大鼠胃炎癌转化模型建立与早期诊断方法探索

目的构建大鼠胃炎癌转化模型,探索新的胃癌早期血清学诊断指标。方法采用N-甲基-N'-硝基-N'-亚硝基胍饮水(MNNG)协同高盐饲料喂养的方法诱导大鼠胃炎癌转化模型。核磁共振成像及组织病理学观察大鼠胃部恶化过程。qRT-PCR检测不同时间点(造模第0,12,24,36,48周)大鼠血清miR-17-5p和miR-374-5p表达水平。结果 MNNG饮水协同高盐饲料喂养成功诱导大鼠胃炎癌转化,经历萎缩性胃炎(造模第24周)和不典型增生(造模第48周)的过程。血清中miR-17-5p和miR-374-5p的表达水平与大鼠胃部恶化程度正相关。与正常对照组相比,第36、48周时,miR-17-5p表达水平分别增加约8倍(t=4.12,P<0.001)和10倍(t=5.33,P<0.001);第48周时,miR-374-5p表达水平增加约6倍(t=3.62,0.001<P<0.002)。结论MNNG饮水协同高盐饲料喂养构建的大鼠胃炎癌转化模型为研究胃癌发病机理提供了良好的动物模型,血清miR-17-5p和miR-374-5p是潜在的胃癌早期无创诊断指标。

miR-374-5p调控微环境间质干细胞促进胃癌增殖与迁移

目的探讨mi R-374-5p调控人胃组织来源间质干细胞(MSCs)体外促进胃癌细胞增殖和迁移的作用。方法体外分离培养获得人胃癌组织来源间质干细胞(GC-MSC)和配对的癌旁组织来源间质干细胞(GCN-MSC);体外采用GCN-MSC和GC-MSC培养上清液处理胃癌细胞,平板克隆实验检测胃癌细胞增殖能力,划痕实验检测胃癌细胞迁移能力;采用mi R-374-5p模拟物和抑制剂分别过表达和抑制GCN-MSC及GC-MSC中mi R-374-5p的表达水平,收集转染后MSC的培养上清,体外处理胃癌细胞,观察胃癌细胞增殖和迁移能力的改变。结果 GC-MSC培养上清处理组形成的单细胞集落数目[(112±7)个]多于GCN-MSC组[(48±6)个],细胞间距[(6.5±0.5)cm]小于GCN-MSC组[(15±1)cm],可明显促进胃癌增殖(t=12.02,P<0.01)和迁移(t=13.17,P<0.01)。GCN-MSC过表达mi R-374-5p后,其培养上清可增加单细胞集落形成数目[(115±12.1)个],缩小细胞间距[(7.83±1.08)cm],促进胃癌增殖(t=9.31,P<0.01)和迁移(t=4.88,P<0.01)。抑制剂组中培养上清处理组单细胞集落数目[(60±10.2)个]减少,细胞间距[(12.17±1.47)cm]增加,mi R-374-5p抑制剂可逆转GC-MSC促进胃癌增殖(t=5.47,P<0.01)和迁移(t=4.95,P<0.01)能力。结论 mi R-374-5p是调控微环境MSC促进胃癌增殖与迁移的重要分子。

胃癌患者血清Ⅺ型胶原α1链的表达及临床意义

目的:检测胃癌患者血清Ⅺ型胶原α1链(COL11A1)的表达并探讨其临床意义。方法:实时荧光定量PCR法检测COL11A1基因在健康体检者(n=25)、浅表性胃炎患者(n=25)和胃癌患者(n=50)血清中的表达水平,分析其与临床病理参数的相关性,并采用ROC曲线分析其诊断效能。结果:胃癌患者术前血清COL11A1表达(5.196±1.417)明显高于健康体检者(1.398±0.182,t=2.659,P<0.05),并与肿瘤浸润深度(P<0.05)和TNM分期(P<0.05)相关。浅表性胃炎患者血清COL11A1表达(1.011±0.129)与健康体检者相比差异无统计学意义(t=1.791,P>0.05)。胃癌患者血清COL11A1的ROC曲线下面积为0.811,95%可信区间(CI)为0.680～0.942,当临界值为1.583时,敏感性为75%,特异性为76.5%。结论:胃癌患者血清COL11A1基因高表达,且与肿瘤浸润深度和TNM分期密切相关,有望成为新的临床诊断指标。

mini-CEX在医学检验临床教学中的实践与思考

目的探讨迷你临床演练评估(mini-CEX)方法在医学检验临床教学中的应用价值。方法将医学检验专业29名实习生和规范化培训生随机分为对照组(14名)和实验组(15名)。对照组接受现行临床带教管理;实验组接受现行临床带教管理的同时,在每个检验亚专业组教学开始时进行mini-CEX考核,并接受反馈,教学结束时再次接受mini-CEX考核。所有学生完成实习后,参加统一理论和操作技能考评。结果与对照组比较,实验组在生物安全意识、仪器保养维护、质量控制、操作细节处理和临床沟通方面均明显提高。结论将mini-CEX考核教育与传统实习带教方式有机结合起来,能够有效提高检验医学临床教学质量。

转录因子婆罗双树样基因4(SALL4)研究进展

婆罗双树样基因4(sal-like4,SALL4)位于染色体20q13.13-13.2,编码蛋白是1个含有8个锌指基序的转录因子。近年的研究表明,SALL4基因在胚胎早期发育、器官形成以及胚胎干细胞增殖和多能性维持方面发挥着重要作用。SALL4基因不同位点的杂合子突变产生无义突变或移框突变,导致终止密码子提前出现,其与常染色体显性遗传病Okihiro综合征、雅-肾-眼综合征、IVIC综合征发病相关。在生殖细胞肿瘤、肝样胃癌、急性髓系白血病和前驱B淋巴细胞白血病/淋巴瘤中SALL4表达水平增高。本文就SALL4的结构、功能及其与相关疾病的关系进行综述。

人间充质干细胞来源外体诱导胃癌细胞恶性转化

目的探讨人间充质干细胞(MSCs)能否通过外体(exosome)促进胃癌细胞迁移、侵袭和化疗抵抗,诱导胃癌的恶性转化。方法提取不同细胞来源的exosome(HFL-ex和MSC-ex),并用可视型纳米颗粒分析仪及western blot进行鉴定;Transwell实验检测不同处理因素下对照组、HFL-ex组和MSC-ex组细胞的迁移、侵袭能力;构建免疫缺陷小鼠模型,处理7 d后分别检测对照组、5-FU组、HFL-ex组和MSC-ex组小鼠的肿瘤体积。结果可视型纳米颗粒分析仪结果表明,HFL-ex和MSC-ex的直径约为(110±49)nm,western blot证实其表面均表达CD63蛋白;Transwell实验结果表明,与HFL-ex比较,MSC-ex可促进SGC-7901细胞的迁移与侵袭(P均<0.05);荷瘤实验结果显示,MSC-ex组小鼠肿瘤体积大于5-FU组和HFL-ex组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MSCs可通过旁分泌exosome的方式促进胃癌细胞迁移、侵袭和化疗抵抗,诱导胃癌的恶性转化。

人脐带间质干细胞来源的外切体对大鼠心肌细胞缺血/再灌注损伤的作用

目的:研究人脐带间质干细胞来源的外切体(hucMSC-exosome)对大鼠缺血/再灌注(I/R)损伤心肌细胞的修复作用。方法:在体内,建立大鼠I/R模型:经冠状动脉左前降支(LAD)结扎缺血30 min后取消结扎恢复灌注,与此同时,尾静脉注射hucMSC-exosome。在体外,建立大鼠H9C2(2-1)心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型:细胞于无血清低糖培养基中缺氧(5%CO2/93%N2)24 h后,用含hucMSC-exosome的高糖10%FBS培养液复氧24 h。采用MTT法、TUNEL法、心肌酶谱以及线粒体膜电位等方法检测大鼠心肌细胞的增殖和凋亡状况。结果:在体内,心肌细胞经I/R损伤后,hucMSC-exosome与hucMSC处理组较PBS处理组血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)值均下降;TUNEL结果显示,前两组较PBS处理组心肌细胞凋亡明显减少;在体外,心肌细胞经H/R损伤后,MTT实验表明细胞增殖显著减弱,hucMSC-exosome作用后,TUNEL及线粒体膜电位(ΔΨm)结果分别显示受损心肌细胞凋亡以及膜电位下降明显减少。结论:hucMSC-exosome能有效抵抗心肌细胞因缺血/再灌注损伤而引起的细胞凋亡。

PEG诱导间充质干细胞与胃癌细胞融合的研究

目的探讨聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)1500诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesechymal stem cell,huc MSC)与胃癌细胞系(HGC-27)融合的可能性及融合细胞(hybrids)的活力。方法荧光染料DIO、DID分别标记HGC-27与huc MSC;细胞计数法观察标记前后细胞增殖情况;PEG1500诱导细胞融合后,用荧光显微镜观察双色的融合细胞;CCK-8法检测融合细胞的活性;流式细胞术分析融合细胞的细胞周期。结果 DIO与DID荧光染料可分别标记HGC-27(表达绿色荧光)与huc MSC(表达红色荧光),且标记对细胞增殖无明显影响;荧光显微镜可观察到双色双核的融合细胞;流式细胞术结果表明,与HGC-27细胞相比,融合细胞活性增强,细胞周期中G1期比例降低,S期比例升高(P<0.01)。结论 PEG可诱导huc MSC与HGC-27细胞融合,且融合后的细胞表现很强的体外增殖活性。

建立PCR-高分辨熔解分析法检测急性髓系白血病IDH1基因突变

可溶性异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）基因在细胞氧化损伤反应中发挥着重要的调控作用。2008年Parsons等首先报道胶质瘤患者中12％IDH1转录本第395位碱基由鸟嘌呤突变为腺嘌呤（c．395G→A），导致该酶精氨酸被组氨酸所替代（R132H）。

高分辨率熔解曲线分析法检测急性髓系白血病c-kit基因突变

目的 应用高分辨率熔解（HRM）曲线分析法检测急性髓系白血病（AML）患者c-kit基因常见突变N822K和D816V.方法 对21例t（8;21）阳性AML患者骨髓标本的c-kit基因第17号外显子进行PCR扩增、HRM突变检测及DNA测序验证.结果 HRM分析发现21例患者中6例（28.6%）的c-kit基因扩增产物出现异常熔解曲线,经测序验证1例为D816V杂合子突变,5例为N822K杂合子突变.结论 HRM分析是一种简便、快速、特异和高通量的c-kit基因突变筛查方法.