HIF1α、PTEN与VEGF在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF1α)、第10染色体磷酸酶基因(PTEN)与血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色SP法检测44例乳腺癌组织及10例乳腺良性病组织中HIF1α、PTEN和VEGF蛋白的表达情况。结果HIF1α与VEGF在乳腺癌组织高表达,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),PTEN在乳腺癌组织的表达低于对照组(P<0.01),HIF1α与VEGF的高表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05);PTEN表达在腋淋巴结是否转移及ER状况之间比较差异均有显著性(P<0.05);HIF1α表达与VEGF表达呈显著正相关(rs=0.344,P=0.022),与PTEN表达显著负相关(rs=-0.374,P=0.012)。结论在乳腺癌中HIF1α、VEGF与PTEN蛋白表达水平有相关性,三者在乳腺癌发生、发展和转移中有重要意义,对临床判断乳腺癌预后也有一定价值。

孕激素膜受体1在乳腺癌的表达及其生物学意义

目的探讨孕激素膜受体1(PGRMC1)在乳腺癌中的表达状况及与临床病理指标的可能关系。方法采用免疫组织化学方法回顾性分析检测60例乳腺癌PGRMC1的表达,并评价其与病理分级、临床分期、转移,化疗敏感性以及预后之间的关系。结果 60例乳腺癌组织PGRMC1表达阳性37例,阴性23例。PGRMC1的表达与乳腺癌淋巴结转移(P=0.004)、肿瘤大小(P=0.03)和临床分期(P=0.039)密切相关;与年龄(P=0.196)和肿瘤病理分级(P=0.526)无关。PGRMC1的表达与乳腺癌患者的总体生存率(Log-rank=15.638;P=0.0001)和无瘤生存率(Log-rank=4.443;P=0.035)有关。多因素分析结果提示PGRMC1是乳腺癌独立的预后因子(P=0.002)。结论 PGRMC1的表达乳腺癌随转移和临床分期升高而增强,可能是乳腺癌的预后因素之一。

乳腺癌组织中PTEN、HIF-1α的表达及意义

采用免疫组化法检测44例乳腺癌(观察组)组织中第10染色体磷酸酶基因(PTEN)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),与对照组作比较,分析PTEN表达与乳腺癌临床病理参数的关系及其与HIF-1α表达的相关性。结果显示,对照组PTEN均呈高表达,观察组PTEN低表达者占47.7%(21/44)、高表达者占52.3%(23/44),两组相比,P<0.01;对照组HIF-1α表达均阴性,观察组HIF-1α高表达者占56.82%(25/44)、低表达者占43.18%(19/44),两组相比,P<0.01;PTEN表达与乳腺癌是否有淋巴结转移、乳腺癌雌激素受体状态及局部是否复发相关(P均<0.05),PTEN与HIF-1α表达呈显著负相关(r=-0.374,P<0.05)。认为乳腺癌组织PTEN低表达、HIF-1α过表达,这对乳腺癌的预后判断有一定的价值。

PGRMC1参与调控乳腺癌细胞增殖及化疗敏感度的实验

目的探讨孕激素膜受体1(progesterone receptor membrane component-1,PGRMC1)是否参与乳腺癌细胞增殖及化疗药物敏感度的调控,为乳腺癌的化疗提供参考依据。方法设计合成以PGRMC1为靶标的siRNA1、2,用lipofectin2000转染人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231(ER-,PR-)和低转移细胞株MCF-7(ER+,PR+),QRT-PCR检测转染siRNAs后PGRMC1基因mRNA水平变化,Western blot法检测蛋白表达变化,以siRNA-GFP为阳性对照,未处理组为空白对照。CCK8法检测转染前后DTX敏感度。应用1/2的IC50DTX作用转染组与对照组,流式细胞仪检测各组细胞周期变化,Annexin V/PI阳性细胞百分比,对比各组细胞凋亡率、死亡率,双氢二氯荧光黄染色阳性率判定各组细胞内ROS水平。JC-1染色后,免疫荧光显微镜下观察各组细胞线粒体膜电位变化。结果以PGRMC1为靶标设计的siRNA1、2对该基因mRNA及蛋白表达显著抑制在70%以上,细胞增殖受抑,对化疗药物敏感度增高,与非转染组相比G2期细胞比例明显增加,凋亡细胞比率明显增加,细胞内ROS水平也随之升高,线粒体膜电位下调。结论 PGRMC1参与了乳腺癌细胞增殖及化疗敏感度的调控。

结直肠癌中ATBF1基因功能分析

目的对ATBF1基因在结直肠癌中功能进行研究。方法通过免疫组织化学研究146例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织和激光共聚焦研究常见结直肠癌细胞株中ATBF1表达情况,免疫印迹检测ATBF1-A蛋白在高、中、低分化的癌组织及癌旁组织和常见细胞株中的表达,RT-PCR检测38例中分化结直肠癌组织及癌旁组织和常见细胞株中ATBF1m RNA的表达情况。结果ATBF1在结直肠癌癌旁组织中的表达量高于癌组织,分化程度越高表达量越高,与转移呈负相关,但与ATBF1m RNA的表达无明显相关性。在不同细胞株中ATBF1蛋白及ATBF1m RNA表达量不同。结论 ATBF1在结直肠癌中呈现抑癌基因作用,与肿瘤分化程度及淋巴转移程度相关。

PTEN和血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及其意义

目的:探讨抑癌基因PTEN蛋白在人乳腺癌中的表达情况,及其与血管内皮生长因子(VEGF)表达的相关性。方法:应用免疫组织化学染色S-P法,检测44例乳腺癌组织石蜡切片中PTEN蛋白、VEGF蛋白的表达情况,比较PTEN蛋白表达与临床病理指标的关系,及其与VEGF蛋白表达的相关性。结果:PTEN蛋白表达定位于细胞质。PTEN蛋白表达减低者占47.7%(21/44),阳性表达者占52.3%(23/44)。PTEN蛋白表达与乳腺癌是否淋巴结转移、乳腺癌雌激素状态及局部是否复发相关(P<0.05)。PTEN与VEGF蛋白表达呈负相关,但无统计学意义(r=-0.236,P=0.122)。结论:乳腺癌患者PTEN蛋白低表达与预后不良有关,PTEN对乳腺癌有一定的预后价值。在人乳腺癌中,VEGF可能是PTEN的主要下游基因。

HIF1α在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨HIF1α在人乳腺癌中的表达及意义。方法应用免疫组织化学染色S-P法,检测44例乳腺癌组织石蜡切片中HIF1α蛋白的表达情况,比较HIF1α蛋白表达与临床病理指标的关系及其意义。结果HIF1α蛋白主要分布于细胞质,少量分布于细胞核;10例乳腺良性病变的HIF-1α表达均为阴性,在44例乳腺癌患者中,HIF1α高表达者为25例,低表达19例。两者比较差异有显著性(χ2=10·580,P=0·001)。HIF1α表达在乳腺癌组织学分级、临床分期、淋巴结是否转移之间比较差异有显著性(均P<0·05)。HIF1α在乳腺癌中表达情况在不同年龄、肿瘤不同大小以及雌激素受体状态组间比较差异无显著性(均P>0·05)。结论HIF1α在乳腺癌中过度表达,在病理分级高、临床分期晚、腋窝淋巴结转移者HIF1α表达率高,其可作为判断乳腺癌预后不良的标志物。

超声引导下麦默通旋切系统在触诊阴性乳腺病灶诊断中的应用

目的探讨超声引导下麦默通旋切系统对触诊阴性乳腺病灶的诊断优势及意义。方法 2014年1月~2015年9月我院所收治经超声诊断而临床触诊阴性病灶的341例患者采用超声引导下麦默通旋切系统旋切并对其中164例患者进行了BARD活检针穿刺活检,回顾分析了相应患者的临床资料,分析了麦默通旋切系统较BARD活检穿刺针的诊治优势,同时对常见并发症进行探讨。结果 341例麦默通旋切患者穿刺成功率为100%,164例BARD活检穿刺针患者穿刺成功率为82.19%,麦默通旋切组标本病检阳性率为100%,而BARD活检穿刺针组阳性率仅为76.1%。341例患者中仅5例患者出现轻微皮下瘀斑,3例患者出现术后血肿。结论针对触诊阴性的乳腺病灶,在超声引导下行麦默通旋切活检术具有微创、安全、成功率高、并发症少的优势,对触诊阴性乳腺病灶的诊治具有重要意义。

PTEN的研究进展及与乳腺癌的关系

PTEN是 1997年发现的具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因 ,该基因的变异与人类多种肿瘤的发生发展及预后有关。

Let-7a沉默c-myc基因对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的探讨let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞株的抑制作用及可能的作用机制。方法用lipofectamineTM2000介导let-7a和阴性对照siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞株,半定量RT-PCR检测各组细胞c-mycmRNA表达;Westernblot测定转染24h后c-myc蛋白的表达水平;CCK-8检测细胞增殖和凋亡。结果细胞转染后,let-7a转染组的c-mycmRNA表达水平明显低于脂质体对照组和阴性siRNA转染组(0.586±0.032,0.934±0.029,0.825±0.004,P<0.01);在MCF-7细胞中存在分子量62kD的特异性条带,与c-myc蛋白分子量相符,let-7a组的特异性条带明显弱于对照组;let-7a对细胞增殖具有一定的抑制作用(P<0.05),且该抑制作用具有时间和浓度的依赖性。结论 Let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞的增殖有明显抑制作用,其机制可能与抑制c-myc的基因表达有关。

Beclin 1增强三阴性乳腺癌BT-549细胞对紫杉醇的敏感性

目的:研究Beclin 1对于三阴性乳腺癌BT-549细胞对紫杉醇的敏感性的影响。方法:应用慢病毒介导Beclin 1表达载体转染BT-549细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞;MTT法检测各组细胞的增殖抑制率;流式细胞术和Hoechst33342染色法检测细胞凋亡情况;吖啶橙染色法检测细胞内酸性囊泡形成情况。结果:成功构建稳定表达Beclin 1的BT-549细胞;紫杉醇作用24 h,Beclin 1组的IC50为(416.85±16.97)μg/L,显著低于空载体组(1725.43±99.70)μg/L和未转染组(2130.10±190.74)μg/L(F=154.847;P<0.00);作用48 h,Beclin 1组IC50为(74.48±10.18)μg/L,显著低于空载体组(280.18±14.78)μg/L和未转染组(614.80±9.29)μg/L(F=1638.484;P<0.00);50μg/L紫杉醇处理48 h,Beclin1组BT-549细胞凋亡率为(46.40±1.00)%,显著高于空载体组(37.81±1.85)%和未转染组(35.55±3.36)%(F=14.661;P<0.005),Beclin 1组细胞细胞核凋亡特征改变较其他两组更明显;紫杉醇处理后,Beclin 1组细胞酸性囊泡形成显著多于其他两组。结论:Beclin 1显著增强三阴性乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。

马齿苋生物碱对乳腺癌裸鼠肿瘤抑制的实验研究

目的探讨马齿苋生物碱对乳腺癌裸鼠肿瘤的抑制作用。方法利用体外培养高、低转移的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7细胞,并将两组癌细胞体外培养后移植于裸鼠体内,观察马齿苋生物碱对肿瘤细胞的抑制效率。比较各组肿瘤组织瘤重,计算肿瘤生长抑制率;通过病理切片HE染色观察各组肿瘤组织病理学变化,并通过高效液相色谱分析肿瘤组织对马齿苋生物碱的亲和力。利用ELISA检测方法分析肿瘤局部组织VEGF的表达水平。结果马齿苋MDA-MB-231组和马齿苋MCF-7组肿瘤体积明显缩小,MCF-7组和MDA-MB-231组肿瘤体积较马齿苋干预组明显增大,差异有统计学意义(P=0.000)。马齿苋生物碱干预乳腺癌裸鼠后,病理显示肿瘤细胞减少,并伴有肿瘤坏死和调亡。实验结果显示肿瘤组织对马齿苋生物碱有较高的亲和力。同时研究还显示马齿苋生物碱对肿瘤的VEGF有显著的抑制作用(P=0.000)。结论马齿苋生物碱能有效抑制乳腺癌细胞的生长,调控肿瘤细胞代谢,可能有望成为乳腺癌的新的治疗方法和手段。

短发夹RNA沉默S100A4基因对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖和迁移力的抑制

目的观察靶向S100A4的shRNA对MCF-7细胞增殖和迁移力的影响。方法构建S100A4基因特异性shRNA表达载体,使用QRT-PCR和Western blot检测转染后MCF-7细胞中S100A4的表达水平,运用MTT法和流式细胞术检测转染后MCF-7细胞增殖水平和凋亡率的变化。将S100A4-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞,G418筛选及克隆化培养,并运用划痕实验检测其迁移力的变化。结果经测序鉴定证实成功构建S100A4-shRNA表达载体。转染48h后,所构建的S100A4-shRNA表达载体能够有效抑制MCF-7细胞中S100A4的表达,并且可以显著降低MCF-7细胞增殖水平以及诱导细胞进入晚期凋亡;稳定转染S100A4-shRNA表达载体的MCF-7细胞形态无显著变化,但是迁移力明显下降。结论S100A4-shRNA表达载体能有效地抑制乳腺癌MCF-7细胞中S100A4的表达,从而降低细胞增殖水平和迁移力。

生长抑素联合四磨汤治疗粘连性肠梗阻的临床研究

目的探讨生长抑素联合四磨汤治疗粘连性肠梗阻的应用效果及临床疗效。方法将102例术后粘连性肠梗阻患者随机分为对照组(50例)和治疗组(52例)。对照组采用常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加生长抑素联合四磨汤治疗。观察和比较两组治疗前后临床症状及体征改善情况和中转手术率。结果联合药物治疗组临床症状明显改善,治疗组46例患者腹痛、腹胀缓解,占88.5%,而对照组32例缓解,占64.0%;治疗组与对照组肛门恢复排气比率分别为96.0%和83.7%、电解质恢复比率分别为87.1%和69.0%,两组比较差异有显著性(P<0.05);促进胃肠功能恢复,减少胃肠减压量,拔管率及所需时间两组比较差异有显著性(P<0.05);降低急诊手术率治疗组治愈率和总有效率均高于对照组,两组疗效比较差异有显著性(P<0.05)。结论生长抑素联用四磨汤可明显改善粘连性肠梗阻的临床症状及体征,提高保守治疗的成功率。

HER-2基因靶向RNA干扰重组表达载体的构建及序列分析

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,以HER-2为靶基因,设计构建重组表达载体,并进行测序鉴定.方法:设计具有短发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pGPU6/ GFP/Neo中构建重组表达载体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,并进行序列测定.再转染人大肠癌HT29细胞,进行荧光摄像和G418抗性筛选.结果:将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,经酶切和测序鉴定确实为所需序列.结论:HER-2靶向RNA干扰重组表达载体的构建成功,并可以进行稳定筛选.

小白菊内酯及顺铂对人结肠癌SW620细胞凋亡影响机制的研究

目的初步探讨小白菊内酯及顺铂对人结肠癌细胞SW620细胞凋亡影响的机制。方法培养SW620细胞,单独使用5μmol/L顺铂或10μmol/L小白菊内酯处理SW620细胞,并5μmol/L顺铂和10μmol/L小白菊内酯联合作用SW620细胞。处理24 h后收集细胞,提取总RNA,处理48 h后收细胞提取总蛋白;采用荧光定量PCR和Western Blot的方法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 9和PARPmRNA水平和蛋白水平的表达变化。结果小白菊内酯及顺铂单药作用时可上调Bax、Caspase 3、Caspase 9和PARP mRNA水平和蛋白水平的表达量,下调Bcl-2 mRNA水平和蛋白水平的表达量,联合作用时对凋亡基因的影响作用更加明显。结论小白菊内酯及顺铂对SW620细胞凋亡的影响可能通过调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 9和PARP的表达发挥作用。

c-myc反义寡核苷酸对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的:研究体外c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法:利用脂质体LipofectamineTM2000介导将c-myc ASODN转染入大肠癌HT-29细胞中,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法检测c-myc基因mRNA及蛋白的表达,MTT、流式细胞仪(FCM)检测c-myc ASODN对人结肠癌HT-29细胞增殖抑制及其对奥沙利铂敏感性影响.结果:转染c-myc ASODN后,HT-29细胞内c-mycm RNA水平显著降低(0.464±0.029vs0.974±0.027,0.945±0.012,均P<0.01).在HT-29细胞中存在分子质量62kDa的特异性条带,与c-myc分子质量相符,ASODN组在PVDF膜上的特异性条带明显弱于对照组;MTT结果显示转染c-myc ASODN48h后的HT-29细胞的增殖速度较对照组细胞明显减慢.FCM显示c-myc ASODN转染后72h后,奥沙利铂+c-myc ASODN组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05).结论:体外c-myc ASODN可抑制c-myc mRNA及蛋白的表达,阻断c-myc可抑制HT-29细胞增殖并增强其对奥沙利铂的敏感性,可能为大肠癌的基因治疗提供新的靶点.

VEGF反义寡核苷酸对体外生长的大肠癌HT-29细胞的抑制作用

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的抑制作用.方法:实验设空白对照组、脂质体转染组、错义链转染组(SODN组)和不同浓度反义链转染组(ASODN组).用LipofectamineTM2000介导的VEGF ASODN和错义寡核苷酸(SODN)转染人大肠癌细胞株HT-29,半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF mRNA的表达;Western blot测定转染48、72h后VEGF蛋白表达;MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡.结果:转染48h后,ASOND组的VEGF mRNA表达水平明显低于脂质体对照组和SODN组(0.455±0.032vs0.934±0.031,0.915±0.004,P<0.01);脂质体对照组与SODN组之间无显著差异.细胞转染48、72h后,ASODN组蛋白表达明显弱于脂质体对照组和SODN组,且72h弱于48h.与对照组比较,VEGF ASODN对HT-29细胞有明显的生长抑制作用,并且抑制呈剂量和时间依赖性(P<0.05).结论:VEGF ASODN通过抑制VEGF的基因表达,对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的增殖进行抑制.

PGRMC1在三阴性乳腺癌中的表达及其与ki-67的相关性

目的 探讨PGRMC1与三阴性乳腺癌（TNBC）分期、分级等各临床病理指标的相关性,建立患者随访系统,并分析其与肿瘤增殖性抗原ki-67的相关性。方法 利用免疫组化检测90例TNBC患者组织中PGRMC1和ki-67的表达,应用χ^2检验,用Kaplan-Meier方法分析PGRMC1表达与生存情况,Log-rank检验比较生存率,用相关性分析和ROC曲线探索其内在相关性。结果 90例TNBC组织中PGRMC1呈现高表达50例。PGRMC1的表达与肿瘤的体积、ki-67的表达、淋巴结转移和临床分期相关（P〈0.05）;TNBC组织中PGRMC1与年龄和肿瘤病理分级无关（P〉0.05）。TNBC组织中PGRMC1的表达与患者的总生存率（Log-rank=15.614,P=0.0001）和无瘤生存率（Logrank=14.371,P=0.031）密切相关。结论 TNBC组织中PGRMC1的表达水平与肿瘤转移、临床分期以及ki-67的增殖呈正相关,多因素分析结果提示PGRMC1可作为TNBC的潜在肿瘤生物标志物以及癌干细胞的治疗靶标。