移行上皮反应基因TERE1的结构与功能分析

目的用生物信息软件分析移行上皮反应基因TERE1蛋白的跨膜结构,并预测分析其重要蛋白结构域功能。检测TERE1在细胞中表达定位。方法采用不同生物信息学软件预测分析TERE1的蛋白跨膜结构及重要结构域功能。采用分子克隆方法构建绿色荧光蛋白-移行上皮反应基因(pEGFP-TERE1)重组质粒,转染人膀胱癌细胞系T24,激光共聚焦显微镜观察TERE1在细胞中表达定位。结果 TERE1蛋白为多次跨膜的蛋白,保守的区域形成3个环loop 1、loop 2和loop 3;N端和loop 1含有高度保守的位点;以loop 2和loop 3之间的区域采用PROSITE软件分析显示UbiA类异戊烯转移酶家族具有一致性序列。采用菌液PCR、双酶切鉴定和DNA测序验证pEGFP-TERE1重组质粒构建成功。TERE1主要在T24细胞浆中表达。结论 TERE1为多次跨膜的蛋白,保守的区域形成3个环,UbiA类异戊烯转移酶家族具有一致性序列。TERE1主要在T24细胞浆中表达。

移行上皮反应基因在小鼠主要器官发育过程中的表达

目的：研究移行上皮反应基因（TERE1）在小鼠胚胎着床后至新生儿断乳期主要器官中的正常表达规律。方法：于E11d-E18d、P0d、P7d、P14d、P21d，取得小鼠胚胎脑、眼、心、肺、胃、肝、肢、肾（肾自E13d开始），利用实时荧光定量PCR方法检测TERE1基因在各器官的表达丰度。结果：除仅在P21d肢未检出外，TERE1基因在小鼠主要器官的发育过程中均有表达，且在脑、眼、心、肺、胃、肝、肾的表达水平较高；该基因的表达除在小鼠肾发育过程中呈升高趋势外，在脑、眼、心、肺、胃、肝、肢的表达均呈波动性。结论：TERE1基因在小鼠器官发育过程中呈广泛表达，且表达丰度不同，表达模式也不同。

TERE1(UBIAD1)基因对膀胱癌细胞系T24凋亡的影响

目的研究外源导入TERE1(UBIAD1)基因对膀胱癌细胞系T24的影响。方法利用脂质体LipofectamineTM2000,将外源TERE1(UBIAD1)基因导入T24细胞。转染TERE1(UBIAD1)基因一定时间后,利用血球计数板计数细胞数目,MTT方法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果转染基因48 h后,较之对照组,实验组细胞数目减少了80.3%,差异有统计学意义(P=6.6E-07),且随转染时间的延长细胞数目逐渐降低。MTT方法检测到转染TERE1(UBIAD1)基因48 h后实验组细胞活力值为0.4178,较之对照组,细胞活力抑制率达65.6%,差异有统计学意义(P=0.00023)。流式细胞仪检测到转染TERE1(UBIAD1)基因48 h后实验组T24细胞出现凋亡峰,PI和ANNEXIN V-FITC双染实验发现处于凋亡期的细胞占总数的93.73%。结论外源导入TERE1(UBIAD1)基因后膀胱癌T24细胞的数目和活力降低,细胞走向凋亡。

第一批“准生证”花落谁家 电动车要扶植中国版博世、德尔福

资公司总部将设在英国，首款电动车RapidE，预计将于2018年年底上市。

生物酶振荡器研究生物抗氧化动态信息

生物抗氧化是与衰老和死亡紧密相关的重要生化过程。非线性非平衡动态信息的获取至关重要。本文以PO酶模式生物振荡器为非线性非平衡动态信息研究的基本手段。

蛋白质异戊烯化修饰与抗肿瘤研究

蛋白质经过异戊烯化翻译后修饰正确的定位于膜上，在生物体内的信号转导过程（如异三聚体G蛋白）中起非常重要作用。其修饰过程包括异戊烯化、蛋白水解、甲基化以及棕榈化等。目前已知主要有3种蛋白质异戊烯化转移酶：法尼酰基转移酶（FTase）、二牛龙牛儿基转移酶I（GGTaseI）、二牛龙牛儿基转移酶Ⅱ（GGTaseII）。作用于异戊烯化修饰的关键酶或下游因素是目前抗肿瘤的主要策略之一。

TERE1基因在小鼠胚胎双前肢正常发育和异常发生中的表达

[目的]观察移行上皮反应基因(TERE1)在小鼠胚胎双前肢正常发育和异常发生中的表达,探讨TERE1在短肢发生中的作用。[方法]ICR小鼠受孕后,将其随机分为实验、对照两组,各64只。于孕第10天(GD10),经口灌胃一次给予实验组孕鼠80 mg/kg的全反式视黄酸(atRA)、对照组孕鼠给予等体积的大豆油,并分别于GD11～GD18取两组胎鼠的双前肢。于GD12取下小鼠胚胎双前肢,以atRA诱导,培养72 h后收获肢。利用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测TERE1在各样本中的表达情况。[结果]在整体动物试验中,atRA可诱致小鼠胚胎明显的短肢畸形;在体外试验中,atRA可诱致小鼠胚胎前肢多种骨骼发育异常。TERE1在正常、异常肢及培养肢芽中均有表达。在正常和异常肢中,TERE1的表达模式一致;除GD15外,实验肢中TERE1的表达均低于相同时点正常肢的表达水平。在体外培养肢,各组的表达量随培养时间的延长而增加。实验组在培养24 h,atRA各剂量组的表达量均低于对照组(P<0.05);培养48 h和72 h,在2.5×10-6 mol/L～1.0×10-5 mol/L剂量范围有随剂量增加表达量增加的趋势,但在高剂量组(2.0×10-5 mol/L)表达又下降。[结论]TERE1与小鼠胚胎前肢的发育过程有关,atRA在诱致小鼠前肢异常发生中可引起TERE1 mRNA的表达改变。

TERE1基因在小鼠胚胎腭发育和腭裂形成中的表达

目的观察TERE1基因在正常小鼠腭发育和全反式视黄酸诱导的小鼠腭裂形成过程中的表达变化,探讨TERE1基因在腭裂发生中的作用。方法 ICR小鼠受孕后,将其随机分为实验组和对照组,各64只小鼠。于孕10 d(gestational day 10,GD10),经口灌胃一次给予实验组孕鼠80 mg/kg的全反式视黄酸、对照组孕鼠给予等体积的大豆油,并分别于GD11～GD18取两组胎鼠的腭板。于GD12取下小鼠胚胎腭移植体,以10-9～10-5 mol/L全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,atRA)诱导,培养72 h后收获腭板。利用实时荧光定量PCR方法(quantitative real-time polymerasechain reaction,QRT-PCR)检测TERE1基因在正常腭组织和全反式视黄酸诱导的腭裂组织中的表达情况。结果 TERE1在正常、异常腭及培养腭板中均有表达。在GD11,异常腭中该基因的表达丰度高于正常腭,而在GD12～GD17,其表达丰度则低于正常腭(P<0.05)。10-9 mol/L atRA组和对照组的TERE1基因表达丰度差异无统计学意义(P>0.05),其他各atRA组该基因的表达丰度均低于对照组。结论在该试验条件下,atRA会抑制TERE1在腭中的表达,提示TERE1在腭的发生过程中可能起作用。

膜蛋白UBIAD1在生物医学中的功能研究进展

Ubiadl是一个重要的人体代谢与疾病基因。UBIADl蛋白能治疗人体恶性肿瘤、心血管疾病、帕金森氏疾病及施耐德眼角膜综合症。同时，UBIADl影响人体脂代谢，维生素代谢以及辅酶Q代谢，其研究具有重大的生物医学意义。由于UBIADl蛋白在人体不同类型的细胞中，处于不同的亚细胞定位，执行不同的生物学功能。研究UBIADl的亚细胞定位及其存各人体疾病中的生理功能之间的对应关系，目前已成为国际上研究UBIADl的焦点。系统回顾UBIADl蛋白在人体各种疾病中的分子机制，及在各生理病理过程中的亚细胞定位及功能，为进一步研究UBIADI的分子机制及用UBIADl来治疗人体疾病奠定基础。

基于转录组数据分析杜氏盐藻能量代谢途径

通过杜氏盐藻转录组测序,共获取39820个单一基因.基于转录组功能注释和聚类分析预测了杜氏盐藻能量分子的代谢途径,并分析了脂质（脂肪酸和三酰基甘油）及淀粉代谢路径中的关键酶（乙酰辅酶A羧化酶、二酰基甘油O-酰基转移酶、葡萄糖-1-磷酸腺苷转移酶和淀粉磷酸化酶）的作用.分析结果显示,在三酰基甘油合成途径中,杜氏盐藻除了存在传统的酰基辅酶A依赖型合成通路外,还可能存在一条酰基辅酶A非依赖型合成通路.通过抑制淀粉的分解代谢（如干扰α-淀粉酶或淀粉磷酸化酶基因）或促进淀粉合成代谢（如高表达葡萄糖-1-磷酸腺苷转移酶基因）,可能导致杜氏盐藻淀粉含量的增加.而抑制淀粉合成或促进淀粉分解代谢,也会导致杜氏盐藻脂质的增加.

果蝇heix基因启动子的分析及其转录活性鉴定

采用生物信息学的方法,综合运用启动子预测工具Promotor Scan1.7和BDGP(neural network pro-moter prediction)分析了目标序列的启动子特征,以果蝇基因组DNA为模板扩增出heix基因启动子候选序列连接至pMD19T载体,构建了荧光素酶报道基因重组质粒pHeixpromoter-Luc,转染果蝇S2细胞表达荧光素酶,并测定了荧光素酶的活性.预测出4个候选的heix基因启动子序列,发现存在ATF、MLTF、c-fos_US5等多种转录因子调控基序;成功构建了pMD19T-Heixpromoter和pHeixpromoter-Luc重组质粒.与肌动蛋白启动子(actinp romoter)相比,pHeixpromoter-Luc表达出的荧光素酶也有较强的活性.本研究找到了果蝇heix基因启动子候选序列,并发现多种转录调控元件,其荧光素酶报告基因实验说明果蝇heix基因启动子与肌动蛋白启动子有相当的转录活性.

盐胁迫下杜氏盐藻(Dunaliella salina)cDNA文库的构建与新表达序列标签(EST)的获取、分析

在成功养殖杜氏盐藻(Dunaliella salina)的基础上,采用Takara cDNA文库构建试剂盒,构建盐胁迫下(1.5 mol/L NaCl)杜氏盐藻的cDNA文库.经鉴定,原始文库的滴度达1.2×106cfu/mL,重组率高达95%,且多数插入片段均在500 bp以上.对表达序列标签(expressed sequence tag,EST)分析发现,杜氏盐藻基因组中包含大量未鉴定的新基因.随机挑取60个单克隆进行序列测定,将所测序列经Blast比对等生物信息学方法分析后,发现其中三分之一,即20个未见报道的代表新基因的表达序列标签,值得进一步发掘.这些新表达序列标签(基因)的发现,为进一步筛选和克隆杜氏盐藻耐盐性基因提供了筛选平台.