靶向乙型肝炎病毒X区的siRNAs对HepG2.2.15细胞HBV复制的抑制作用

目的观察siRNA对HBV基因表达和复制的抑制情况。方法针对HBVX区设计并化学合成4条siRNAs,观察在不同浓度下对HepG2.2.15细胞HBV复制的抑制作用。结果 siRNA在30nmoL/L浓度时,4种siRNA对HepG2.2.15细胞HbsAg和HBeAg无明显的抑制作用(P>0.05);在60nmoL/L和90nmoL/L浓度下,siR-NA-1和siRNA-4有明显的抑制作用(P<0.05),他们对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为41%和43%;siRNA能降低HepG2.2.15细胞HBVDNA的拷贝数。结论化学合成的siRNAs可以有效地抑制HBV基因的表达和复制。

反复呼吸道感染患儿血清维生素A水平变化及其对Th1/Th2平衡的影响

目的分析反复呼吸道感染(RRTI)患儿血清维生素A水平变化及其对辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)平衡的影响。方法回顾性选取2017年9月至2019年6月期间在徐州市儿童医院接受治疗的108例RRTI患儿作为研究对象(RRTI组),另选取同期于本院进行体检的健康儿童100例作为健康对照组,采用高效液相色谱法测定两组血清维生素A(>0.3mg/L划分为正常组,≤0.3mg/L划分为不足组)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)、γ-干扰素(IFN-γ)及Th1/Th2细胞亚群比值;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析维生素A、Th1/Th2对RRTI患儿治疗后无效的预测价值。结果RRTI组血清维生素A水平低于健康对照组,差异有统计学意义(t=12.841,P<0.05);维生素A不足组Th1、Th1/Th2及IFN-γ水平均低于正常组(t值分别为13.653、30.010、53.329,P<0.05),Th2、IL-4及IL-6水平均高于正常组(t值分别为10.406、22.100、35.180,P<0.05);治疗无效组患儿血清维生素A水平和Th1/Th2均低于有效组,差异有统计学意义(t值分别为12.183、18.277,P<0.05);ROC曲线分析结果显示维生素A联合Th1/Th2预测RRTI患儿治疗后无效的曲线下面积为0.965,高于维生素A、Th1/Th2单独预测的0.722、0.862(Z=3.402,P<0.05)。结论RRTI患儿血清维生素A低于正常水平;与维生素A正常患儿相比,维生素A不足患儿的Th1/Th2、IFN-γ水平均较低,IL-4、IL-6水平较高;维生素A和Th1/Th2联合预测RRTI患儿疗效具有一定的价值。

传染性单核细胞增多症合并肺炎支原体感染患儿的临床特征及外周血T细胞亚群、炎症指标的变化

目的 探讨传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)合并肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)感染患儿的临床特征及外周血T细胞亚群、炎症指标的变化。方法 回顾性收集2019年3月至2022年12月徐州医科大学附属徐州儿童医院收治的185例IM患儿的临床资料纳入研究,将合并MP感染患儿为观察组(90例),诊断为单纯IM患儿为对照组(95例)。从患儿临床特征、外周血T细胞亚群、炎症指标等方面,对两组进行回顾性分析。结果 观察组咳嗽、肺部啰音比例高于对照组,差异有显著性(P<0.05);观察组呼吸系统受累及肝功能异常的发生率显著高于对照组,差异有显著性(P<0.05);观察组血清血小板计数、肝功能指标如ALT、AST及EB病毒拷贝数均高于对照组,差异有显著性(P<0.05);观察组外周血CD3+、CD8+水平高于对照组,而CD4+、CD4+/CD8+水平则显著低于对照组,差异有显著性(P<0.05);观察组血清白细胞介素-4、白细胞介素-6、白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α水平显著高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论 IM合并MP感染患儿呼吸系统受累、肝功能异常发生率显著升高,细胞免疫失衡,炎症反应强度大,其临床表现及实验室检查结果存在差异。

手足口病并病毒性脑炎100例诊治分析

自2008年5月份以来,我国部分地区的手足口病患儿剧增,并且发热的患儿并发脑炎几率越来越高,手足口病是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以柯萨奇A6（CoxA16）、肠道病毒71型（EV71）多见引起的急性传染病,多发生于学龄前儿童,主要症状表现为手、足、口腔等部位的斑丘疹、疱疹,少数病例可出现脑膜炎、脑炎,是危及生命的主要并发症。

小儿难治性肺炎支原体肺炎肺泡灌洗液SF、SP-A、SP-D变化及其对治疗效果预测价值

目的探讨小儿难治性肺炎支原体肺炎(MPP)肺泡灌洗液铁蛋白(SF)、肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)、肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)变化及其对治疗效果预测价值。方法选取2018年3月—2021年3月收治的小儿难治性MPP 119例,根据治疗5 d后临床效果将其分为有效组(95例)和无效组(24例)两组。比较两组基线资料及治疗前和治疗3 d后肺泡灌洗液SF和SP-A、SP-D,分析治疗3 d后肺泡灌洗液SF和SP-A、SP-D与小儿难治性MPP治疗效果相关性,探讨小儿难治性MPP治疗效果影响因素,分析治疗3 d后肺泡灌洗液SF、SP-A、SP-D及三者联合对小儿难治性MPP治疗效果预测价值。结果治疗3 d后,肺泡灌洗液SF和SP-A、SP-D两组均较治疗前降低,且有效组低于无效组(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,治疗3 d后肺泡灌洗液SF和SP-A、SP-D与小儿难治性MPP治疗效果呈负相关(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,肺泡灌洗液SF和SP-A、SP-D均是小儿难治性MPP治疗效果影响因素(P<0.01)。受试者工作特征曲线分析结果显示,治疗3 d后肺泡灌洗液SF和SP-A、SP-D三者联合对小儿难治性MPP治疗效果预测价值的曲线下面积最大。结论小儿难治性MPP经治疗后肺泡灌洗液SF和SP-A、SP-D均较治疗前降低,三者联合检测对治疗效果有一定预测价值。

儿童重症肺炎支原体肺炎支气管肺泡灌洗液中炎症细胞因子变化及临床意义分析

目的研究儿童重症肺炎支原体肺炎(SMPP)支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞因子变化及临床意义。方法选取66例SMPP患儿为SMPP组,另选同期66例非SMPP行支气管肺泡灌洗术的患儿为非SMPP组。采集BALF检测两组患儿BALF中支原体脱氧核糖核酸(MP-DNA)载量、炎症细胞因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)],SMPP组于急性期和恢复期各测1次。比较SMPP组患儿急性期和非SMPP组患儿BALF中炎症细胞因子水平;SMPP组不同病情、不同危重程度患儿急性期BALF中炎症细胞因子及MP-DNA,急性期与恢复期BALF中炎症细胞因子水平。分析SMPP组患儿急性期BALF中炎症细胞因子与MP-DNA的相关性。结果SMPP组患儿急性期BALF中IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-4/IFN-γ分别为(226.44±33.85)pg/ml、(262.89±24.31)pg/ml、(282.96±94.17)pg/ml、(88.71±20.36)pg/ml、(206.83±23.19)pg/ml、(1.37±0.34),均显著高于非SMPP组的(102.14±15.34)pg/ml、(88.64±11.96)pg/ml、(83.31±20.29)pg/ml、(34.59±4.36)pg/ml、(98.96±14.23)pg/ml、(0.84±0.29),差异具有统计学意义(P<0.05)。机械通气(MV)组患儿急性期BALF中MP-DNA载量、IL-1β、IL-6水平显著高于非MV组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组患儿急性期BALF中IL-2、IL-4、INF-γ及IL-4/IFN-γ比较差异无统计学意义(P>0.05)。随着病情程度的加重,SMPP患儿急性期BALF中IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-4/IFN-γ及MP-DNA载量呈显著升高趋势,非危重组、危重组、极危重组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。SMPP组患儿恢复期BALF中IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ和IL-4/IFN-γ分别为(136.09±31.48)pg/ml、(104.95±12.63)pg/ml、(144.03±34.96)pg/ml、(48.31±13.26)pg/ml、(125.05±20.14)pg/ml、(1.15±0.31),均明显低于急性期,差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示:SMPP组患儿急性期BALF中IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-4/IFN-γ均与MPDNA载量呈显著正相关性(r=0.513、0.402、0.336、0.509、0.502、0.324,P<0.05)。结论SMPP患儿急性期BALF中MP-DNA载量及炎症细胞因子均呈明显高表达,可作为评估病情严重程度的参考依据。

炎性复合体在儿童ITP治疗前后表达的变化

目的:通过检测炎性复合体NLRP3在儿童免疫性血小板减少症(ITP)治疗前后的变化,明确其在ITP治疗中的意义。方法:纳入20例于徐州市儿童医院确诊并治疗的ITP患儿为观察组,以10例健康体检儿童为对照组。通过实时荧光定量PCR测定NLRP3、ASC和Caspase-1的m RNA表达量,ELISA法检测外周血血清中白细胞介素-18、白细胞介素-1β和高迁移率蛋白B1的表达,Western blot方法检测NLRP3的表达。结果:初诊ITP患儿治疗后血清白细胞介素-18、白细胞介素-1β和高迁移率蛋白B1水平明显降低(P<0.05)。ITP患儿外周血单个核细胞中NLRP3、ASC和Caspase-1治疗后m RNA水平较治疗前明显降低(P<0.05)。治疗后NLRP3蛋白表达量明显降低。结论:NLRP3炎性复合体及下游炎症因子在初诊ITP患儿治疗有效后明显降低,可以作为治疗有效观察指标。

婴儿巨细胞病毒肝炎治疗前后血清IL-18及TNF-α水平变化及其意义

目的分析婴儿巨细胞病毒(CMV)肝炎治疗前后血清白介素-18(IL-18)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化及意义。方法选取CMV肝炎婴儿120例,测定血清学、尿液及B超指标。分析血清IL-18、TNF-α和肝功能指标的相关性。结果治疗有效组患儿治疗后的血清IL-18、TNF-α较治疗无效组显著降低(P<0.05)。CMV肝炎患儿治疗前血清IL-18和ALT、AKP呈正相关(P<0.05),TNF-α和ALT、AKP呈正相关(P<0.05)。结论血清IL-18、TNF-α水平对于CMV肝炎婴儿的肝功能损害程度具有一定的评价意义,同时可用于预测抗病毒疗效。

siRNA抗乙型肝炎病毒研究进展

现有的抗乙肝病毒药物如α-干扰素和核苷类似物药物,若长期应用会引起病毒变异,许多学者都在探索新的抗乙肝病毒途径。小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)的发现受到科学界的广泛重视,其介导的序列特异性基因沉默可有效抑制内源性、外源性基因的表达[1]。目前,应用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)治疗肿瘤、艾滋病和肝炎等方面已经取得了重大进展。

手足口病合并病毒性脑炎患儿的干预路径研究

目的通过分析徐州某儿童医院手足口病合并病毒性脑炎患儿的病例资料,探讨手足口病合并病毒性脑炎患儿的干预路径。方法将2018年2月—2020年8月该院收治的78例手足口病合并病毒性脑炎患儿随机分组,对照组实施常规干预,研究组构建并应用医护患一体化干预路径。采用SPSS 26.0软件进行统计学分析,组间比较采用独立样本t检验,检验患儿体温恢复正常、手足口部位疱疹消退时间和格拉斯哥昏迷量表(glasgow coma scale,GCS)评分;组内比较采用配对t检验;采用检验两组口腔溃疡发生率,入院7d脑脊液复查正常率。结果研究组和对照组体温恢复正常时间和手足口部位疱疹消退时间,差异有统计学意义(t=20.715、8.420、9.702、9.241,P<0.05);两组口腔溃疡发生率、入院7d脑脊液复查正常率、家属总满意率,差异有统计学意义(χ^(2)=4.266、5.571、5.014,P<0.05);两组干预后GCS评分均升高,差异有统计学意义(t=50.382、40.394,P<0.05);干预后研究组和对照组GCS评分差异有统计学意义(t=22.614,P<0.05)。结论对手足口病合并病毒性脑炎患儿应用医护患一体化干预路径效果好。

基于小干扰 RNA 构建的长发夹 RNA 表达载体对 HBV 基因复制和表达的抑制作用

目的：研究靶向HBV X（ HBx）基因的长发夹RNA （ lhRNA）表达载体对HBV基因复制和表达的影响。方法以HBx为靶点，合成四条小干扰RNA（ siRNA）寡核苷酸并构建lhRNA表达载体。 siRNA寡核苷酸序列（4个转染组）或长发夹 RNA （ lhRNA ）表达载体（2个转染组）转染HepG2．2．15细胞后，通过时间分辨免疫荧光法、荧光定量PCR及反转录PCR分别检测细胞培养上清液中的乙型肝炎病毒表面抗原（ HBsAg）、HBV DNA及细胞内的HBx mRNA水平。以转染阴性序列或空载体为阴性对照组。采用独立样本t检验评估siRNA对HBV基因复制和表达的抑制效果。结果与阴性对照组相比， siRNA-1及 siRNA-4组以较高浓度（60 nmol／L 或90 nmol／L ）转染入HepG2．2．15细胞后，培养上清液中的HBsAg、HBV DNA及HBx mRNA水平均显著降低（P＜0．05），其中，siRNA-1组在转染后不同时间点（24，48，72 h）细胞培养上清液中的HBsAg和HBV DNA载量均较对照组显著降低（ P＜0．05或P＜0．01）。构建成功两个lhRNA表达载体：pMD-HBxlh1和pMD-HBxlh4，其转染入细胞后，培养上清液中的 HBsAg 及 HBV DNA 水平显著低于阴性对照组（ P ＜0.05）。结论新证实一个HBx基因的有效干扰靶点即 siRNA-1。靶向HBx的lhRNA 表达载体pMD-HBxlh1和pMD-HBxlh4可有效抑制HBV基因的复制和表达。

确诊朗格汉斯细胞组织细胞增生症一例及文献复习

朗格汉斯细胞组织细胞增生症（Langerhans cell histiocytosis，LCH）是一组以朗格汉斯组织细胞（Langerhans cell，LC）异常增生为特点的疾病，为一组病因不明，临床表现多样，多发于小儿的疾病。由于临床表现多样，复杂且不典型，易误诊和漏诊，现对本科近期收治的1例LCH病例的临床资料进行总结，并结合文献探讨LCH的临床特点、诊断及治疗等，现报道如下。

2015年徐州市及周边地区手足口病流行特征及病原学分析

目的分析手足口病(HFMD)住院患儿病原体类型及流行特征,为手足口病防治提供参考依据。方法收集2015年度徐州市儿童医院手足口病住院患儿的临床资料,分析患儿人口学特征、发病特点、临床表现,并进行问卷调查。采集患儿粪便标本,提取病毒RNA后采用荧光定量PCR法对样本进行肠道病毒71(EV71)型、柯萨奇病毒A16(CoxA16)型病原学检测。结果 2015年度本院共收治手足口病患儿2 792例,其中男1 842例,女950例;重症10例,死亡3例;年龄72 d～11岁。3～7月份为手足口病高发期,入组患者共发病1 738例(62.24%),4月达到顶峰,发病425例(15.22%)。发病人群集中在1～3岁幼儿(1 471例、52.68%),且以散童及幼托为主,其中留守儿童占29.98%(837/2 792),二次感染患儿占19.99%(558/2 792)。患儿近3个月患呼吸道或消化道疾病,营养状态差以及家长文化程度相对低的患儿在本院手足口病人群中所占比例较高,分别为39.68%(1 108/2792)、59.81%(1 670/2 792)和64.97%(1 814/2 792)。病原学检测显示:EV71阳性率为56.23%(1 570/2 792),CoxA16阳性率为13.83%(386/2 792),其他肠道病毒阳性率为30.59%(854/2 792)。收集HFMD合并病毒性脑炎患儿家长大便标本共102例,病原学检测显示其中44例(43.14%)EV71阳性。结论 2015年徐州市及周边地区手足口病患儿仍较多,并以EV71感染为主;留守儿童及二次感染患儿中重症患者比例较高且病情更重;成人隐性感染可能成为另一种重要的传染源。

徐州地区2015~2016年手足口病流行病学特征分析

目的回顾2015年1月~12月徐州地区儿童手足口病(HFMD)的临床流行病学特征。方法利用统计学方法对2792例收治入院手足口病例进行流行病学资料分析。结果在徐州地区,儿童HFMD发病年龄以3岁以下为主,男性多于女性,散居病例多于群居病例,乡村地区多发,疾病多发季节为3~7月份。普通型病例大多症状轻微,预后良好,超过半数病例并发病毒性脑炎,经积极处理后预后亦较好;重症病例10例,占总病例数0.36%,可并发严重并发症,如神经源性肺水肿,肺出血等,需积极处理以降低死亡率。结论在徐州地区,HFMD发病具有明显易感人群及流行季节,在疾病流行季节对易感人群进行积极干预,争取早诊断、早治疗,以期获得良好预后。