辣椒“CMS”三系多重PCR分子标记的优化与验证

目的:优化并验证辣椒“CMS”三系多重PCR分子标记。方法:以改良CTAB法提取的DNA为模板,优化与辣椒“CMS”三系相关的多重PCR分子标记体系,并对20份辣椒种质材料进行育性鉴定,以验证其准确性。结果:优化后20μL的PCR体系含10μL Mix、1μL引物SCAR 130/140、1μL CRF-SCAR、1μL DNA模板,ddH 2 O补齐;优化的PCR扩增程序为94℃预变性3 min,94℃变性30 s,57.8℃复性30 s,72℃延伸90 s,35个循环,最后72℃延伸5 min,4℃保存。利用优化后的多重PCR对A、B、C三系材料进行验证,准确率分别是85.7%、100%和80%。结论:优化后的多重PCR反应体系重复性好、稳定可靠。

辣椒DNA快速提取方法优化

目的:获得一种能够快速提取辣椒基因组DNA的方法,为开展大量的辣椒分子育种工作奠定基础。方法:以CTAB法为对照,通过优化碱煮法的处理时间,不同组织DNA提取效果和保存时间,比较不同提取的DNA在SSR分子标记扩增结果。结果:与传统提取方法相比,NaOH和吐温-20处理3~5 min所提取的DNA扩增效果并无明显差异,4℃条件下可以保存1周左右,并且在植物根部也能获得较好的提取效果。结论:碱煮法所提取的辣椒DNA可以应用于分子标记辅助育种和杂交纯度鉴定等试验。该方法更加快速便捷。