角膜塑形镜)。比较两组的治疗效果。结果研究组的治疗总有效率高于常规组(P<0.05)。治疗3、6、9个月后,研究组的眼轴长度短于常规组,瞳孔直径长于常规组,角膜Q值低于常规组,视力水平高于常规组(P<0.05)。治疗前及治疗3、6、9个月后,两组的角膜内皮细胞数量无显著差异(P>0.05)。结论低浓度阿托品滴眼液联合角膜塑形镜夜间佩戴治疗屈光度-0.50^-2.00 D近视青少年的临床效果显著,可控制眼轴增长,降低角膜Q值,有效改善青少年视力,且对角膜代谢无显著影响,安全性高。

鼠神经生长因子联合电针治疗视神经萎缩的临床研究

目的探讨鼠神经生长因子联合电针治疗视神经萎缩的临床效果。方法将80例视神经萎缩患者按照随机数字表法分为研究组与对照组各40例,对照组单纯给予鼠神经生长因子治疗,研究组在对照组的基础上实施电针治疗,观察并比较两组临床疗效、视野损害改善情况以及治疗前后的中心视野灰度、视力、乳头荧光充盈迟缓时间。结果两组疗效对比显示,研究组总有效率明显高于对照组,且研究组视野损害改善情况明显优于对照组,差异对比有意义(P<0.05);所有患者治疗前的眼科各项检查结果对比均无意义(P>0.05);治疗后中心视野灰度以及乳头荧光充盈迟缓时间均有所下降,研究组下降幅度更大;视力有所增长,研究组较对照组增长数值更大,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用鼠神经生长因子联合电针治疗视神经萎缩的临床效果显著,可有效改善患者视力损害,且无明显副作用。

内部控制视角下的财务风险管理研究--基于C航空公司案例分析

企业的可持续发展离不开良好的财务风险管理。内部控制制度是公司经营管理的基本制度,也是企业财务风险管理的有力抓手。但是,目前部分企业的内部控制机制与实施仍存在一定的缺陷,导致企业面临诸多财务管理风险。文章通过分析C航空公司的财务风险,结合航空运输行业的特点,探讨了内部控制视角下航空公司在财务风险管理中存在的不足,并提出了改进措施,以供参考。

建筑施工领域表见代理的认定及防范

在建筑行业的司法实践中,分包商对外的商事行为因构成表见代理而由施工企业承担责任,施工企业承担该责任后却很难向其追偿或完全追偿损失,从而给施工企业带来较大的风险。文章从表见代理的认定出发,分析了应加强内部管理的六个方面,由此防范表见代理给施工企业带来的风险。

泪道激光成形术联合泪道支架植入术治疗慢性鼻泪管阻塞30例

目的:探讨Nd:YAG激光联合泪道支架植入术治疗慢性鼻泪管阻塞的疗效。方法:慢性鼻泪管阻塞患者60例随机分为治疗组和对照组各30例。对照组进行泪道激光成形术治疗;治疗组采用泪道激光成形术的同时,植入泪道支架。术后均定期冲洗泪道。结果:随访12月。治疗组:治愈23眼,好转6眼,无效2眼。对照组:治愈6眼,好转13眼,无效12眼。治疗组的疗效与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:泪道激光成形术联合泪道支架植入治疗鼻泪管阻塞疗效更高,是治疗慢性鼻泪管阻塞的较好方法。