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大肠杆菌YacG锌指结构的金属结合及功能特性
被引量:
1
1
作者
杨娟娟
章丽和
+4 位作者
苏晓璐
卢彬彬
纪松军
黄招竹
王伍
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期1004-1011,共8页
Yac G蛋白是一种能够抑制大肠杆菌促旋酶(E.coli gyrase)活性的内源性小分子蛋白质,仅由65个氨基酸残基组成。核磁共振(NMR)研究发现,Yac G结构中含有1个Cys-X2-Cys-X15-CysX3-Cys序列的锌指结构域,然而其作用并不清楚。本研究发现,在...
Yac G蛋白是一种能够抑制大肠杆菌促旋酶(E.coli gyrase)活性的内源性小分子蛋白质,仅由65个氨基酸残基组成。核磁共振(NMR)研究发现,Yac G结构中含有1个Cys-X2-Cys-X15-CysX3-Cys序列的锌指结构域,然而其作用并不清楚。本研究发现,在添加外源锌或者铁的M9基础培养基中,表达并纯化得到分别含有锌和铁的Yac G蛋白,而在同时添加铁和L-半胱氨酸的M9基础培养基中可以纯化得到含有铁硫簇的蛋白质。这表明,Yac G不仅是一个锌指蛋白,也是铁结合或铁硫簇结合蛋白。定点突变实验发现,Yac G锌指结构中的4个半胱氨酸残基突变后,其结合的锌、铁、铁硫簇的含量都显著下降。这提示,锌结合、铁结合以及铁硫簇结合的位点均位于锌指结构域中的4个半胱氨酸残基。体内Yac G过表达实验显示,用IPTG在大肠杆菌体内诱导表达野生型Yac G蛋白会导致其生长明显受到抑制,而过表达突变体蛋白(Yac G-C12/28S)对其生长的抑制作用将会减弱。体外实验进一步发现,锌结合、铁结合以及铁硫簇结合形式的Yac G蛋白对E.coli gyrase促DNA螺旋活性的抑制作用没有明显差别,但是锌指结构突变体蛋白(Yac G-C12/28S)对gyrase活性的抑制作用显著减弱。这说明,完整的锌指结构对Yac G抑制gyrase活性的功能具有重要作用。此研究有可能为gyrase抑制剂类抗生素药物的研发提供有用的线索。
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关键词
大肠杆菌YacG
锌指结构
铁/铁硫簇结合
大肠杆菌gyrase
抑制作用
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职称材料
一种特异性检测汞离子的大肠杆菌的构建
2
作者
肖芳兰
吕攀攀
+3 位作者
严锡娟
纪松军
王伍
吕建新
《温州医学院学报》
CAS
2015年第7期474-478,共5页
目的:利用增强型青色荧光蛋白(ECFP)作为报告物,构建特异性检测汞离子的微生物传感器。方法:利用ecfp基因作为报告基因,构建融合报告载体mer R-O/P-ecfp-T。然后将报告载体mer R-O/P-ecfpT转化至E.coli MC4100菌中完成传感器的构...
目的:利用增强型青色荧光蛋白(ECFP)作为报告物,构建特异性检测汞离子的微生物传感器。方法:利用ecfp基因作为报告基因,构建融合报告载体mer R-O/P-ecfp-T。然后将报告载体mer R-O/P-ecfpT转化至E.coli MC4100菌中完成传感器的构建,并对此微生物传感器进行了测定条件的优化及特异性、最适检测范围等相关参数的测定。结果:研究结果表明,此生物传感器对汞离子特异性好,最适检测汞离子浓度范围为0.15~38.4μmol/L。结论:成功地构建了能够特异性检测汞离子的生物传感器,为构建汞离子等影响到人类健康、食品安全的化学物质的超敏感生物传感器奠定了基础。
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关键词
增强型青色荧光蛋白
汞离子
检测
大肠杆菌
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职称材料
构建一种检测水中As^(3+)的敏感型大肠杆菌
3
作者
王伍
纪松军
+2 位作者
黄招竹
卢彬彬
吕建新
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期1081-1092,共12页
为构建一种敏感性强、特异性好的检测砷离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究利用基因敲除技术,敲除了大肠杆菌中负责向胞外转运砷离子的ars B基因,构建对As^(3+)敏感的菌株;利用egfp基因作为报告基因,构建融合检测载体p ET28b-Pars-ars R...
为构建一种敏感性强、特异性好的检测砷离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究利用基因敲除技术,敲除了大肠杆菌中负责向胞外转运砷离子的ars B基因,构建对As^(3+)敏感的菌株;利用egfp基因作为报告基因,构建融合检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp。然后将检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp转化至ars B基因敲除菌中完成敏感型As^(3+)检测菌株的构建。接着对此微生物传感器进行了检测条件的优化,以及线性检测范围、最低检出限、特异性等性能的确定。研究结果表明,与利用野生大肠杆菌作为检测宿主相比,此敏感型砷检测菌株对检测As^(3+)的灵敏度有显著提高,最适检测As^(3+)浓度范围为0.013-42.71μmol/L,最低检出下限为5.13 nmol/L。因此,本研究利用基因敲除技术对大肠杆菌进行改造,成功地提高了砷检测微生物传感器的灵敏度,为重金属微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。
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关键词
As3+检测
大肠杆菌
arsB基因
基因敲除
敏感性
原文传递
题名
大肠杆菌YacG锌指结构的金属结合及功能特性
被引量:
1
1
作者
杨娟娟
章丽和
苏晓璐
卢彬彬
纪松军
黄招竹
王伍
机构
温州医科大学检验医学院生命科学学院检验医学教育部重点实验室
温州市中心医院风湿免疫科
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期1004-1011,共8页
基金
国家自然科学基金项目(No.31100576)
浙江省公益技术研究项目(No.2016C33027)资助~~
文摘
Yac G蛋白是一种能够抑制大肠杆菌促旋酶(E.coli gyrase)活性的内源性小分子蛋白质,仅由65个氨基酸残基组成。核磁共振(NMR)研究发现,Yac G结构中含有1个Cys-X2-Cys-X15-CysX3-Cys序列的锌指结构域,然而其作用并不清楚。本研究发现,在添加外源锌或者铁的M9基础培养基中,表达并纯化得到分别含有锌和铁的Yac G蛋白,而在同时添加铁和L-半胱氨酸的M9基础培养基中可以纯化得到含有铁硫簇的蛋白质。这表明,Yac G不仅是一个锌指蛋白,也是铁结合或铁硫簇结合蛋白。定点突变实验发现,Yac G锌指结构中的4个半胱氨酸残基突变后,其结合的锌、铁、铁硫簇的含量都显著下降。这提示,锌结合、铁结合以及铁硫簇结合的位点均位于锌指结构域中的4个半胱氨酸残基。体内Yac G过表达实验显示,用IPTG在大肠杆菌体内诱导表达野生型Yac G蛋白会导致其生长明显受到抑制,而过表达突变体蛋白(Yac G-C12/28S)对其生长的抑制作用将会减弱。体外实验进一步发现,锌结合、铁结合以及铁硫簇结合形式的Yac G蛋白对E.coli gyrase促DNA螺旋活性的抑制作用没有明显差别,但是锌指结构突变体蛋白(Yac G-C12/28S)对gyrase活性的抑制作用显著减弱。这说明,完整的锌指结构对Yac G抑制gyrase活性的功能具有重要作用。此研究有可能为gyrase抑制剂类抗生素药物的研发提供有用的线索。
关键词
大肠杆菌YacG
锌指结构
铁/铁硫簇结合
大肠杆菌gyrase
抑制作用
Keywords
E.coli YacG
zinc-finger motif
iron/iron-sulfur cluster binding
E.coli gyrase
inhibition
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
Q5 [生物学—生物化学]
下载PDF
职称材料
题名
一种特异性检测汞离子的大肠杆菌的构建
2
作者
肖芳兰
吕攀攀
严锡娟
纪松军
王伍
吕建新
机构
温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室
出处
《温州医学院学报》
CAS
2015年第7期474-478,共5页
基金
国家高科技研究发展计划(863计划)(2014AA06A514)
文摘
目的:利用增强型青色荧光蛋白(ECFP)作为报告物,构建特异性检测汞离子的微生物传感器。方法:利用ecfp基因作为报告基因,构建融合报告载体mer R-O/P-ecfp-T。然后将报告载体mer R-O/P-ecfpT转化至E.coli MC4100菌中完成传感器的构建,并对此微生物传感器进行了测定条件的优化及特异性、最适检测范围等相关参数的测定。结果:研究结果表明,此生物传感器对汞离子特异性好,最适检测汞离子浓度范围为0.15~38.4μmol/L。结论:成功地构建了能够特异性检测汞离子的生物传感器,为构建汞离子等影响到人类健康、食品安全的化学物质的超敏感生物传感器奠定了基础。
关键词
增强型青色荧光蛋白
汞离子
检测
大肠杆菌
Keywords
enhanced cyan lfuorescent protein
mercury ion
detection
E.coli
分类号
R12 [医药卫生—环境卫生学]
下载PDF
职称材料
题名
构建一种检测水中As^(3+)的敏感型大肠杆菌
3
作者
王伍
纪松军
黄招竹
卢彬彬
吕建新
机构
温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期1081-1092,共12页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2014AA06A514)
浙江省公益技术研究项目(No.2016C33027)资助~~
文摘
为构建一种敏感性强、特异性好的检测砷离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究利用基因敲除技术,敲除了大肠杆菌中负责向胞外转运砷离子的ars B基因,构建对As^(3+)敏感的菌株;利用egfp基因作为报告基因,构建融合检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp。然后将检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp转化至ars B基因敲除菌中完成敏感型As^(3+)检测菌株的构建。接着对此微生物传感器进行了检测条件的优化,以及线性检测范围、最低检出限、特异性等性能的确定。研究结果表明,与利用野生大肠杆菌作为检测宿主相比,此敏感型砷检测菌株对检测As^(3+)的灵敏度有显著提高,最适检测As^(3+)浓度范围为0.013-42.71μmol/L,最低检出下限为5.13 nmol/L。因此,本研究利用基因敲除技术对大肠杆菌进行改造,成功地提高了砷检测微生物传感器的灵敏度,为重金属微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。
关键词
As3+检测
大肠杆菌
arsB基因
基因敲除
敏感性
Keywords
arsenite ion detection
Escherichia coli
arsB gene
gene knock-out
sensitivity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌YacG锌指结构的金属结合及功能特性
杨娟娟
章丽和
苏晓璐
卢彬彬
纪松军
黄招竹
王伍
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
下载PDF
职称材料
2
一种特异性检测汞离子的大肠杆菌的构建
肖芳兰
吕攀攀
严锡娟
纪松军
王伍
吕建新
《温州医学院学报》
CAS
2015
0
下载PDF
职称材料
3
构建一种检测水中As^(3+)的敏感型大肠杆菌
王伍
纪松军
黄招竹
卢彬彬
吕建新
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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