细胞保护蛋白PTD-FNK生物信息学分析

PTD-FNK蛋白是人工形成的重组蛋白质,已被证明在细胞凋亡、精子冷冻保存过程中对细胞有一定的保护作用,虽然在实践中应用普遍,但国内未见其机理分析和通过蛋白结合参与调控的报道。结合Protparam、ProtScale等相关在线软件预测和分析PTD-FNK蛋白的理化性质、亲水性、二、三级结构等;分离培养猪睾丸支持细胞,采用HISpulldown技术拉下PTD-FNK未知的互作蛋白,得到的数据用UniProt数据库对比。生物信息学结果表明,PTDFNK蛋白编码295个氨基酸,蛋白质分子量33.195ku,分子式为C_(1456)H_(2225)N_(437)O_(439)S_(10);该蛋白含有PKC、PKA特异性磷酸化的结合位点。得到的互作蛋白有葡萄糖调节蛋白78、波形蛋白-1、组蛋白等。预测PTD-FNK蛋白可能通过PKA、PKC特异性磷酸化结合位点或者与蛋白互作的方式参与细胞凋亡、精子发生等过程。

新孢子虫急性感染对小鼠器官中TLR3表达的影响

为了研究新孢子虫急性感染对小鼠体内不同器官中Toll样受体3(TLR3)表达的影响,试验将培养、纯化的新孢子虫Nc-1株速殖子通过腹腔注射途径感染5周龄C57BL/6小鼠(8×106个速殖子/只),感染后第2天和第8天分别采集小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和脑,通过荧光定量PCR和免疫组织化学方法,分别从mRNA和蛋白质水平检测各器官中TLR3的表达量。结果表明:感染组小鼠脾脏和肺脏中TLR3mRNA的相对表达量较对照组显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),其中脾脏中第2天和第8天TLR3mRNA的相对表达量为对照组的6倍或9倍,肺脏中TLR3mRNA的相对表达量约为对照组的4倍;肝脏和心脏中TLR3mRNA的相对表达量约为对照组的2倍,但差异均不显著(P>0.05),脑中TLR3mRNA的相对表达量未见明显变化。免疫组织化学结果与荧光定量PCR结果基本一致。说明新孢子虫急性感染可上调小鼠多个器官中TLR3的表达。

初中数学教学的几点体会

中学数学涉及到的知识点很多,尤其是有部分内容比较抽象,使有些学生有排斥学数学的倾向。笔者根据自己多年的数学教学实践,总结出了部分经验,希望对学生有借鉴意义。

PTD-FNK蛋白影响猪睾丸支持细胞抗热应激能力的转录组学分析

旨在通过转录组测序和生物信息学分析评价PTD-FNK蛋白对猪睾丸支持细胞抵抗热应激能力的作用机制。将原代培养的睾丸支持细胞分为对照组、热应激(HS)组和热应激+PTD-FNK蛋白(HS+PR)组,HS+PR组添加0.1 nmol/L的PTD-FNK蛋白溶液作用1 h,对照组和HS组分别用等体积的PBS作用1 h,而后HS组和HS+PR组43℃热处理1 h,对照组37℃处理1 h。分别提取3组细胞总RNA,通过转录组测序进行分析,共获得76.75 Gb的有效数据(clean reads),各样品有效数据均达到7.11 Gb以上,测序质量较好。对照组与HS组相比共有270个差异表达基因(DEGs),其中上调基因193个,下调基因77个;HS组与HS+PR组相比共有3649个DEGs,其中上调基因1430个,下调基因2219个。基因本体(GO)注释结果显示,对照组与HS组相比以及HS组与HS+PR组相比,DEGs主要富集在细胞过程、细胞成分、结合、生物调节、代谢过程上,京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路主要富集在磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路以及癌症通路等。综合基因表达水平的分析,挖掘到包括分化抑制剂3(ID3)、组蛋白2A变异体(H2AX)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1C(CDKN1C)、肿瘤抑制蛋白p53(TP53)、诱导DNA损伤的转录因子3(DDIT3)、重组酶(RAD51)等调控细胞增殖与凋亡的DEGs。本研究为分析PTD-FNK蛋白的作用提供了新的参考和理论依据。

他克林对脂多糖诱导小鼠睾丸支持细胞炎性损伤的保护作用

【目的】分析他克林对脂多糖(LPS)诱导小鼠睾丸支持细胞(TM4)炎性损伤的保护作用,从炎症角度探索他克林的功能,为动物生产过程中雄性动物生殖疾病相关抗炎药物的利用及精子质量提升提供更多药物选择。【方法】采用CCK8法检测0.01、0.10、1.00、10.00和100.00μg/mL LPS分别诱导3.0、6.0、12.0和24.0 h对TM4的适宜损伤条件;同时分析0.01、0.10、1.00、10.00、100.00、1000.00、10000.00和100000.00μg/mL他克林在加入LPS前预处理0.5、1.0和2.0 h或加入LPS后处理0.5、1.5、3.0、6.0、12.0和24.0 h对TM4炎性损伤的适宜保护条件。以荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测TNF-α和IL-6基因mRNA表达水平,以ELISA法进一步评价细胞上清TNF-α和IL-6蛋白表达量,以免疫蛋白印迹(WB)法分析NF-κB蛋白表达量。【结果】不同浓度不同处理时间下,LPS对TM4增殖的影响情况存在差异,其中1.00μg/mL LPS处理12 h TM4的增殖率极显著低于空白组(P<0.01,下同)。他克林对TM4炎性损伤的保护作用与处理时间和剂量有关,其中,10000.00μg/mL他克林预处理2.0 h的TM4增殖率显著低于空白组(P<0.05,下同),10000.00、100000.00μg/mL他克林预处理0.5和1.0 h或后处理0.5、1.5、3.0、6.0、12.0和24.0 h的TM4增殖率均极显著低于空白组,而0.01μg/mL他克林后处理6.0 h的保护作用最佳,其TM4增殖率显著高于空白组。与空白组相比,LPS可显著上调TM4的IL-6和TNF-α基因mRNA及蛋白表达量,而与LPS组相比,0.01μg/mL他克林显著下调其表达量。与空白组相比,LPS可显著上调TM4的NF-κB蛋白表达量;1.00、100.00和10000.00μg/mL他克林可极显著上调NF-κB蛋白表达量,而与LPS相比,0.01μg/mL他克林降低NF-κB蛋白表达量,但差异不显著(P>0.05)。【结论】0.01μg/mL他克林后处理6.0 h对TM4的保护作用最佳,其机制可能与IL-6和TNF-α基因mRNA及蛋白表达量下调有关。