灰飞虱卵表面分泌液中蛋白质组分鉴定及分析

【目的】鉴定和分析灰飞虱Laodelphax striatellus卵表面分泌液中的蛋白质组分,为后续灰飞虱效应子筛选和功能研究提供基础。【方法】在显微镜下从水稻叶鞘中收集灰飞虱完整卵,用磷酸缓冲液洗脱并收集完整卵表面的分泌液;利用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)联用仪测定卵表面分泌液蛋白质组,将其中的35个蛋白与10种节肢动物唾液蛋白质进行比较分析,推测这35种蛋白的功能保守性和特异性;采用qPCR检测10个基因(LsHSP70,LsPDIA3,LsHSP90,LsPPIase,LsADPRF1,LsHSP68,LsEF 1α,LsATPS,LsG3PD和RZF49036)在灰飞虱不同发育阶段(卵、1-5龄若虫和成虫)和雌成虫组织(输卵管、唾液腺、肠道和脂肪体)中的表达量。【结果】在灰飞虱卵表面分泌液中鉴定到149个蛋白,其中有35种蛋白检测到2个及以上的唯一肽段。在这35个蛋白中,发现6个蛋白在至少5种节肢动物的唾液蛋白质组中也普遍存在,推测它们在取食和产卵中具有相似功能;另有9个蛋白未在节肢动物唾液蛋白质组中发现,这些蛋白可能特异性地参与了飞虱的产卵过程。qPCR检测结果显示,LsHSP90和LsEF 1α在雌成虫中高表达,且LsEF 1α在雄成虫中不表达;LsPDIA3和LsHSP90在输卵管中高表达;其余基因在灰飞虱各个发育阶段和组织中均有不同程度的表达。【结论】在灰飞虱卵表面分泌液中鉴定到149个蛋白,其中一些蛋白与节肢动物唾液蛋白相比既有普遍性也有特异性,不同编码基因在不同发育阶段和组织中的表达模式也存在不同程度的差异。

载脂蛋白在褐飞虱取食、存活和繁殖中的作用

【目的】载脂蛋白(apolipoprotein,apoLp)在动物实现其各项生理功能中发挥着重要作用,但如何影响稻飞虱生长发育等尚未见报道。本研究旨在明确载脂蛋白apoLp在褐飞虱Nilaparvata lugens取食、存活和繁殖中的作用。【方法】基于褐飞虱基因组获得载脂蛋白编码基因NlapoLp全长开放阅读框(ORF)序列,并分析其蛋白序列;使用邻接法将NlapoLp与其他昆虫物种的同源序列进行聚类分析;利用RT-qPCR检测NlapoLp在褐飞虱不同发育阶段(卵、1-5龄若虫以及刚羽化的短翅型雌雄成虫)、短翅型雌成虫不同组织(去除唾液腺的头部、唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢)中的表达量;通过对褐飞虱3龄若虫显微注射dsNlapoLp进行RNAi,利用RT-qPCR检测RNAi后NlapoLp的表达量,之后调查不同发育阶段虫体RNAi后褐飞虱在寄主水稻上的单雌蜜露分泌量、若虫存活率和单雌产卵量。【结果】序列特征分析发现NlapoLp有1个信号肽及5个保守结构域,但无跨膜结构域。系统进化树显示褐飞虱NlapoLp与灰飞虱Laodelphax striatellus LsapoLp和白背飞虱Sogatella furcifera SfapoLp的进化关系最近,然后与其他半翅目昆虫紫苑叶蝉Macrosteles quadrilineatus、烟粉虱Bemisia tabaci和茶翅蝽Halyomorpha halys的apoLp聚为一支,表现出较近的亲缘关系。RT-qPCR结果显示,NlapoLp在褐飞虱各个发育阶段均表达,在短翅型雌成虫中的表达量较高;在短翅型雌成虫中肠、脂肪体和唾液腺中高表达,在其他组织中低表达。对褐飞虱显微注射dsNlapoLp可以显著降低NlapoLp的表达,经RNAi后褐飞虱在寄主水稻上的单雌蜜露分泌量、若虫存活率和单雌产卵量均比对照组(注射dsGFP)的显著降低。【结论】载脂蛋白基因NlapoLp在褐飞虱各发育阶段和短翅型雌成虫各组织均表达,经RNAi沉默NlapoLp可显著影响褐飞虱的正常的取食、生长发育和繁殖。研究结果为深入探究载脂蛋白在昆虫致害水稻中的作用机制奠定了基础,并提供了害虫高效防控的关键靶标。

杭州悬铃木方翅网蝽的捕食性天敌种类及日本通草蛉幼虫捕食作用

本文调查发现杭州悬铃木方翅网蝽Corythuchaciliata(Say)的捕食性天敌有5科7种,主要是日本通草蛉Chrysoperla nipponensis(Okamoto)、普通草蛉Chrysoperla carnea(Stephens)和小花蝽属Oriusspp.。日本通草蛉幼虫对悬铃木方翅网蝽成虫、若虫的捕食功能反应均符合HollingII型方程,捕食作用强弱为:日本通草蛉3龄幼虫捕食若虫>日本通草蛉2龄幼虫捕食若虫>日本通草蛉3龄幼虫捕食成虫,其对应的搜寻效率α与处理时间Th值分别为1.0141、0.5687、0.3757和0.0075、0.0121、0.0267。成虫和若虫共存时,日本通草蛉3龄幼虫喜好捕食若虫。日本通草蛉幼虫的搜寻效应随猎物密度的增加而降低。在悬铃木方翅网蝽若虫密度相同的条件下,日本通草蛉2龄、3龄幼虫随着自身密度的增大,其平均捕食量逐渐减少,捕食作用率也相应降低,其捕食作用率E与自身密度P的关系分别为:E=0.3164P-0.4700和E=0.3411P-0.4762。日本通草蛉幼虫间存在分摊竞争。

热解碳界面层对碳\碳化硅复合材料拉伸性能的影响

本文研究了用化学气相渗工艺的均热法制备炭纤维增强碳化硅(C/SiC)复合材料,其中有部分材料在沉积碳化硅之前先沉积少量热解碳,以作为界面层.对有界面层和无界面层的材料进行了拉伸试验.用金相显微镜和扫描电镜观察了材料微观结构及断口形貌.结果表明,C/SiC材料力学性能主要取决于纤维与基体的界面.有热解碳界面层的C/SiC材料,在拉伸断裂时出现大范围脱粘,断口类似毛刷,材料强度大,断裂功也大.有很大的形变性;无界面层的材料表现为脆性平面断口,裂纹直接穿过纤维与基体向前扩展,材料强度小,断裂功也小.

C/C复合材料摩擦磨损特性的研究

在Ａｍｓｌｅｒ环块式磨损试验机上，进行了Ｃ／Ｃ复合材料与Ｃ／Ｃ复合材料、聚四氟乙烯（ＰＴＦＥ）及不锈钢（１Ｃｒ１８Ｎｉ９Ｔｉ）三对摩擦副的摩擦磨损试验。测定了在相同转速、载荷、磨损时间条件下，三对摩擦副的摩擦系数及磨损率。用扫描电子显微镜（ＳＥＭＭ）观察了三对摩擦副的磨损表面形貌。初步探讨了Ｃ／Ｃ复合材料的摩擦、磨损特性及机理，为Ｃ／Ｃ复合材料磨擦件制作提供了实验依据。

化学气相渗（CVI）碳化硅工艺研究

对均热法、热梯度法和压差－温度梯度法三种化学气相渗ＳｉＣ工艺进行了研究，结果表明：三种方法制备周期依次缩短。均热法适合制备形状复杂的样品，提高沉积效率靠增大沉积炉和多放样品来实现，整个过程受气体自由扩散所控制；热梯度法适合制备形状简单、规则的薄壁试样，每炉只能做一个，过程主要受样品内外温度梯度所控制，用该法可以制备出成分连续变化的功能梯度材料；压差－温度梯度法适合制备板状、圆筒状厚壁样品，过程受样品两侧的温度差和气体压力差所控制。三种方法各有优缺点。根据需要可灵活运用。

左归饮对D-半乳糖致亚急性衰老模型大鼠肝肾功能及其自由基代谢的影响

目的:研究滋阴补肾方左归饮对D-半乳糖致亚急性衰老模型大鼠肝肾功能及自由基代谢水平的影响,初步探索其抗衰老作用机制。方法:取健康SD大鼠72只,雌雄各半,随机分为六组,即对照组,模型组,维生素E组,左归饮高、低剂量组及六味地黄丸组。除对照组颈背部皮下注射生理盐水外,其余各组颈背部皮下分别连续注射D-半乳糖造成亚急性衰老模型。造模同时,各给药组分别灌胃给予维生素E、高、低剂量左归饮及六味地黄丸药液进行干预,对照组与模型组同时分别给予等体积的蒸馏水。连续给药8周后,腹主动脉采血,取大鼠肝、肾组织,测定血清中肝肾功能主要指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN),以及肝肾组织中超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)水平。结果:与模型组比较,左归饮给药组能够降低大鼠血清中ALT、AST、ALP、CREA及BUN的含量,提高大鼠肝、肾组织中SOD和T-AOC的活性,降低MDA的含量。结论:左归饮可能通过改善衰老大鼠的肝肾功能,影响肝肾自由基代谢水平而起到延缓衰老的作用。

化学气相渗C／SiC材料结构与性能的研究

采用碳布层叠然后用化学气相渗方法制备了Ｃ／ＳｉＣ复合材料。这种材料纤维与基体间的界面是决定材料力学行为的重要因素。带有热解碳作为界面层的Ｃ／ＳｉＣ材料，在断裂时表现出大范围的脱粘，纤维与周围的基体不是同时发生断裂，有大量的纤维拔出，断口类似毛刷。无界面层材料表现为脆性平面断口，裂纹直接通过纤维和基体向前扩展，没有发生脱粘。

灰飞虱唾液鞘形态及其蛋白质组分鉴定

灰飞虱是一种小型的刺吸式口器昆虫,是危害水稻的主要害虫之一。灰飞虱刺吸取食时分泌的胶状唾液可形成唾液鞘,保护口针并帮助取食,同时其中的蛋白质效应子在调控作物免疫中扮演重要角色。本研究利用扫描电子显微镜观察了灰飞虱唾液鞘的形态:多呈树枝状,表面为较为光滑的珠状结构。应用双层膜装置收集了若虫的唾液鞘,经液相色谱与串联质谱联用检测鉴定得到42种灰飞虱唾液鞘蛋白质,其中19种蛋白质检测到2个及以上的唯一肽段。进一步分析了编码这19种蛋白质的基因在各个组织中的表达模式,发现其中8个基因在唾液腺中明显高表达,推测其可能参与了唾液鞘的形成以及害虫-作物的互作。唾液鞘蛋白质组分鉴定为后续筛选和研究灰飞虱效应子功能提供了基础,有助于明确灰飞虱-水稻互作的分子机制,为开发害虫绿色防控新策略提供思路。

CNS/ATM网关集群网络管理系统的设计与实现

针对新航行系统(CNS/ATM)网关集群的网络管理问题,提出了一种基于SNMP的网络管理系统的实现方案,采用一种分布集中式的网络管理体系结构,描述了网管协议的设计,阐发了具体方案的实施.该系统大大提高了网络的运营效益.

Thermoplasma volcanium来源β-葡萄糖苷酶的酶学性质分析

β-葡萄糖苷酶(BGL)是催化纤维素产生葡萄糖过程中的关键酶,在生物能源利用和食品领域发挥重要作用.本研究克隆了来源于Thermoplasma volcanium的β-葡萄糖苷酶(BGL)基因,并在大肠杆菌中进行表达,经纯化获得了Tv-BGL.酶学性质分析发现,Tv-BGL在pH6.0和80℃时发挥最佳催化活力,以对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(pNPGlu)为底物时的K_(m)和V_(max)分别为0.7254 mmol/L和614.60 U/mg,K_(cat)/K_(m)=7.79×10^(5) mol^(-1)·L·s^(-1),以纤维二糖(Cellobiose)为底物时的K_(m)和V_(max)分别为55.63 mmol/L和636.06 U/mg,Kcat/Km=1.06×10^(4) mol^(-1)·L·s^(-1).另外,该酶具有较好的热稳定性,有机溶剂、离子以及葡萄糖耐受性.

人源RNA解旋酶DDX1的表达、纯化及结构性质研究

RNA解旋酶DEAD-box(DDX)蛋白家族是目前已知的最大解旋酶家族,可以解旋RNA或者解离蛋白RNA复合物;其中DDX1蛋白参与多种细胞功能,在mRNA/rRNA加工及衰减、病毒复制及转录、激素代谢以及肿瘤发生发展等各方面发挥着重要作用.但目前有关DDX1如何识别、结合和解旋RNA,如何在各种生理病理过程中发挥功能的分子基础仍然不清楚,其核心功能区的结构尚未解析.本研究成功地在大肠杆菌中重组表达和纯化了人源DDX1蛋白,获得了全长DDX1及多个不同长度截短体(或结构域)蛋白.结合动态光散射(DLS)分析发现DDX1的N端解旋酶ATP结合区结构稳定,状态均一;C末端结构域可能介导与其他蛋白相互作用,具动态变化并容易聚集.X光小角散射实验表明,溶液中DDX1全长蛋白为单体且构象均一.二级结构预测和三维结构模型构建表明DDX1具有经典的DEAD解旋酶家族特征.

人源锌指蛋白ZNF24及其锌指结构域的表达、纯化及DNA结合性质的研究

转录因子是调控基因表达的关键蛋白,能够以序列特异性方式结合DNA。ZNF24是Krüppel-like锌指转录因子家族成员之一,在细胞增殖和分化中起重要作用,能促进肝癌细胞的增殖,抑制神经元细胞的分化。ZNF24蛋白N端包含一个SCAN结构域,C端为锌指区,由4个串联的C2H2型锌指结构组成。ZNF24能特异性识别和结合基因的启动子,参与基因的表达调控,但其发挥功能的具体分子机制并不清楚。本文我们在大肠杆菌中成功表达了人源锌指蛋白ZNF24全长和其锌指结构域ZNF24(243~368),ZNF24全长蛋白在溶液中以三聚体形式存在,而锌指结构域在溶液中为单体,表明ZNF24蛋白N端的SCAN结构域能够促进全长蛋白的寡聚化。凝胶迁移实验验证ZNF24全长蛋白和锌指结构域与双链DNA底物结合能力,为进一步研究锌指蛋白ZNF24调控基因表达提供理论基础,相关结果表明SCAN结构域介导的蛋白寡聚可能代表了一种新的转录活性调节机制。

灰飞虱脂肪酶LsLPS的原核表达及Ni-NTA纯化

灰飞虱是危害中国水稻的3种主要稻飞虱之一。脂肪酶是脂肪代谢的关键酶,在昆虫发育、繁殖等生理活动中具有重要作用。为了深入研究脂肪酶(LsLPS)在灰飞虱生长发育中的功能,本研究克隆了LsLPS基因ORF序列,并进行了原核表达和His标签融合蛋白的纯化。结果显示,灰飞虱LsLPS开放阅读框长1293 bp,可翻译成430个氨基酸,含有信号肽序列和PF00151结构域。LsLPS连接到原核表达载体pET28a(+)-SUMO、pCold I后在表达菌株BL21(DE3)中主要以包涵体形式表达,连接到pET43.1a(+)后可在表达菌株BL21(DE3)中可溶性表达。采用pH 8.0、含20 mmol/L咪唑的磷酸缓冲液作为平衡液,Ni-NTA纯化LsLPS-pET43.1a(+)融合蛋白的纯度和产量相对较高。

左归饮对D-半乳糖致衰大鼠肝肾组织形态及其细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究左归饮对D-半乳糖致亚急性衰老模型大鼠肝、肾组织形态及其细胞凋亡相关蛋白表达的影响,初步探讨其延缓衰老作用机制。方法取健康SD大鼠72只,雌雄各半,随机分为6组,即对照组、模型组、给药组(维生素E组,左归饮高、低剂量组和六味地黄丸组)。除对照组颈背部皮下注射0.9%Na Cl溶液外,其余各组颈背部皮下分别连续注射D-半乳糖建立亚急性衰老模型。建模同时,各给药组大鼠分别灌胃给予维生素E、高剂量左归饮、低剂量左归饮及六味地黄丸药液进行干预,对照组与模型组分别给予等体积的蒸馏水。连续给药8周后,取大鼠肝、肾组织固定,利用HE染色法制作病理切片,进行显微观察;同时,采用免疫组化方法检测肝、肾组织中细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)阳性表达水平,统计比较IOD值。结果 (1)与对照组比较,模型组大鼠肝、肾组织病理性损伤明显;与模型组比较,左归饮能够减轻D-半乳糖致大鼠衰老过程中出现的肝、肾组织病理性损伤。(2)与对照组比较,模型组大鼠肝组织中Bax和Caspase-3的IOD值均显著升高(P<0.01),Bcl-2的IOD值显著降低(P<0.01);与模型组比较,左归饮高剂量组大鼠肝组织中Bax、Caspase-3的IOD值均显著降低(P<0.01),Bcl-2的IOD值显著升高(P<0.01)。左归饮低剂量组大鼠肝组织中Bax和Caspase-3的IOD值明显降低(P<0.05),Bcl-2的IOD值略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)与对照组比较,模型组的肾组织中Bax和Caspase-3的IOD值均显著升高(P<0.01),Bcl-2的IOD值显著降低(P<0.01);与模型组比较,左归饮高剂量组大鼠肾组织中Bax、Caspase-3的IOD值均明显降低(P<0.01),Bcl-2的IOD值明显升高(P<0.01)。左归饮低剂量组大鼠肾组织中Bax的IOD值明显降低(P<0.05),但Bcl-2及Caspase-3的IOD值差异无统计学意义(P>0.05)。结论左归饮对肝、肾组织具有一定的保护作用,其作用机制可能是通过与影响肝、肾组织中细胞凋亡相关蛋白表达有关。

一种超宽带高场强的生物电磁效应实验装置

对生物电磁效应相关实验工作的回顾表明,当前实验装置主要为窄频电磁辐射装置和脉冲电磁辐射装置,通用性不足。随着无线系统的发展,电磁环境频谱将横跨数千赫兹到毫米波,且为多频段复合电磁场,其中包含超宽带矢量调制的电磁场,有一些具有脉冲时隙特征,显然生物电磁效应实验需要模拟、复现这样的电磁环境,而传统的电磁辐射实验装置具有显著的局限性。为此提出基于超宽带同轴锥腔体的新实验装置方案,理论和实验测量都表明,新实验装置单一腔体就可以具备直流至40 GHz/67 GHz毫米波的超宽带电磁场生成能力,在相同的馈电功率条件下其激发的电场强度是天线的2倍以上,故而具备了超宽带、高场强两个特征,且可实现多频段复合电磁辐射,能够满足生物电磁效应实验中复杂电磁环境复现的需要。

家校携手助力小初有效衔接

小学阶段侧重培养学生的学习兴趣,注重素质教育,而初中阶段则偏重学生的学科成绩。小学毕业生现有的知识储备和心理预期不适应初中突然增加的学科数量和学习压力。中小学要加强合作,利用家校资源,根据学校实情,认真把脉,科学分析,加以正确引导,帮助学生缩短适应期,促进学生的学业发展,从而提高教育教学质量。

九种药剂防治悬铃木方翅网蝽的药效试验

选用9种药剂,对悬铃木方翅网蝽Corythucha ciliate(Say)进行室内毒力测定和室外药效试验。结果表明,1.2%苦参碱·烟碱EC2000倍液和2.5%联苯菊酯EC3000倍液在药后的29d内,对悬铃木方翅网蝽的防治效果均在95%以上,且不污染环境,正常施药后不产生药害,适合大面积推广应用。

温度对悬铃木方翅网蝽生长发育、存活和繁殖的影响

在室内研究不同温度下悬铃木方翅网蝽各虫态的发育历期、存活率及雌成虫的产卵量,组建不同温度下的实验种群生命表。结果显示,在15-33℃范围内,随温度升高悬铃木方翅网蝽的发育速率加快,并符合Logistic模型。悬铃木方翅网蝽卵、1龄、2龄、3龄、4龄、5龄若虫、产卵前期和全世代的发育起点温度分别为10.42、9.49、7.89、10.12、8.82、7.80、9.69和10.42℃,有效积温分别为153.9、38.8、41.4、31.8、42.0、69.5、101.9和479.3日.度。悬铃木方翅网蝽世代存活率和单雌产卵量在测定温度范围内均表现为先升高后降低的抛物线关系,在2 5℃时最高,分别为57.81%和87.71粒/雌。成虫寿命和雌成虫产卵期均随温度的升高而缩短。25℃时,种群内禀增长率和种群趋势指数最大,分别为0.0388和22.46。25~30℃是该虫生长发育的最适温区。

深海耐盐杆菌来源酯酶PE8的表达纯化、结晶和晶体X-ray衍射研究（英文）

从深海耐盐杆菌Pelagibacterium halotolerans B2T中分离鉴定的酯酶PE8隶属于酯酶第六家族.因具有耐盐、较高的热稳定性、高手性选择性,PE8是工业上高效生产手性药物前体(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯((R)-3-MFG)很有开发潜力的催化剂,但其分子催化机理并不清楚.PE8在大肠杆菌中体外表达,并通过镍柱亲和层析,以及凝胶过滤层析纯化,最终通过悬滴结晶方法获得了PE8蛋白晶体.晶体经过X-ray衍射分析获得1.66的分辨率,属于空间群P21,晶胞参数为a=41.772,b=73.398,c=66.403,β=102.37°.一个异构单元包含2个蛋白分子,溶剂(水)含量为35%.