高表达SEL1L减轻小鼠主动脉弓缩窄所致心脏结构和功能损伤的机制研究

目的内质网应激在压力过载所致心肌损伤中扮演重要作用,Lin-12样抑制子/增强子(suppressor/enhancer of Lin12-like,SEL1L)是维持内质网稳态的关键分子,本研究旨在观察高表达SEL1L对小鼠主动脉弓缩窄(transverse aortic constriction,TAC)所致心脏结构和功能损伤的影响及其可能的作用机制。方法采用主动脉弓缩窄术建立小鼠心肌肥厚模型。40只雄性C57BL/6小鼠随机均分为4组:Sham组、主动脉弓缩窄组(TAC组)、主动脉弓缩窄+AAV9空白干预组(TAC+AAV9-Ctrl组)和主动脉弓缩窄+AAV9-SEL1L组(TAC+AAV9-SEL1L组)。TAC+AAV9-Ctrl组和TAC+AAV9-SEL1L组小鼠心肌内点注射1011个单位的AAV9-Ctrl和AAV9-SEL1L病毒颗粒4周后,进行TAC手术。检测各组小鼠心脏功能,明确心肌肥厚、心肌纤维化及心肌细胞凋亡情况,同时观察心肌组织内质网应激和氧化应激水平。结果与Sham组相比,TAC组小鼠心脏SEL1L mRNA及蛋白表达显著降低,心脏功能明显受损,心肌细胞及心脏明显肥大,心肌间质纤维化明显加重,心肌细胞凋亡显著增加,并且心肌组织内质网应激及氧化应激水平明显上调(均P<0.05)。与TAC组相比,TAC+AAV9-SEL1L组小鼠心脏SEL1L mRNA及蛋白表达显著增加,心脏功能明显改善,心肌细胞及心脏肥厚明显缓解,心肌间质纤维化程度明显减轻,心肌细胞凋亡显著被抑制,并且心肌组织内质网应激及氧化应激水平明显下调(均P<0.05)。与TAC组相比,TAC+AAV9-Ctrl组小鼠上述指标的差异无统计学意义。结论高表达SEL1L可通过抑制心肌组织内质网应激和氧化应激,发挥减轻主动脉弓缩窄所致小鼠心脏结构和功能损伤的保护作用。

miR-21-5p通过调控TGF-β1减轻2型糖尿病心肌病小鼠的心肌损伤

目的探讨miR-21-5p对2型糖尿病小鼠心肌损伤的影响及潜在的分子机制。方法10只雄性db/m小鼠作为正常对照组(Con组),30只雄性db/db小鼠随机分成模型组(DCM组)、模型+miR-21-5p激动剂处理组(DCM+miR-agomir组)和模型+miR-21-5p拮抗剂处理组(DCM+miR-antagomir组),每组10只。DCM+miR-agomir组和DCM+miR-antagomir组小鼠每3 d分别经尾静脉注射100μl 10 nmol/L的miR-21-5p agomir和miR-21-5p antagomir,共10次。Con组和DCM组小鼠则在相同时间点经尾静脉注射同等剂量的生理盐水。超声心动图检测心脏功能(LVEF、LVFS),试剂盒测定心肌损伤标志物乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡程度,Western blotting法检测TGF-β1、cleaved Caspase-3的蛋白表达,qRT-PCR法检测心肌组织miR-21-5p、TGF-β1 mRNA的表达。双荧光素酶报告系统验证miR-21-5p与TGF-β1的靶向关系。检测各组小鼠的氧化应激指标和炎症指标。结果与Con组相比,DCM组小鼠心肌miR-21-5p的表达显著降低,TGF-β1表达显著升高(P<0.05);且DCM组小鼠LVEF和LVFS值明显降低,血清LDH及CK-MB含量显著上升,心肌细胞凋亡明显增加(P<0.05);心肌丙二醛(MDA)水平、活性氧(ROS)生成及NOX2和NOX4 mRNA表达显著提高,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平明显减低(P<0.05);此外DCM组小鼠心肌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的水平显著增加,NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和cleaved Caspase-1的蛋白表达明显上调(P<0.05)。与DCM组相比,DCM+miR-antagomir组小鼠的心肌损伤(LDH及CK-MB)、心脏功能障碍(LVEF和LVFS)、心肌细胞凋亡、心肌氧化应激(MDA、ROS及NOX2和NOX4 mRNA表达)和炎症(TNF-α、IL-1β、IL-6、NLRP3、ASC和cleaved Caspase-1表达)均进一步加重(P<0.05)。而与DCM组相比,DCM+miR-agomir组小鼠的心肌损伤(LDH及CK-MB)、心脏功能障碍(LVEF和LVFS)、心肌细胞凋亡、心肌氧化应激(MDA、ROS及NOX2和NOX4 mRNA表达)和炎症(TNF-α、IL-1β、IL-6、NLRP3、ASC和cleaved Caspase-1表达)则明显减轻(P<0.05)。双荧光素酶报告系统检测表明miR-21-5p可靶向负调控TGF-β1的表达。结论miR-21-5p可通过靶向调控TGF-β1的表达抑制心肌氧化应激和炎症以减轻心肌细胞凋亡,进而改善2型糖尿病心肌病小鼠的心肌损伤。

四氢姜黄素通过调控SIRT3信号抑制细胞焦亡减轻心肌肥厚小鼠心肌损伤

目的观察四氢姜黄素(THC)对病理性心肌肥厚小鼠心肌损伤的影响及作用机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机均分为假手术组(sham组)、心肌肥厚组(TAC组)、心肌肥厚+四氢姜黄素组(TAC+THC组)、心肌肥厚+四氢姜黄素+SIRT3特异性阻断剂3-TYP组(TAC+THC+3-TYP组)。通过横主动脉缩窄术建立小鼠心肌肥厚模型。手术造模4周后检测心脏收缩功能(LVEF和LVFS),摘取心脏称重计算心/体质量比,WGA染色测定心肌细胞平均横截面积,Masson染色观察心肌组织纤维化程度,碘化丙啶(PI)染色检测细胞膜破裂及细胞坏死评估心肌细胞焦亡情况,特定试剂盒检测SIRT3去乙酰化活性,实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测β-肌球蛋白重链(β-MHC)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA表达,免疫组化染色观察心肌组织炎症小体形成,Western blotting法检测去乙酰化酶3(SIRT3)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Gasdermin D蛋白N端片段(GSDMD-N)和天冬氨酸蛋白水解酶剪切体1(cleaved Caspase-1)蛋白表达。结果TAC术后4周,与sham组相比,TAC组小鼠心肌组织中SIRT3表达及活性显著下降,LVEF和LVFS明显减低,心肌细胞横截面积明显增大,心肌组织纤维化程度明显加重,且心肌组织炎症小体形成显著增多,细胞焦亡相关蛋白(NLRP3、ASC、GSDMD-N和cleaved Caspase-1)表达明显上调(均P<0.01)。与TAC组相比,TAC+THC组小鼠心肌组织SIRT3表达及活性显著增强,LVEF和LVFS明显升高,心肌细胞横截面积明显减小,心肌组织纤维化程度明显减轻,且心肌组织炎症小体形成显著减低,细胞焦亡相关蛋白表达明显下调(均P<0.01)。然而THC的上述保护效果均被SIRT3特异性阻断剂3-TYP显著逆转(均P<0.01)。结论THC通过激活SIRT3信号抑制炎症小体形成和心肌细胞焦亡,进而减轻压力负荷所致的心肌组织纤维化和心肌肥厚,保护心脏功能。

PBL与CBL整合教学模式在心内科临床教学中的应用

临床教学旨在将医学生培养成一名适应现代社会要求的临床医生。PBL与CBL有机结合教学法把医学教学和临床实际相结合,为心血管内科的临床教学提供新的思路,进一步提高学生对心血管专业知识的兴趣,促进学生最大程度获取直接临床经验以及带教老师的间接经验,为培养高素质心血管专业人才进行了有益的尝试与探索。

衰老心肌自噬减退的新机制-转录因子EB的关键作用

目的探讨转录因子EB(TFEB)在衰老心肌自噬减退中的作用。方法采用老年(22月龄)雄性C57BL/6小鼠为实验对象,以成年(4月龄)雄性C57BL/6小鼠为对照,分析心肌自噬水平、心肌TFEB表达水平。结果与成年心肌相比,衰老心肌自噬水平显著降低(P<0.05)。衰老心肌中自噬体标志物Atg5、LC3和Beclin-1,溶酶体标志物LAMP1在蛋白和mRNA水平上均出现降低。与成年心肌相比,衰老心肌TFEB蛋白水平显著降低(P<0.05),衰老心肌细胞核内的TFEB水平下降更为显著(P<0.05),提示衰老心肌TFEB转录能力减退。给予小剂量雷帕霉素处理,可提高衰老心肌细胞核内TFEB水平,并且改善LC3及LAMP1的mRNA和蛋白水平,提高衰老心肌自噬水平。结论本研究发现衰老导致的心肌TFEB水平降低严重影响心肌自噬能力,提示TFEB是心肌自噬增龄性减退机制中的关键调节因子。

激活Notch1通路减轻高温高湿条件下H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的明确Notch1通路在高温高湿条件下H9C2心肌细胞缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤中的作用及其潜在机制。方法常规培养H9C2心肌细胞并将其分6组即对照组;H/R组;高温高湿组;高温高湿+H/R组;高温高湿+Jagged1(Notch1激动剂)+H/R组;高温高湿+溶剂+H/R组。TUNEL法检测细胞凋亡,荧光探针JC-1检测线粒体膜电位,ATP检测试剂盒检测ATP含量,Western blot检测Notch1细胞内段(Notch1 intracellular domain,Notch1 ICD)、Hairy和分裂增强子(Hairy and enhancer of split,Hes1)、微管相关蛋白1轻链3(microtubuleassociated protein1 light chain 3,LC3)和p62的蛋白表达水平。结果与对照组相比,急性损伤H/R后,细胞凋亡增加(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),ATP含量减少(P<0.05),Notch1 ICD、Hes1、LC3-II/I(p62相应降低)表达升高(P<0.05),而慢性损伤高温高湿后,细胞凋亡增加(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),ATP含量减少(P<0.05),Notch1 ICD、Hes1、LC3-II/I表达降低(p62相应升高)(P<0.05);和H/R组或高温高湿组对比,高温高湿+H/R组中细胞凋亡进一步增加(P<0.05),线粒体膜电位和ATP含量进一步降低(P<0.05),Notch1ICD、Hes1、LC3-II/I表达进一步降低(p62进一步升高)(P<0.05);和高温高湿+H/R组对比,加入Notch1激动剂Jagged1后,细胞凋亡减少(P<0.05),线粒体膜电位和ATP含量增高(P<0.05),Notch1 ICD、Hes1、LC3-II/I表达升高(p62相应降低)(P<0.05)。结论激活Notch1通路通过促进自噬从而缓解高温高湿条件下H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤。

全吸收式血管支架的临床研究进展

经皮冠状动脉介入(PCI)治疗已经成为冠心病患者冠脉血运重建的主要手段。第二代金属药物洗脱支架(DES)虽然较以往裸金属支架显著减少了支架内再狭窄和靶病变再次血运重建的发生率,但仍不能从根本上解决支架长期存留带来的问题。新型可吸收支架早期提供血管支撑,随后完全消失,从根本上克服了支架永久存留的不足,成为目前心血管介入领域研究的焦点。本文就目前主要的全吸收式血管支架的种类及相关临床研究进行概述。

烟酰胺核糖通过Sirt3-PGC-1α通路改善成年小鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的明确烟酰胺核糖(Nicotinamide riboside,NR)对成年小鼠心肌细胞在缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)条件下线粒体合成的影响及其潜在机制。方法分离成年小鼠心肌细胞后,将细胞分为(1)对照组;(2)H/R组;(3)H/R加NR组;(4)H/R加NR加过氧化物酶体增生物活化受体助激活剂(Peroxisome proliferator-activated receptor co-activator alpha,PGC)-1α小干扰RNA组(H/R+NR+PGC-1αsiRNA组)。TUNEL法、流式细胞术检测凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位,Western blot法检测线粒体合成相关蛋白PGC-1α、核呼吸因子(Nuclear respiratory factor,NRF)1和线粒体转录因子A(Mitochondrial transcription factor A,Tfam)的蛋白表达水平。结果与对照组相比,H/R干预后,细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,PGC-1α、NRF1和Tfam表达降低,加入NR后,细胞凋亡减少,线粒体膜电位增高,PGC-1α、NRF1和Tfam的蛋白表达增高,然而,干扰PGC-1α后,NR的作用减弱。结论烟酰胺核糖通过提高PGC-1α表达水平改善线粒体合成,最终减轻成年小鼠心肌细胞H/R损伤。

和厚朴酚对重度烧伤大鼠早期心肌损伤的保护作用及其机制

目的探究和厚朴酚(honokiol,HKL)处理对重度烧伤大鼠早期心肌损伤的作用及其机制。方法40只SD大鼠随机分为假烧伤组(sham)、假烧伤+和厚朴酚处理组(sham+HKL)、烧伤组(burn)、烧伤+和厚朴酚处理组(burn+HKL),每组10只。采用背部烫伤法造成大鼠30%体表面积Ⅲ度烧伤来构建动物模型。待烧伤处理24 h后,用小动物超声仪检测大鼠心脏舒缩功能(LVEF、LVFS和E/A值);HE染色法观察心肌组织形态结构改变;用血生化分析仪检测大鼠血清中LDH和CK-MB水平;ELISA法检测大鼠血清中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及黏附分子ICAM-1、VCAM-1的含量;特定试剂盒检测大鼠血清心肌组织中SOD活性和MDA的含量;DHE染色法观察心肌组织内活性氧(ROS)产量;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡程度;Western blot法检测Nrf2和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平。结果与sham组相比,burn组大鼠心脏舒缩功能显著降低,表现为LVEF、LVFS和E/A值明显下降(P<0.05),且大鼠血清LDH及CK-MB水平明显上升(P<0.05);血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及黏附分子ICAM-1、VCAM-1的含量显著升高(P<0.05);心肌组织ROS产量及MDA含量明显增加,SOD活性显著减低(P<0.05);心肌细胞凋亡率明显增加,凋亡蛋白cleaved Caspase-3表达显著上调(P<0.05)。与burn组相比,burn+HKL组大鼠心脏舒缩功能显著改善(P<0.05),心肌损伤标志物LDH及CK-MB水平明显减低(P<0.05);血清炎症因子及黏附分子的含量显著降低(P<0.05);心肌组织氧化应激水平显著下降(P<0.05);心肌细胞凋亡被显著抑制(P<0.05)。结论HKL处理可明显减轻重度烧伤大鼠早期心肌损伤,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。

促红细胞生成素衍生肽腹腔注射对小鼠阿基霉素诱发的心脏毒性作用防治效果及其机制

目的探讨促红细胞生成素衍生肽(HBSP)对阿霉素(DOX)诱发小鼠心脏毒性的预防作用及机制。方法40只C57BL/6小鼠随机分为HBSP+LY294002组、HBSP组、DOX组、Control组,HBSP+LY294002组腹腔注射DOX(15 mg/kg),同时腹腔注射30μg/(kg·d)的HBSP和20 mg/(kg·d)的LY294002,连续7 d;HBSP组一次性腹腔注射DOX(15 mg/kg),同时腹腔注射30μg/(kg·d)的HBSP,连续7 d;DOX组一次性腹腔注射DOX(15 mg/kg);Control组腹腔注射生理盐水。腹腔注射7 d后,采用生理记录仪测量左室压力上升最大速率(+dp/dtmax)和左室压力下降最大速率(–dp/dtmax)、酶联免疫吸附法检测血清中肌钙蛋白T(cTnT);采用HE染色法观察心心肌组织结构;采用Western blotting法检测心肌组织中细胞色素C(Cytochrome C)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、微管蛋白1轻链3B(LC3B)、自噬相关蛋白1(Beclin1)、溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)和核孔蛋白62(p62)。结果与Control组相比,DOX组+dp/dt、–dp/dt值降低,血清中cTnT含量增加(P均<0.05);心肌纤维排列紊乱并出现断裂和胞质空泡化;心肌组织Cytochrome C和Cleaved Caspase-3蛋白的相对表达量增加(P均<0.05),LC3BII/LC3BI、Beclin1、LAMP2、p62蛋白的相对表达量增加(P均<0.05),而p-PI3K、p-Akt蛋白的相对表达量降低(P均<0.05)。与DOX组相比,HBSP组dp/dt、–dp/dt值增加(P均<0.05),血清cTnT水平降低(P<0.05);心肌纤维排列改善,空泡化减少;心肌组织中Cytochrome C和Cleaved Caspase-3蛋白的相对表达量减少(P均<0.05),LC3BII/LC3BI、Beclin1、LAMP2、p62蛋白的相对表达量减少(P均<0.05),p-PI3K、p-Akt蛋白的相对表达量增加(P均<0.05)。与HBSP组比较,HBSP+LY294002组+dp/dt、–dp/dt值降低(P均<0.05),血清中cTnT含量增加(P<0.05);心肌纤维紊乱、断裂和胞质空泡化;心肌组织Cytochrome C、Cleaved Caspase-3蛋白的相对表达量增加(P均<0.05),LC3BII/LC3BI、Beclin1、LAMP2、p62蛋白的相对表达量增加(P均<0.05),而p-PI3K、p-Akt蛋白的相对表达量降低(P均<0.05)。结论HBSP可减轻阿霉素诱发的小鼠心脏毒性,其作用机制可能是通过抑制PI3K/Akt通路、从而减轻心肌细胞自噬和凋亡。

盐酸小檗胺对心肌梗死小鼠心肌损伤的影响及其分子机制

目的观察盐酸小檗胺(BA)对心肌梗死(MI)小鼠心肌损伤的影响,并探讨其可能的机制。方法将60只成年雄性C57/BL小鼠随机分Sham组、MI组、BA+MI组、BA+DAPT+MI组,每组15只。MI组、BA+MI组、BA+DAPT+MI组采用结扎法建立MI模型,术后即刻BA+MI组腹腔注射BA 15 mg/(kg·d),BA+DAPT+MI组腹腔注射BA15 mg/(kg·d)及肺组织缺刻基因1(Notch1)抑制剂DAPT 10 mg/(kg·d),1次/d,持续1个月,Sham组和MI组术后不做任何干预。术后1个月,各组通过心脏超声检查计算心脏左心室射血分数(EF),并检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平。各组处死后取心肌组织,观察心肌病理改变,采用Western blotting法检测心肌组织肌球蛋白样BCL2结合蛋白1(Beclin1)、自噬受体蛋白(p62)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)/LC3-Ⅰ、Notch1、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达。结果 Sham组细胞核无逸出,心肌纤维无断裂,具有清晰的心肌纤维结构且排列有序;MI组和BA+DAPT+MI组均可见细胞核逸出,心肌纤维断裂明显且排列紊乱,心肌纤维化明显;与MI组的心肌纤维排列状态相比,BA+MI组心肌纤维化程度明显减轻。与Sham组比较,MI组EF及心肌组织Notch1、Hes1蛋白表达均降低,血清LDH、CK-MB水平及心肌组织Beclin1、p62表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均升高(P均<0.05)。与MI组及BA+DAPT+MI组比较,BA+MI组EF及心肌组织Notch1、Hes1蛋白表达均升高,血清LDH、CK-MB水平及心肌组织Beclin1、p62表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均降低(P均<0.05);MI组与BA+DAPT+MI组上述指标比较均无统计学差异(P均>0.05)。结论 BA可明显改善MI小鼠的左心功能、减轻心肌损伤,其机制可能与通过激活Notch1/Hes1信号通路而减轻心肌细胞自噬有关。

miR-21-5p改善阿霉素诱导的心脏毒性及其作用机制

目的探究miR-21-5p对阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的心脏毒性的影响及潜在的作用机制。方法将C57BL/6小鼠分为对照组(Con组)、阿霉素组(DOX组)、NC agomir处理组(DOX+ago NC组)、miR-21-5p agomir处理组(DOX+ago-miR-21-5p组)、NC antagomir处理组(DOX+anta NC组)、miR-21-5p antagomir处理组(DOX+anta-miR-21-5p组)。DOX组小鼠采用腹腔注射DOX构建小鼠阿霉素心脏毒性模型。DOX+ago NC组、DOX+ago-miR-21-5p组、DOX+anta NC组和DOX+anta-miR-21-5p组小鼠在DOX处理前分别经尾静脉连续注射NC agomir、miR-21-5p agomir(上调靶基因)、NC antagomir及miR-21-5p antagomir(下调靶基因)载体3 d。通过qRT-PCR检测各组小鼠心肌组织miR-21-5p的表达情况。测定小鼠心脏功能,包括左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS),观察心肌组织病理变化,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,观察心肌组织氧化应激及炎症和心肌细胞凋亡情况。结果与Con组相比,DOX组小鼠心肌组织损伤明显加重,LVEF和LVFS值显著降低,血清LDH及CK-MB水平明显升高(P<0.05),表明阿霉素心脏毒性小鼠模型构建成功,并且心肌组织miR-21-5p的表达明显下降(P<0.05)。与DOX组相比,DOX+anta-miR-21-5p组小鼠心肌组织miR-21-5p的表达被抑制,同时心肌组织损伤加重,LVEF和LVFS值降低且血清LDH及CK-MB水平增加(均P<0.05)。与DOX组相比,DOX+ago-miR-21-5p组小鼠心肌组织miR-21-5p的表达水平显著提升,心肌组织损伤明显改善,同时LVEF和LVFS值明显提高且血清LDH及CK-MB水平显著降低(均P<0.05)。此外,与DOX组相比,DOX+ago-miR-21-5p组小鼠心肌细胞凋亡明显减少,心肌组织ROS的产生及氧化应激损伤明显被抑制,同时心肌组织炎症因子的表达也显著降低(均P<0.05)。结论miR-21-5p可通过抑制心肌氧化应激和炎症减轻心肌细胞凋亡,进而改善了阿霉素诱导的心脏毒性作用。

水飞蓟宾对糖尿病小鼠心肌损伤的治疗作用及机制探讨

目的观察水飞蓟宾(SIL)对糖尿病心肌损伤的治疗作用,并初步探讨其机制。方法将40只雄性C57BL/6小鼠随机均分为正常对照组、药物对照组、模型组和实验组,每组10只。模型组和实验组采用链脲佐菌素诱导联合高糖脂饮食法制备糖尿病模型。实验组、药物对照组给予SIL灌胃,正常对照组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,干预12周后处死小鼠。测算心功能指标早期充盈峰值速度与晚期充盈速度之比(E/A)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数百分比(LVFS);观察心肌纤维化程度并计算纤维化比例,检测心肌组织中的纤维化指标TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA;检测心肌组织中氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);检测IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA及NF-κB蛋白;比较各组心肌细胞凋亡率和凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3表达水平。结果与正常对照组相比,模型组E/A、LVEF、LVFS降低,LVESD、LVEDD升高,心肌组织纤维化比例增高,TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达上调,ROS、MDA水平增高而SOD活性降低,IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及NF-κB蛋白表达上调,心肌细胞凋亡率和cleaved Caspase-3表达增高(P均<0.01)。与模型组相比,实验组E/A、LVEF、LVFS升高,LVESD、LVEDD减小,心肌组织纤维化比例降低,TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达降低,ROS、MDA水平降低而SOD活性升高,IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及NF-κB蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率和cleaved Caspase-3表达减少(P均<0.01)。结论SIL可改善糖尿病心肌损伤小鼠心功能,作用机制与减轻心肌组织纤维化、抑制心肌组织氧化应激损伤和炎症反应、抑制心肌细胞凋亡有关。

miR-145-5p对多柔比星诱导小鼠心肌损伤的调控作用及其机制

目的 观察miR-145-5p对多柔比星(DOX)诱导小鼠心肌损伤的影响,并探讨其潜在的分子机制。方法将50只C57BL/6小鼠随机分为Control组(腹腔注射生理盐水)、DOX组(腹腔注射DOX 15 mg/kg)、DOX+NC组(腹腔注射DOX+miRNA NC)、DOX+inhibitor组(腹腔注射DOX+miR-145-5p inhibitor)和DOX+mimic组(腹腔注射DOX+miR-145-5p mimic),每组10只。比较五组注射DOX后14 d的心功能[左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)],心肌组织病理改变,血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,心肌组织细胞凋亡率及裂解半胱天冬酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达,心肌组织miR-145-5p、沉默调节蛋白5(sirt5)mRNA表达(TargetScan软件和双荧光素酶报告基因实验结果显示sirt5是miR-145-5p的靶基因)。将40只C57BL/6小鼠随机分为Control1组(腹腔注射生理盐水)、DOX1组(腹腔注射DOX 15 mg/kg)、DOX+sirt5组(腹腔注射DOX 15 mg/kg+尾静脉注射sirt5慢病毒质粒)及DOX+共处理组(腹腔注射DOX 15 mg/kg+尾静脉注射sirt5慢病毒质粒及miR-145-5p mimic),每组10只。比较四组分组处理后14 d心肌组织二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)表达和超氧化物阴离子荧光探针(DHE)荧光强度,心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH关联蛋白1(keap1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)蛋白表达。结果 五组小鼠LVEF、LVFS及心肌组织sirt5 mRNA相对表达量:DOX+inhibitor组、Control组>DOX组、DOX+NC组>DOX+mimic组;血清LDH、CK-MB水平及心肌组织细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白、miR-145-5p相对表达量:DOX+inhibitor组、Control组DOX+sirt5组、Control1组(P均<0.05)。结论 miR-145-5p参与了DOX诱导的小鼠心肌损伤,其机制可能与靶向负调控sirt5表达,并进一步抑制sirt5下游通路分子Nrf2、SOD1、HO-1和NQO-1表达,从而促进心肌氧化应激和心肌细胞凋亡有关。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与尿激酶型纤溶酶原激活物在载脂蛋白E敲除大鼠动脉粥样硬化斑块表达的意义及相关性

目的:探究细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)与尿激酶型纤溶酶原激活物(μPA)在载脂蛋白E基因(ApoE)敲除大鼠动脉粥样硬化斑块表达意义及相关性。方法:选择ApoE敲除大鼠,将其分为对照组与高脂饮食组,对照组大鼠实施正常饮食喂养,高脂饮食组实施高脂饮食喂养,并分别于喂养的第6、10、14、18周处死部分大鼠,采用H-E染色观测动脉粥样硬化斑块形态,免疫印迹及RT-PCR检测主动脉粥样硬化斑块内EMMPRIN和μPA的表达及其mRNA表达,并实施组间比较。结果:高脂饮食组大鼠动脉出现明显动脉粥样硬化斑块,且随着时间的推进,逐渐加重,而对照组大鼠并未出现明显的动脉粥样硬化斑块;喂养第6、10、14、18周时高脂饮食组大鼠主动脉内EMMPRIN和μPA的表达及其mRNA表达均明显高于对照组;EMMPRIN与μPA表达呈正相关。结论:EMMPRIN与μPA在动脉粥样斑块中的表达水平呈正相关关系,两者可能参与动脉粥样硬化斑块的形成并发挥促进作用。

紫檀芪通过上调自噬对2型糖尿病心肌损伤的保护作用

目的研究紫檀芪(pterostilbene,PTE)对2型糖尿病小鼠心肌损伤的保护作用及潜在机制。方法将60只C57BL/6J小鼠随机均分为正常对照组(Con)、药物对照组(Con+PTE)、模型组(DCM)和紫檀芪组(DCM+PTE),每组15只。DCM组小鼠给予腹腔注射链脲佐菌素联合高脂饮食,Con组小鼠给予正常饲料饮食,Con+PTE组和DCM+PTE组小鼠在不同饮食喂养的基础上给予PTE[10 mg/(kg·d)]灌胃给药处理。小鼠经上述处理4个月后分别检测心脏舒张(E/A)和收缩功能(LVEF、LVFS),测定小鼠血清中LDH和CK-MB含量,检测心肌组织纤维化及心肌细胞凋亡程度,免疫组化观察CollagenⅠ胶原沉着,免疫荧光观察LC3B表达强度,Western blot检测自噬相关蛋白(Beclin1、p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)及AMPK/mTOR通路表达情况。结果与正常对照组相比,模型组小鼠心脏收缩及舒张功能发生明显障碍,血清LDH及CK-MB含量显著上升,心肌组织纤维化及CollagenⅠ胶原沉着显著加重,心肌细胞凋亡明显增加,心肌组织自噬相关蛋白及LC3B荧光表达显著降低,同时AMPK/mTOR通路表达明显下调(均P<0.01)。与模型组相比,紫檀芪组小鼠心脏收缩及舒张功能障碍明显缓解,血清LDH及CK-MB含量显著下降,心肌组织纤维化及CollagenⅠ胶原沉着显著减轻,心肌细胞凋亡明显减少,心肌组织自噬相关蛋白及LC3B荧光表达显著增强,同时,AMPK/mTOR通路表达明显上调(均P<0.01)。与正常对照组相比,药物对照组上述指标变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论紫檀芪通过增强心肌自噬减轻2型糖尿病小鼠的心肌损伤,此过程可能与其激活AMPK/mTOR信号通路有关。

不同程度内质网应激对巨噬细胞自噬的影响

目的:采用ox-LDL诱导巨噬细胞泡沫化模型,通过不同剂量衣霉素诱导巨噬细胞不同程度内质网应激,观察对其自噬的影响。方法:不同剂量衣霉素作用于小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过TUNEL染色检测其凋亡率,Western blot检测内质网应激蛋白GRP78,以及自噬标志蛋白P62的表达水平。结果:与ox-LDL组和大剂量衣霉素组相比,小剂量衣霉素组可以显著减少巨噬细胞的凋亡(P<0.01);与ox-LDL组相比,小剂量衣霉素组上调内质网应激蛋白GRP78表达的同时,自噬标志蛋白P62适度下降(P<0.01);大剂量衣霉素组更为显著地上调了内质网应激蛋白GRP78表达,但同时自噬标志蛋白P62也显著增加(P<0.01)。结论:小剂量衣霉素引起一定程度的内质网应激,可以激活适度的自噬,从而减少巨噬细胞的凋亡,可能有助于降低动脉粥样硬化的程度。

激活Notch1通过促进自噬改善高温高湿条件下心肌缺血/再灌注损伤

目的:明确Notch1通路在高温高湿条件下小鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用及其潜在机制。方法:将成年C57小鼠随机分为(1)假手术组;(2)I/R组;(3)高温高湿组;(4)高温高湿+I/R组;(5)高温高湿+Jagged1(Notch1激动剂)+I/R组;(6)高温高湿+溶剂+I/R组。采用超声心动图检测心功能,伊文氏蓝/2,3,5-三苯基氯化四氮唑双染法检测心肌梗死面积,Western blot检测Notch1细胞内段(Notch1 intracellular domain,Notch1 ICD)、Hairy和分裂增强子(Hairy and enhancer of split,Hes1)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3)、Beclin1和p62的蛋白表达水平。结果:与假手术组对比,I/R组心功能下降,心肌梗死面积增加,Notch1 ICD、Hes1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1(p62相应降低)表达升高,而高温高湿组心功能下降,心肌梗死面积增加,Notch1 ICD、Hes1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1(p62相应升高)表达降低;和I/R组或高温高湿组对比,高温高湿+I/R组心功能进一步下降,心肌梗死面积进一步增加,Notch1 ICD、Hes1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1(p62进一步升高)表达进一步降低;和高温高湿+I/R组对比,加入Notch1激动剂Jagged1后,心功能提高,心肌梗死面积缩小,Notch1 ICD、Hes1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1(p62相应降低)表达升高。结论:激活Notch1通路可能通过促进自噬从而缓解高温高湿所致的心肌缺血/再灌注损伤。

微循环阻力指数在心血管疾病中的应用

随着医疗水平的发展,心血管疾病的诊断和治疗越来越规范和细致,不仅需要对心脏大血管进行评估,对微循环的评估也是十分重要。微循环阻力指数(index of microcirculatory resistance,IMR)是2003年由Fearon医生提出的一种操作方便、能真实反映微循环阻力的冠状动脉功能学定量评价指标。IMR的可重复性好,且不受冠状动脉狭窄影响,在预测围手术期心梗、PCI术后微血管阻塞、ST段抬高性心肌梗死患者PCI预后,评价PCI辅助治疗手段的有效性,阐明应激性心肌病的发病机制以及评价心血管药物的应用等方面具有重要意义。本文就IMR的特点及临床应用做一综述。

比较沙库巴曲缬沙坦与缬沙坦对慢性心衰患者心肾功能的影响

目的:比较沙库巴曲缬沙坦与缬沙坦在慢性心力衰竭(Chronic heart failure, CHF)患者治疗中对心功能及肾功能的影响。方法:按WHO诊断标准随机选择CHF患者,对照组30例,给予缬沙坦80 mg/qd起,2-4周后增至160 mg/qd;研究组30例,给予沙库巴曲缬沙坦100 mg/bid,2-4周后增至200 mg/bid。治疗8周后,比较两组治疗后LVEF、LVESD和LVEDD的变化,以及对Scr、Cys C的影响。结果:(1)两组患者的性别、年龄、NYHA心功能分级等一般情况,以及治疗前LVEF、LVESD、LVEDD、Scr、Cys C等指标比较均无显著性差异(P>0.05),具有可比性。(2)治疗8周后,对照组的LVEF较治疗前显著升高(38.87±6.95%VS.34.73±7.89%,P<0.05),LVESD、LVEDD均较治疗前显著降低(44.43±8.26 mm VS.50.77±8.31 mm,P<0.05;54.77±5.84 mm VS.59.87±7.57 mm,P<0.05),Cys C较治疗前显著降低(1.00±0.33 mg/LVS.1.27±0.52 mg/L,P<0.05),Scr较治疗前无显著性差异(82.24±30.38μmol/LVS.91.19±36.81μmol/L,P>0.05)。研究组的LVEF较治疗前显著升高(38.70±7.29%VS.33.53±9.12%,P<0.05),LVESD、LVEDD均较治疗前显著降低(43.33±9.10 mm VS.49.47±6.84 mm,P<0.05;54.53±6.20 mm VS.60.23±8.30 mm,P<0.05),Cys C较治疗前显著降低(1.01±0.26 mg/LVS.1.32±0.53 mg/L,P<0.05),Scr较治疗前无显著性差异(84.31±32.25μmol/LVS.94.43±38.73μmol/L,P>0.05)。比较两组治疗后各项指标均无显著性差异(P>0.05)。结论:在CHF的治疗过程中,沙库巴曲缬沙坦与缬沙坦均能改善心功能,且在短时间内具有一定的肾功能保护作用。