响应面法优化新疆阿魏中阿魏酸的提取工艺及其抑制酪氨酸酶活性研究

以阿魏酸提取率为指标,在单因素实验的基础上,采用响应面法优化新疆阿魏中阿魏酸的超声波辅助酶法提取工艺,并采用酪氨酸酶多巴速率氧化法评价阿魏酸抑制酪氨酸酶活性。结果表明,新疆阿魏中阿魏酸的最佳提取工艺条件为:酶加量1.4%、料液比1∶13.19(g∶mL)、提取时间10 min、提取温度50.3℃,在此条件下,阿魏酸提取率为2.202%。阿魏酸及新疆阿魏中阿魏酸效应组分均对酪氨酸酶活性具有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性的特点。

薰衣草LaGGPPS5基因在大肠杆菌中催化萜类物质合成

异戊烯基焦磷酸合酶(isoprenyl diphosphate synthase,IDS)在植物萜类多样化产物合成中发挥重要作用。克隆了薰衣草LaGGPPS5基因,其开放阅读框为1038 bp,编码345个氨基酸,蛋白的相对分子量为37.20 kD,在薰衣草的茎和叶中表达量显著高于其他组织,在花蕾和花中表达量极低。利用包含MVA途径上游基因的载体共转化构建重组大肠杆菌菌株,经IPTG诱导后,重组蛋白LaGGPPS5表达条带37 kD左右,与预测蛋白分子量一致。GC-MS检测发酵产物显示,在MVA途径基础上,重组LaGGPPS5的BL21(DE3)菌株合成了包括香叶醇乙酯、反,反-金合欢乙酯、香茅醇乙酯、橙花醇乙酯、2,3-二氢金合欢醇乙酯、反式-金合欢醇、香叶醇等25种单萜和倍半萜及其衍生物,萜类组分占挥发性物质总量的88.2%,其中香叶醇乙酯和反,反-金合欢乙酯的相对含量各占总含量的43.21%和20.36%,单萜类和倍半萜类挥发性物质分别占萜类总量的65.38%和34.62%,表明LaGGPPS5兼具香叶基焦磷酸合成酶(GPPS)和法尼基焦磷酸合成酶(FPPS)的功能。研究结果为LaGGPPS5基因在植物芳香组分分子改良以及大肠杆菌工程菌发酵生产萜烯类物质提供参考。