靶向沉默ATRX对辐射诱导宫颈癌HeLa细胞周期阻滞和凋亡的作用

目的:靶向沉默HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白(ATRX),探讨其对辐射诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡的作用。方法:利用RNA干扰(RNAi)技术建立稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,命名为shATRX1-HeLa,以shCon-HeLa为阴性对照。分别给予0、2和8 Gy X射线照射后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,采用PI单染和流式细胞术检测各组细胞中G0/G1、S和G2/M期细胞百分率,采用AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测各组细胞中多聚(腺苷酸二磷酸核糖基)聚合酶1(PARP1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cleaved caspase-9)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达情况。结果:0、2和8 Gy X射线照射后0、6、10、24和48 h,与shCon-HeLa组比较,不同照射剂量shATRX1-HeLa组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05或P<0.01)。0和2 Gy X射线照射后,与shCon-HeLa组比较,shATRX1-HeLa组G0/G1期细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率和细胞凋亡率则明显升高(P<0.05);8 Gy X射线照射后,与shCon-HeLa组比较,shATRX1-HeLa组G0/G1期细胞百分率明显升高(P<0.05),而G2/M期细胞百分率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,与shCon-HeLa组比较,经2和8 Gy照射后24和48 h,shATRX1-HeLa组细胞中PARP1、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白表达均明显增加。结论:靶向沉默HeLa细胞ATRX可降低辐射诱导的细胞G2/M期阻滞、抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,本研究结果为肿瘤放疗提供了新的分子靶点。

工业级卡托辛成分分析及其双核二茂铁制备工艺

2,2-双(乙基二茂铁)丙烷(卡托辛)因其优异的催化活性和制药工艺性,成为当前复合固体推进剂中主要的燃速催化剂之一。由于卡托辛合成工艺复杂,工业级产品成分也很复杂,使得其相关产品的性能难以得到保证。利用气相色谱-质谱联用技术和高效液相色谱技术,对工业级卡托辛的成分进行了分析;依据各成分结构特性及其极性、溶解度差异,通过柱层析法、溶解-析出法对其进行了分离提纯,得到了含量高且分子结构中含有两个二茂铁单元结构的双核二茂铁。结果发现:工业级卡托辛成分中双核二茂铁的总含量为84.82%,单核二茂铁的总含量为15.18%。柱层析法可得到含量大于99.0%的双核二茂铁;溶解-析出法可得到含量大于96.5%的双核二茂铁,且该法具有可宏量制备、操作工艺简便、成本低等特点。