结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞系恶性转化

目的 :研究结晶型硫化镍 (NiS)诱发SV4 0 LargeT抗原永生化的人支气管上皮细胞系 (16HBE)恶性转化作用。方法 :体外用不同浓度结晶型NiS多次处理 16HBE细胞 ,软琼脂集落形成和裸鼠成瘤试验鉴定转化细胞的恶性度。结果 :细胞培养至 35代 ,发现NiS可诱导 16HBE恶性转化。转化细胞排列紊乱 ,重叠生长 ,在软琼脂中的集落形成率显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,并呈时间剂量依赖关系 ;转化细胞在裸鼠体内成瘤 ,组织学证实为低分化鳞状细胞癌。结论 :结晶型NiS有较强的诱导人支气管上皮细胞恶性转化能力 ;该转化模型为镍致癌机制的分子水平研究提供了理想的研究系统。

浅议医学统计学教学与医学生科研能力的培养

本文分析了医学统计学在医学科研中的重要作用,探讨了在医学统计学教学中,加强对医学生统计思维的培养;采用案例教学;结合科研课题进行应用能力训练,对于培养和提高医学生科研素质和科研实践能力起着极为重要的作用。

二羟环氧苯并芘诱发细胞恶变后基因和蛋白表达差异分析

目的研究苯并(a)芘代谢产物反式二羟环氧苯并芘(反式-BPDE)诱发人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化的基因和蛋白表达的改变,探讨苯并(a)芘致癌的分子机制。方法应用含4 096条人类全长基因的cDNA芯片检测反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的基因表达谱的变化;应用二维凝胶电泳技术和相应软件Im ageM aster2D 3.10分析反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的蛋白质组变化,基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱结合数据库检索鉴定部分表达有差异的蛋白斑点。结果BPDE诱发的恶性转化细胞与阴性对照细胞比较,cDNA芯片结果显示差异表达基因有143条,其中52条基因在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达增高,91条基因在恶性转化细胞中表达降低;二维凝胶电泳显示有72个蛋白斑点出现表达差异,其中44个蛋白斑点在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达升高,28个蛋白斑点在恶性转化细胞中表达降低,对其中7个表达明显差异的蛋白斑点的鉴定显示,原癌基因v-erb-b2同源3、锌指蛋白127、硫氧还原蛋白过氧化物酶2、K IAA0471蛋白在恶性转化细胞中高表达,而钙结合蛋白5、锌指蛋白A iolos、Kelch样蛋白3在恶性转化细胞中低表达。结论反式-BPDE诱发16HBE恶性转化的基因表达谱和蛋白表达谱发生了显著的变化,这些表达改变的基因和蛋白可能参与了BPDE诱发细胞恶变的过程。

反式——BPDE诱发人支气管上皮细胞系P53基因突变的研究

目的 检测苯并 (a)芘的代谢产物反式—BPDE诱发的人支气管上皮细胞系P5 3基因突变 ,探讨苯并 (a)芘在人肺癌发生中的作用。方法 用银染PCR—SSCP方法检测P5 3抑癌基因第 5、6、7、8外显子的点突变情况。结果 经反式—BPDE处理的人支气管上皮细胞系 ,2 0d后 ,P5 3基因第 8外显子出现点突变。结论 结果提示 ,P5 3基因点突变可能是苯并 (a)

双向电泳分析结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞恶变后的蛋白表达差异

[目的]建立双向凝胶电泳分析方法 ,比较结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞恶变后的蛋白表达差异。[方法]采用一步法分别提取人支气管上皮细胞系16HBE细胞和结晶型NiS诱发该细胞系的恶性转化细胞N_2细胞的可溶性总蛋白 ,经双向凝胶电泳分离、银染显色、用双向电泳凝胶图像分析软件ImageMaster2D3.10分析两者之间可溶性蛋白的差异表达。[结果]获得了分辨率和重复性较好的双向电泳银染图谱。图像分析显示在恶性转化细胞中检测到19个新的蛋白点 ,同时有47个蛋白点消失 ,有140个蛋白点在两种细胞中表达量有显著差异,其中89个蛋白点在N_2细胞中表达升高 ,51个蛋白点在N_2细胞中表达降低。[结论]双向电泳技术分析NiS诱发细胞恶性转化后蛋白质组发生了变化 。

《造型设计与包装装璜》课程的教改

总结了教学实践的经验，强调教学与实际密切结合，加强基本功训练，采用先进教学手段等来提高教学效果。

叶绿酸抑制细胞恶性转化的蛋白表达差异分析

目的:采用蛋白质组学技术分析叶绿酸抑制细胞恶性转化的蛋白差异表达,探讨叶绿酸抗细胞转化的分子机制。方法:一步法分别提取二羟环氧苯并芘(BPDE)诱导的转化细胞B-1和叶绿酸与BPDE共处理的抗转化细胞CB-1总蛋白,应用二维凝胶电泳技术和相应软件ImageMaster 2D 3.10分析两种细胞的蛋白质组变化,基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱(MALDI-TOF-MS)结合数据库检索鉴定部分表达有差异的蛋白斑点。结果:与B-1细胞相比,CB-1细胞中有47个蛋白斑点出现表达差异,其中19个蛋白斑点表达升高,28个蛋白斑点表达降低;质谱分析初步鉴定出5个差异蛋白斑点。结论:叶绿酸抑制细胞恶性转化可引起大量蛋白表达差异,这些差异蛋白可能参与了叶绿酸抗细胞转化的过程。

氢醌对L-02肝细胞DNA损伤及细胞周期的影响

目的探讨氢醌(HQ)对体外培养L-02肝细胞DNA损伤及细胞周期的影响。方法将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80、160和320μmol/L)的HQ作用24h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定L-02肝细胞的相对存活率,采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA的损伤状况,并采用流式细胞术检测细胞周期分布状况。结果在0～80μmol/L的范围内,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P>0.05);当染毒剂量超过160μmol/L时,其存活率则明显地下降(P<0.01)。随着HQ作用浓度的升高,L-02肝细胞DNA链的断裂程度也随着逐渐增加。0～80μmol/L范围内的HQ作用24h后,L-02肝细胞的细胞周期也发生了明显的改变,表现为S期细胞比例明显增加,G1期细胞的比例下降。结论HQ对L-02肝细胞DNA具有损伤作用,并且在体外能够引起明显的S期细胞阻滞。

肺癌及癌前病变组织中P53基因突变蛋白检测

目的探讨P53基因突变在肺癌癌前病变(支气管黏膜上皮不典型增生)和肺癌中的作用。方法在41例支气管黏膜上皮不典型增生组织、150例肺癌患者手术标本及51例正常肺组织中用免疫组化的方法检测P53基因突变蛋白的表达,并用PCR扩增和DNA测序技术,检测P53基因在二羟环氧苯并芘(BPDE)诱导人气管上皮细胞系转化过程中的变化。结果7.8%(4/51)的正常肺组织中可检测到P53基因突变蛋白;43.9%(18/41)的支气管黏膜上皮不典型增生组织和68.7%(103/150)的肺癌组织中可检出P53突变蛋白,组间差异有统计学意义,P<0.001。且随着肺组织癌变过程的变化,P53基因突变蛋白的表达呈逐渐增高的趋势,P<0.001。吸烟者P53突变蛋白检出率高于非吸烟者。BPDE诱导人气管上皮细胞的转化细胞可同时检测到P53突变蛋白的表达及P53基因序列的突变。结论P53基因突变与肺组织癌变过程密切相关,吸烟暴露可导致P53基因的突变,检测P53突变将为肺癌的早期诊断提供科学依据。

SPSS软件在医学统计学教学中应用的探讨

目的 探讨SPSS软件对医学统计学教学的作用。 方法 教研室自 1999年起在研究生、本科生的医学统计学教学中结合SPSS软件进行计算机辅助教学实践。 结果 使用SPSS软件辅助医学统计学教学 ,激发了学生的学习积极性 ,提高了学生对实际资料的统计分析能力 ,明显地提高了教学效果。 结论 使用SPSS软件来辅助医学统计学教学的方法对提高医学统计学的教学效果有重要的意义 ,值得推广。

镍化合物对培养人支气管上皮细胞的致癌性研究

[目的]研究几种镍化合物对培养人支气管上皮细胞的恶性转化作用及转化细胞的致癌性。[方法]通过细胞转化、体外转化细胞的软琼脂培养和裸鼠接种 ,测定几种镍化合物的致癌性。用全谱直读感耦等离子体原子发射光谱仪检测镍转化后接种成瘤细胞及肺癌组织中二价镍离子及镉、铬、铍、砷等几种金属元素的含量。[结果]水溶性镍化合物NiCl2、Ni(CH3COO)2、NiSO4 和不溶性结晶型NiS均可使人支气管上皮细胞发生恶性转化 ,以NiS的作用最强 ,浓度为110μmol/L时 ,每瓶细胞的平均转化集落为15.7±3.51 ,而浓度大致相同的三种水溶性镍化物 (100μmol/L)的转化集落分别为7.33±3.61、6.3±2.31和5.67±1.53。转化细胞接种裸鼠后能诱发肿瘤形成。在肺癌组织中的二价镍离子浓度明显高于正常肺组织 (P<0.01) ,而NiS转化细胞内的二价镍离子浓度则相当于肺癌组织中浓度的二倍。[结论]NiCl2、Ni(CH3COO)2、NiSO4 和NiS对人支气管上皮细胞均具有转化活性和致癌性 。

三氯乙酸染毒对肝L-02细胞的增殖作用及对DNA甲基化水平的影响

目的 检测三氯乙烯（TCE）主要代谢产物三氯乙酸（TCA）对人肝L-02细胞染毒24h后的增殖作用，以及对DNA总体甲基化水平的影响，探索TCE对肝L02细胞的表型遗传毒性。方法选择0．1～0．9mmol／L浓度TCA作为合适的染毒剂量对肝L-02细胞染毒24h后分别进行下列试验：以CCK-8试剂盒观测细胞的生长曲线；以抗5-mC抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化总体水平（TCA0．9mmol／L染毒24h）；以流式细胞仪（FCM）检测其对细胞周期的影响及凋亡情况；提取细胞DNA进行琼脂糖电泳分析其对DNA的损伤作用。以上试验必要时设置5-氮杂胞苷（5-aza—dC5μmol／L）处理的L-02细胞为基因组DNA低甲基化的对照以及肝癌细胞作为细胞周期分析的对照。结果TCE在0．1～0．9mmol／L浓度下染毒24h后可以促进肝L-02细胞生长，并在0．9mmol／L浓度作用下24h可致肝L-02细胞DNA总体甲基化水平降低，荧光强度和正常细胞比较明显减弱；细胞周期分析发现TCA处理24h后再用正常培养基继续培养24h后可使细胞S＋G2期中细胞比例增加（与肝癌细胞接近）；DNA梯状电泳分析未发现DNA损伤性改变。结论TCA染毒24h可促进细胞生长，可诱导基因组DNA低甲基化，并造成细胞周期的改变，提示TCA对肝细胞的早期细胞毒性作用与表型遗传机制有关。

反式二氢二醇环氧苯并芘诱发的细胞DNA断裂损伤

目的 研究反式二氢二醇环氧苯并芘 [Anti 7,8 dihydrodiol 9,10 epoxidebenzo(a)pyrene ,BPDE]诱导的恶性转化的人支气管上皮细胞 (Humanbronchialepithelialcells ,HBE)及其裸鼠成瘤细胞中DNA断裂损伤情况。方法 单细胞凝胶电泳法 (Singlecellgelelectropheresis ,SCGE)。结果 反式BPDE诱导的恶性转化的HBE及其裸鼠成瘤细胞与对照组细胞相比各指标差异均有显著性 (P <0 0 1) ,各指标的高剂量与低剂量组之间差异也有显著性 (P <0 0 5 )。结论 反式BPDE可导致DNA断裂损伤 ,其损伤程度与剂量有一定关系。

化学致癌的表观遗传机制

近年来研究显示,致癌物引起的表观遗传改变在化学致癌机理中可能起着十分重要的作用。本文扼要地讨论了几种主要的表观遗传改变如DNA甲基化、组蛋白修饰和染色质重塑等改变,以及伴随或促进非遗传毒性致癌物引起的致癌过程及其作用机理;对化学致癌物引起的表观遗传改变可以在代间相传这一新发现作了简要介绍;并提出了今后值得关注的问题。

细胞衰老过程中P16表观遗传学修饰研究

目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程及细胞早衰阶段中P16的表观遗传学调控作用。方法在细胞复制性衰老过程(同步培养的22 PDL正常人胚肺成纤维细胞于约50%融合度时进行400μmol/LH_2O_2处理,每天用H_2O_2染毒工作液染毒1次,每次2 h,持续4 d)中,将正常人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞组(22 PDL)、中年细胞组(35 PDL)、复制性衰老细胞组(49 PDL);将经400μmol/L H_2O_2染毒4 d的22 PDL人胚肺成纤维细胞继续培养7 d,设为早衰细胞组。荧光定量PCR检测P16的mRNA表达水平,甲基化特异PCR检测其启动子区-846639 bp的甲基化水平,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其相应启动子区组蛋白修饰情况,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)及H4(Lys20)甲基化修饰。结果与年轻细胞组相比,中年细胞组P16的mRNA表达降低,复制性衰老细胞组和早衰细胞组P16的mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在P16启动子区,第一外显子上游-1000 bp内,其CpG岛片段长度为995 bp,甲基化特异性PCR(MSP)扩增片段位于CpG岛内-846～-639 bp之间,长度为208 bp。中年细胞组、复制性衰老细胞组、早衰细胞组甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.42、0.34、047,未甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.61、0.96、0.79。在P16 IP1启动子区(-685～-489 bp),复制性衰老细胞组及早衰细胞组以组蛋白H4(Lys20)甲基化修饰为主;在P16IP2启动子区(-229～-60 bp),复制性衰老细胞组受组蛋白H3、H4乙酰化和H4(Lys20)甲基化联合修饰,早衰细胞组以H3、H4乙酰化修饰为主。结论细胞衰老过程中,P16启动子区的组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。

硫化镍与苯并芘转化人支气管上皮细胞基因差异表达谱的研究

目的 用cDNA微阵列技术探讨经硫化镍 (NiS)与二羟环氧苯并芘 (dihydroxyepoxybenzopyrene ,BPDE)转化后的人支气管上皮细胞 ( 16HBE)基因的差异表达 ;以了解不同种类和性质的化合物在转化细胞及致癌分子机制方面的异同 ;为预防人类生存环境不同外来化合物对人类健康的危害和影响提供科学依据。方法 取 16HBE分为NiS处理组 ,BPDE处理组和 16HBE(对照组 )三组同步培养 ,传代至第 3 5代 ;提取三种细胞的总RNA ,逆转录合成cDNA并以Cy3 dCTP和Cy5 dCTP荧光素分别标记制作探针。探针混合后与含 40 0 0个人类基因的芯片杂交。以ScanArray 40 0 0扫描仪扫描芯片 ,以GenPixPro 3 0软件分析荧光信号 ,对三组差异表达的基因进行生物学信息分析。结果 NiS转化的 16HBE细胞与BPDE转化的 16HBE细胞经分析比较 ,呈现差异表达的基因有 2 2个 ,其中 11个 ( 5 0 % )下调 ,另 11个 ( 5 0 % )上调。结论 NiS与BPDE对 16HBE细胞株的转化作用在抑癌基因 ,细胞周期蛋白相关基因 ,细胞凋亡和应激反应基因相关基因 ,DNA合成、修复和重组蛋白相关基因 ,DNA结合、转录和转录因子类基因 ,细胞受体相关基因 ,代谢相关基因 ,蛋白翻译和合成相关基因等多类基因上呈现差异表达。

水源水及自来水中微囊藻毒素污染的流行病学研究

目的探讨某市水源水及城区自来水中微囊藻毒素(Microcystin,MCYST)的污染现状。方法采用环境流行病学与实验研究相结合的方法,对某市A、B两水厂取水点和城区自来水进行采样,每2个月采样一次,连续采样1年；实验室采用酶联免疫吸咐试验(ELISA)测定MCYST含量。结果该市水源水及A、B两水厂生产的自来水中几乎均可检测出MCYST,最高检出值为771ng/L,其中7月至9月的高温季节MCYST含量相对较高。结论该市水源水及自来水均已受到了不同程度的MCYST的污染,高温季节尤其明显；自来水厂应设法改进水处理工艺。

加强实验教学,培养包装工程创新人才

旧的实验教学体系,影响了学生创新思维的培养和能力的提高。文中就提高人才综合素质和能力进行思考,提出加强实验教学,走产学研相结合的道路,使用先进的实验技术和手段,培养包装工程创新人才;有利于增强学校竞争力,符合市场对人才培养的要求。