齐墩果酸通过抑制自噬调节变应性鼻炎中的Treg/Th17细胞失衡

目的:探讨齐墩果酸对变应性鼻炎(AR)的作用及潜在作用机制。方法:密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMCs)。实时定量PCR检测鼻黏膜中Foxp3、IL-17A、Beclin1、RORγt mRNA表达;流式细胞术检测PBMCs中Treg和Th17细胞比例;Western blot检测鼻黏膜中RORγt、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、P62蛋白表达。将小鼠随机分为对照组、卵清蛋白(OVA)组、低剂量(L-)齐墩果酸组、高剂量(H-)齐墩果酸组、DSGC、3-MA和H-齐墩果酸+Rapa组。HE染色和高碘酸席夫(PAS)染色观察组织学变化。ELISA检测血清学变化、IL-17A、IL-10、嗜酸性阳离子蛋白(ECP)和抗OVA特异性抗体表达。结果:AR患者存在Th17/Treg失衡和自噬激活,而齐墩果酸在体外恢复Th17/Treg平衡并抑制自噬。体内实验表明,齐墩果酸可抑制OVA诱导的过敏性鼻部症状和自噬通路激活,与3-MA的调节作用相同,而Rapa可减弱高剂量齐墩果酸的作用。此外,齐墩果酸可减少鼻腔灌洗液中不同炎症细胞浸润,防止上皮细胞损伤,改善鼻黏膜厚度及黏液分泌。齐墩果酸可调节小鼠Th17/Treg相关细胞因子表达平衡。结论:齐墩果酸是治疗AR极具潜力的药物,通过抑制自噬调节Th17/Treg平衡发挥作用。

青藤碱对缺氧微环境诱导的甲状腺乳头状癌细胞“干性”的影响及机制研究

目的:探讨青藤碱(SME)对缺氧微环境诱导的甲状腺乳头状癌细胞“干性”的影响及机制。方法:采用不同浓度(0.25、0.5和1 mmol/L)的SME处理缺氧条件下的人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞或采用1 mmol/L SME处理缺氧条件下小泛素相关修饰蛋白(SUMO)特异性蛋白酶1(SENP-1)基因过表达的TPC-1细胞。流式细胞术检测肿瘤干细胞亚群(CD44^(+)CD24^(-))比例;qRT-PCR检测肿瘤干细胞标志物Nanog、八聚体结合转录因子4(OCT4)和SRY盒转录因子2(SOX2)的mRNA表达水平;肿瘤细胞成球实验观察细胞的干性特征;Western blot检测细胞中SENP-1、SUMO1和低氧诱导因子1α(HIF-1α)的蛋白表达水平;试剂盒法检测细胞中HIF-1α蛋白SUMO化水平;免疫荧光染色检测细胞中HIF-1α蛋白分布情况。结果:SME可呈浓度依赖性降低缺氧微环境下TPC-1细胞中干细胞亚群(CD44^(+)CD24^(-))比例,下调肿瘤干细胞标志物Nanog、OCT4和SOX2的mRNA表达水平,降低肿瘤细胞成球数量和成球体积,同时促进HIF-1α蛋白SUMO化,下调SENP-1和HIF-1α蛋白表达水平,上调SUMO1蛋白表达水平,并抑制HIF-1α蛋白向细胞核转位。然而,过表达SENP-1可逆转缺氧微环境下SME对TPC-1细胞“干性”的抑制作用,上调HIF-1α蛋白表达水平,并降低HIF-1α蛋白SUMO化水平。结论:SME通过促进缺氧条件下HIF-1α蛋白的SUMO化修饰,降低HIF-1α蛋白的稳定性和转录活性,进而抑制TPC-1细胞“干性”。

齐墩果酸通过抑制自噬调节变应性鼻炎中的Treg/Th17细胞失衡

目的 探讨齐墩果酸对变应性鼻炎(AR)中调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)/辅助性T细胞17(helper T cells17,Th17)的调节作用及潜在机制。方法 收集AR患者鼻黏膜组织及外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclear cell,PBMC)。饲养BALB/c小鼠。PBMC用于建立AR细胞模型,BALB/c小鼠用于建立AR动物模型。对于AR细胞使用150μg/ml的齐墩果酸进行治疗。对于AR小鼠使用低剂量(L)-齐墩果酸(50 mg/kg)、高剂量(H)-齐墩果酸(200 mg/kg)、自噬抑制剂3-MA(10 mg/kg)、H-齐墩果酸+自噬激活剂雷帕霉素(Rapa,1 mg/kg)分别进行治疗。qRT-PCR测人鼻黏膜组织IL-17A和Foxp3的表达以及小鼠各组鼻黏膜组织中RORγt和Foxp3的表达。流式细胞术从PBMC中分选Th17和Treg细胞,并检测PBMC中白细胞介素17A(IL-17A)细胞和叉头样转录因子3(Foxp3)细胞的比例。Western blot法检测Th17和Treg细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62的表达。酶联免疫吸附试验检测各组小鼠鼻腔灌洗液中IL-17A和IL-10的表达。结果 AR组患者鼻黏膜组织中IL-17A表达显著增加,但Foxp3的表达显著降低(P均<0.05)。齐墩果酸下调PBMC中IL-17A的表达,并上调Foxp3的表达。齐墩果酸抑制Th17细胞和Treg细胞中Beclin1、LC3-Ⅱ以及LC3-Ⅰ的表达(P均<0.05),促进p62的表达水平。齐墩果酸降低AR小鼠体内IL-17A和RORγt水平,并上调IL-10和Foxp3的水平(P均<0.05)。结论 齐墩果酸通过抑制自噬信号改善AR中Th17/Treg细胞的平衡。

桑辛素对乳头状甲状腺癌TPC⁃1细胞凋亡的影响

目的探讨桑辛素对乳头状甲状腺癌(PTC)细胞系TPC⁃1细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L)桑辛素处理TPC⁃1细胞,MTT检测细胞增殖活性。采用不同浓度桑辛素或联合N⁃乙酰⁃L⁃半胱氨酸(N⁃Acetyl⁃l⁃cysteine,NAC)处理TPC⁃1细胞24 h,分为0μmol/L桑辛素组、5μmol/L桑辛素组、10μmol/L桑辛素组、20μmol/L桑辛素组和20μmol/L桑辛素+5 mmol/L NAC组。Hoechst33258染色法观察细胞核形态变化;Annexin V⁃FITC/PI法检测细胞凋亡水平;DCFH⁃DA染色法检测细胞内ROS水平;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl⁃2和Cleaved⁃caspase⁃3及p38MAPK/p53轴相关蛋白p⁃p38MAPK(Thr180/Thr182)、p38MAPK、MDM2、p53和PUMA等表达水平。结果不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L)桑辛素处理后,TPC⁃1细胞增殖活性逐渐降低,并且随着药物干预时间的延长,细胞增殖活性逐渐降低(P<0.001)。与20μmol/L桑辛素组比较,20μmol/L桑辛素+5 mmol/L NAC组细胞核呈致密浓染的细胞数减少,细胞凋亡率、促凋亡蛋白Bax、cleaved⁃caspase⁃3及细胞内ROS、p⁃p38MAPK/p38MAPK、p53和PUMA蛋白表达水平明显降低(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl⁃2、MDM2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论桑辛素可能通过调控ROS介导的p38MAPK/p53轴诱导TPC⁃1细胞凋亡,为桑辛素用于PTC的治疗提供一定理论依据。

THBS1基因编辑BMSCs对变应性鼻炎模型小鼠鼻黏膜屏障功能及炎症反应的影响

目的 探究血小板反应蛋白1(THBS1)基因编辑骨髓间充质干细胞(BMSCs)对变应性鼻炎(AR)小鼠的鼻黏膜屏障功能与炎症反应的影响。方法 分离培养小鼠BMSCs,流式细胞仪测定细胞表面标记物表达,茜素红染色和油红O染色检测细胞成骨与成脂分化能力,鉴定分离的结果;使用含THBS1基因的慢病毒感染BMSCs,荧光显微镜观察细胞内绿色荧光蛋白EGFP表达,并以实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞内THBS1 mRNA和蛋白表达情况,鉴定感染效果。实验分为对照组、模型组、BMSCs组、THBS1-BMSCs组,每组15只,除对照组外的其余3组小鼠均构建AR模型,对照组和模型组小鼠均尾静脉注射0.1 m L PBS,BMSCs组和THBS1-BMSCs组小鼠分别尾静脉注射0.1 m L BMSCs、0.1 m L经THBS1基因编辑的BMSCs。处理结束后,对各组小鼠流涕、挠鼻及喷嚏情况进行统计,ELISA法检测血清IFN-γ、Ig E、TNF-α、IL-4及IL-6的含量,HE染色和PAS染色观察鼻黏膜病理形态学变化,免疫荧光染色检测鼻黏膜内CK-5与β-tubulin表达情况,Western blot检测鼻黏膜内紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin的水平。结果 分离的细胞表面CD105、CD90和CD73为阳性表达,CD34和CD45为阴性表达,并具备良好的成骨与成脂分化能力,说明成功分离到BMSCs。经含THBS1基因的慢病毒感染后的BMSCs出现明显绿色荧光蛋白EGFP表达,THBS1 mRNA和蛋白相对表达均上调(P <0.05)。与对照组比较,模型组小鼠精神萎靡,伴有连续性喷嚏和挠鼻次数增加(P <0.05),血清IFN-γ含量降低,Ig E、TNF-α、IL-4、IL-6含量均升高(P <0.05),鼻黏膜结构受损,有大量嗜酸性粒细胞浸润,且杯状细胞数目也明显增加(P <0.05),CK-5与β-tubulin的荧光强度均减弱(P <0.05),Claudin-1、Occludin的蛋白相对表达均下调(P <0.05);与模型组比较,BMSCs组和THBS1-BMSCs组小鼠精神状态有所好转,喷嚏和挠鼻次数减少(P <0.05),血清IFN-γ含量升高,Ig E、TNF-α、IL-4、IL-6含量均降低(P <0.05),鼻黏膜内嗜酸性粒细胞与杯状细胞数目均减少(P <0.05),CK-5与β-tubulin的荧光强度增强(P <0.05),Claudin-1、Occludin的蛋白相对表达量均上调(P <0.05);与BMSCs组比较,THBS1-BMSCs组小鼠喷嚏和挠鼻次数减少(P <0.05),血清IFN-γ含量升高,Ig E、TNF-α、IL-4、IL-6含量均降低(P <0.05),鼻黏膜嗜酸性粒细胞与杯状细胞数目均进一步减少(P <0.05),CK-5与β-tubulin荧光强度显著增强(P <0.05),Claudin-1、Occludin的蛋白相对表达均上调(P <0.05)。结论 经THBS1基因编辑的BMSCs可明显增强AR小鼠的鼻黏膜屏障功能,降低炎症反应,从而减轻鼻部症状。

瞬时受体电位锚蛋白1通道调节慢性鼻窦炎上皮细胞自噬及细胞间黏附分子表达的作用探究

目的 探究瞬时受体电位锚蛋白1(transient receptor potential ankyrin1,TRPA1)对慢性鼻窦炎(CRS)上皮细胞自噬与细胞间黏附分子(intercellular adhesion moleclar-1,ICAM-1)表达的影响。方法 通过免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR及Western blot检测TRPA1在对照组、慢性鼻窦炎不伴鼻息肉(chronic nasal-sinusitis without nasal polyps,CRSsNP)及慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)患者鼻黏膜组织中的表达水平,并采用免疫组织化学染色和Western blot观察各组患者鼻黏膜组织内自噬水平;分离培养鼻黏膜上皮细胞,利用细胞角蛋白AE1进行免疫荧光染色鉴定上皮细胞;将鼻黏膜上皮细胞随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、LPS+TRPA1抑制剂组,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞TRPA1在mRNA和蛋白上的表达水平,以自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3感染细胞并通过荧光显微镜观察各组细胞自噬情况,并使用透射电镜观测各组细胞自噬小体形成,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞ICAM-1在mRNA和蛋白上的表达水平。结果 相较于对照组,CRSsNP与CRSwNP患者鼻黏膜上TRPA1平均光密度值升高,其mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均上调(P<0.05),且LC3-Ⅱ平均光密度值升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,Beclin-1蛋白相对表达量上调而p62蛋白相对表达量下调(P<0.05),组织内自噬水平升高。成功分离到生长密集、形状为梭形或多边形以及AE1呈阳性表达的鼻黏膜上皮细胞;与LPS组比较,经过LPS与TRPA1抑制剂共处理的鼻黏膜上皮细胞TRPA1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调(P<0.05),自噬溶酶体红色荧光减弱,自噬小体也明显减少,同时,ICAM-1mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调(P<0.05)。结论CRS中TRPA1表达异常增加,自噬水平也升高,靶向抑制TRPA1能够抑制CRS上皮细胞自噬以及ICAM-1表达的升高。

基于居住意愿调研的农民住宅需求研究——以湖南省宁乡市为例

在我国新型城镇化政策的带动下,农民的住宅需求呈现多元化趋势和城乡过渡性特征。通过对湖南省宁乡市7个乡镇的访谈和问卷调查,从居住地选择和住宅建设要求两个方面研究了当前农民的居住意愿,据此分析了农村农民和城镇农民的各类住宅需求。研究发现:人口年龄构成、家庭年收入、收入来源、现有住房形式和建购房目的等是农民住地选择和住宅功能需求的主要影响因素。农村农民需要"农和新"的绿色人本化住宅,城镇农民需要"宅店结合"与"住工兼顾"的住宅。

产业公园视角下我国产业园区转型规划浅析

近年来随着用地的扩张和功能的复合,我国产业园区已由传统意义上的＂生产开发工厂＂向经济发展和社会进步并重的综合型园区开始转变。然而,受传统狭隘功能主义思维的影响,我国产业园区的整个管治系统,大都把生产作为园区规划、建设和管理的核心,忽略了其作为城市管理的复合功能需求。由此造成了区内产业结构失衡、城市服务功能缺失以及人居环境欠佳等问题。本文以浏阳经开区为例,通过引入＂产业公园＂这一发展理念,从产业、用地、交通、人文、生态等方面提出促进产业园区走向产城融合的策略,以期为我国产业园区的转型提供一种思路。

甲磺酸倍他司汀片联合手法复位治疗耳石症的临床效果

目的观察甲磺酸倍他司汀片联合手法复位治疗耳石症的临床效果。方法选取2023年10月—2024年4月于黄冈市中心医院就诊的耳石症患者80例,按照就诊顺序生成随机数,以单双数随机分为观察组(双数,n=40)和对照组(单数,n=40)。对照组予以手法复位治疗,观察组予甲磺酸倍他司汀口服联合手法复位治疗且治疗1周。比较2组临床疗效,治疗前、治疗1周后眩晕障碍量表(DHI)、伯格平衡量表(BBS)、前庭症状指数(VSI)评分,以及随访3个月的复发情况。结果观察组总有效率为95.00%,高于对照组的77.50%(χ^(2)=5.165,P=0.023)。治疗1周后,2组DHI评分、VSI指数低于治疗前,BBS评分高于治疗前,且观察组变化幅度大于对照组(P<0.05或P<0.01)。随访3个月,观察组复发率为7.50%,低于对照组的27.50%(χ^(2)=5.542,P=0.019)。结论耳石症患者采用甲磺酸倍他司汀片联合手法复位治疗,疗效显著,眩晕症状显著改善,且复发率低。