耐多黏菌素肺炎克雷伯菌的耐药机制分析

目的诱导多黏菌素耐药的肺炎克雷伯菌,探究其对多黏菌素的耐药机制。方法药物浓度倍增法诱导多黏菌素耐药株,微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);PCR扩增并测序确定突变部分;终点显色法检测内毒素含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测相关基因表达量的变化。比浊法和活菌计数法分别测定生长曲线;结晶紫半定量法分析生物被膜形成能力。结果诱导得到4株耐药株,菌株MIC和MBC均大幅提升且有一株mgrB上游基因突变,内毒素含量升高,mgrB表达量下降,PhoPQ和pmrHFIJKLM相关基因表达均上升。突变株生长状况与野生株基本一致,生物被膜形成能力增强,waaA基因表达上升。结论肺炎克雷伯菌mgrB上游基因突变是多黏菌素耐药原因之一,并可引起内毒素含量升高和生物被膜形成能力增强。

高中语文教学与审美情感培养策略

语文作为中华民族的重要文化组成部分,其重要性决定了高中语文教学应该在确保学生掌握基本的语文素养的前提下,通过发 掘和传承优秀的文学作品,从而影响学生的精神世界,促进学生逐步形成良好的道德品质和健全的人格。语文课程丰富的人文内涵对学生 的精神影响是深刻而长远的, “美育是培养学生审美、爱好美和创造美的能力的教育,它借助音乐、美术、文学以及自然界美好的事物陶冶 学生的情操与性格,高中语文审美教学应该不单单是通过教化而是应该通过培养学生的审美能力来实现。

哈茨木霉的分离纯化、鉴定及发酵液活性的初步研究

从松树根中分离木霉菌并测定其发酵液抗菌和抗肿瘤活性。利用PDA培养基对松树根部真菌进行分离培养和纯化,采用菌落显微形态观察和ITS序列分析鉴定。采用平板打孔法测定哈茨木霉发酵液对大肠杆菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA、耐甲氧西林表皮葡萄球菌MRSE、耐药铜绿假单胞菌、耐药鲍曼不动杆菌、耐药白色念珠菌和耐药光滑念珠菌的抑菌圈直径并分析其抗菌活性。利用MTT比色法,体外测定12.5%,25%,50%和100%哈茨木霉发酵液对MCF-7和SKOV-3细胞增殖的抑制作用。结果表明,从松树根部分离纯化出一株木霉菌,并分析鉴定为哈茨木霉菌。哈茨木霉发酵液对临床标准菌株和耐药菌均有一定程度的抗菌活性,其中对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和MRSE抑菌作用较大,抑菌圈直径均达20 mm以上。哈茨木霉发酵液对MCF-7和SKOV-3细胞的抑制率最高为91.25%,91.87%,并且随着哈茨木霉菌发酵液浓度的增大,其对MCF-7和SKOV-3细胞的抑制率均增大,说明发酵液对MCF-7和SKOV-3细胞生长的抑制作用具有量效关系。哈茨木霉发酵液具有广谱抗菌活性和抗肿瘤活性,为从哈茨木霉次级代谢产物中分离与开发新型抗菌药物和抗癌药物提供一定参考价值。

雷公藤内生真菌的分离鉴定及活性研究

【背景】雷公藤是一种传统中药,具有多种药理活性和较高的应用价值。但由于产量少、提取过程复杂而限制了其在临床上的应用。植物内生真菌的次级代谢产物能够产生相似的药理活性,有望解决植物资源匮乏的难题,成为新药筛选的潜在资源。【目的】从卫矛科植物雷公藤中分离内生真菌,对其产物的体外抗菌活性及抗肿瘤活性进行测定,并利用活性菌株对雷公藤粗提物进行转化,以达到增效减毒的作用。【方法】采用组织块法从雷公藤茎中分离内生真菌;打孔法测定发酵产物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的抑菌活性;MTT(噻唑蓝)比色法测定发酵产物及转化产物的抗肿瘤活性;ITS(Internal transcribed spacer)序列测序分析确定活性菌株的种属。【结果】从雷公藤茎中分离得到43株内生真菌,其中5株对金黄色葡萄球菌有抑菌作用,LGT7几乎与1μg/mL青霉素钠的作用效果相当;6株对MCF-7、SKOV3细胞有抗肿瘤活性,LGT7、LGT41对肿瘤细胞生长抑制率达90%以上;4株对雷公藤粗提物具有转化活性。活性菌株分别被鉴定为拟茎点霉和腐皮壳属。【结论】雷公藤内生真菌具有抗菌抗肿瘤作用,并可以通过转化产生增效减毒作用。

利用Pseudonocardia sp.微生物转化制备骨化醇类化合物

【背景】近年来骨化醇类化合物(活性维生素D及其类似物)在肿瘤治疗、免疫调节中的作用逐渐被发现,药用价值显著,但目前化学合成法制备困难,因此高效制备骨化醇类化合物成为研究热点。【目的】利用假诺卡氏菌(Pseudonocardiasp.)转化骨化醇类底物分子并提高转化率。【方法】从化学合成方法常用的原料及中间体中筛选能被有效转化的底物分子,利用单因素及正交试验对转化条件进行优化。【结果】筛选到阿法骨化醇(Alfacalcidol,1α-(OH)VD3)、艾地骨化醇中间体(Eldecalcitolintermediate, AD-M07)、帕立骨化醇中间体(Paricalcitol intermediate,PC-M07) 3种底物分子,分别被转化为骨化三醇(Calcitriol,1α,25(OH)2VD3)、艾地骨化醇中间体(Eldecalcitol intermediate,AD-M08)、帕立骨化醇(Paricalcitol,PC)。确定最优转化条件:蛋白胨20.0 g/L,葡萄糖15.0 g/L,部分甲基化的β-环糊精(PMCD) 0.5%(质量体积比),转化温度25-30°C,接种量5%-10%(体积比),转化时间72、72、96 h,底物浓度1.2、0.6、0.6mg/mL,初始pH6.0-8.0。在此条件下3种底物的最高转化率分别达到85%、96%、75%。【结论】通过转化条件的优化3种产物的转化率大幅提高,为更加快速高效地利用微生物转化法制备骨化醇类化合物提供参考。