青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌对小鼠急性实验性结肠炎的治疗作用

目的通过建立葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的急性期溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型,探讨青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌诱导UC缓解的作用。方法 6～8周龄雌性BABL/c小鼠50只,体质量(20.0±2.0)g,随机分为5组:正常对照组(N-7组)、嗜酸乳杆菌(L-7组)、青春双歧杆菌组(B-7组)、柳氮磺胺吡啶(SASP)组(S-7组)和生理盐水对照组(NS-7组),每组10只。除正常对照组外,采用自由饮用2.5%DSS(分子量3.6万～5万)7天建立小鼠UC模型,且从实验第1天开始,给予青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌(2×108 CFU/10 g)和SASP(15 mg/10 g)灌肠治疗7天,观察小鼠一般情况、粪便隐血,计算疾病活动指数(DAI);实验结束时处死动物,测量全段结肠长度,行组织病理学检查并进行组织学评分。结果青春双歧杆菌、嗜酸乳酸杆均能诱导实验性结肠炎的缓解,其DAI积分、病理组织学评分均低于对照组(P<0.05);嗜酸乳酸杆的保护作用强于青春双歧杆菌和SASP。结论青春双歧杆菌和嗜酸乳酸杆菌能有效地减轻急性期UC炎症,且嗜酸乳酸杆菌更有利于诱导急性期UC的缓解。

嗜酸乳杆菌胞壁粗提物及DNA对溃疡性结肠炎小鼠模型的作用

目的:观察嗜酸乳杆菌BCW和DNA对实验性结肠炎的治疗作用.方法:40只♀BABLc小鼠随机分为正常组、嗜酸乳杆菌BCW组、嗜酸乳杆菌DNA组和生理盐水组,除正常组小鼠外,其余各组自由饮用1.5%DSS7d建立小鼠结肠炎模型,从实验第1天开始,给予嗜酸乳杆菌BCW(20μg10g)、嗜酸乳杆菌DNA(0.2μg10g)和生理盐水(0.2mL10g)灌肠7d,观察小鼠每天的体质量变化粪便性状和粪便隐血情况;实验结束时处死动物,观察结肠大体观,测量全段结肠长度并称其质量;HE染色观测结肠炎症情况,评价嗜酸乳杆菌BCW和DNA对小鼠急性结肠炎的影响.结果:饮用DSS小鼠体质量逐渐下降,DAI积分增高,结肠黏膜出现糜烂或溃疡,腺体破坏,大量炎性细胞浸润.与生理盐水组比较,嗜酸乳杆菌BCW和DNA能减缓小鼠体质量的下降(2.94g±0.78g,3.37g±1.08gvs6.96g±1.39g,P<0.05),降低小鼠DAI积分(4.27±0.41,4.62±0.56vs6.85±0.94,P<0.05),在组织学方面能阻止DSS导致的结肠缩短(8.62cm±1.31cm,8.15cm±0.97cmvs6.63cm±1.38cm,P<0.05)及肠质量指数的增加(1.63%±0.27%,1.68%±0.29%vs2.12%±0.22%,P<0.05),减轻黏膜损伤,恢复腺体及绒毛的排列,减轻炎性细胞的浸润.结论:嗜酸乳杆菌BCW和DNA能有效地缓解小鼠急性结肠炎炎症,减轻组织损伤.

青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌对实验性结肠炎恢复期的治疗作用

目的通过建立DSS诱导的恢复期UC小鼠模型,探讨青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌维持UC缓解的作用。方法 6～8周龄雌性BABL/c小鼠50只,体重(20.0±2.0)g,随机分为5组:正常对照组、嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌组、柳氮磺胺吡啶组和生理盐水对照组,每组10只。除正常对照组外,采用自由饮用2.5%DSS(相对分子质量3.6万～5万)7d建立小鼠UC模型,并从实验第1d开始,给予青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌(浓度均为2×108CFU/10g)和SASP(15mg/10g)灌肠治疗17d,观察小鼠一般情况、粪便隐血,计算疾病活动指数(DAI);实验结束时处死动物,测量全段结肠长度、行组织病理学检查并进行组织学评分。结果青春双歧杆菌、嗜酸乳酸杆均能维持实验性结肠炎的缓解,从第10d开始其DAI积分均明显小于生理盐水对照组(P<0.05);而且青春双歧杆菌有利于体重恢复,在第11d开始体重迅速增加;嗜酸乳酸杆菌在组织学改善方面效果更显著。结论青春双歧杆菌和嗜酸乳酸杆菌能有效地维持实验性结肠炎的缓解,而且两者的作用有所差别。

肠道青春双歧杆菌体外传代稳定性研究

目的考察肠道青春双歧杆菌的传代稳定性。方法从生长特性、形态学、生化特点、代谢物成分以及核酸组成观察双歧杆菌在传代过程中的变化。结果双歧杆菌在传代10代其生长特性、生化特点、代谢物组成以及遗传特点无明显改变。结论青春双歧杆菌在传代10代以内能安全用于生产目的。

TNF-α为中心的肝细胞凋亡与LPS所致小鼠肝损伤的关系

【目的】探讨TNF-α为中心的肝细胞凋亡途径在脂多糖(LPS)所致小鼠肝损伤中的地位。【方法】小鼠腹腔注射LPS后不同时间点分离血浆检测谷丙转氨酶(ALT)活性,取肝脏组织切片,HE染色观察病理改变,末端脱氧核糖核酸转移酶地高辛标记方法检测肝细胞凋亡,免疫组化检测肝组织TNF-α表达。【结果】腹腔注射LPS后3 h血浆ALT活性明显升高,肝细胞凋亡率明显增加,TNF-α阳性数明显增多;6 h血浆ALT活性、肝细胞凋亡率、TNF-α阳性数达到高峰;12 h血浆ALT活性明显回落,肝细胞凋亡率、TNF-α阳性数显著减小;24h、30 h血浆ALT活性、肝细胞凋亡率基本恢复到对照组水平,肝组织TNF-α阳性数达到较低水平。【结论】小鼠腹腔注射LPS后,先天免疫系统可能在早期启动TNF-α为中心的肝细胞凋亡,引起肝损伤。

二联活菌洁阴剂对家兔实验性念珠菌性和淋病性阴道炎的疗效

目的:观察二联活菌洁阴制剂对家兔实验性念珠菌性阴道炎和淋病性阴道炎的疗效。方法:用致病菌直接注入新西兰大白兔阴道内制成相应的阴道炎模型。每种模型随机分5组:模型组(给予生理氯化钠溶液)、高、中、低三个剂量的二联活菌洁阴制剂治疗组(剂量分别为7×10~5,7×10~4,7×10~3CFU·mL^(-1))和阳性对照组(念珠菌阴道炎模型中选用14mg·kg^(-1)氟康唑做对照,淋病性阴道炎模型中选用140mg·kg^1)大观霉素做对照),每组6只,治疗7d。治疗d8取阴道拭子涂片,Gram’s染色镜检,检查阴道洁度;选择性培养基培养进行细菌学检测;分别处死大白兔,取阴道组织HE染色行病理学检查。结果:二联活菌中、高剂量组对家兔实验性念珠菌性阴道炎和淋病性阴道炎的治愈率均为83%,与氟康唑和大观霉素组相近(100%)。与模型组比较,二联活菌中、高剂量组和阳性对照组均可明显抑制念珠菌和淋球菌的生长;与阳性对照组比较,二联活菌中、高剂量组还显著增加阴道益生菌(厌氧菌)。结论:二联活菌制剂对家兔实验性念珠菌性和淋病性阴道炎有确切的疗效,而且可重建阴道内正常菌群微环境。

嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌治疗实验性结肠炎小鼠的作用及其机制

目的评价青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌对实验性结肠炎小鼠模型的治疗效果并初步探讨其机制。方法75只BABL／C小鼠均分为5组并给予相应处理，其中4组为实验组，分别为：青春双歧杆菌BF0624治疗组（B组）、嗜酸乳杆菌LT0637治疗组（L组）、水杨酸柳氮磺胺吡啶治疗组（S组）、0．9％氯化钠对照组（NS组）；另设正常对照组（N组）。实验组小鼠用4％葡聚糖硫酸钠造模，N组则饮用0．9％氯化钠溶液。实验期间每天记录动物体重、大便隐血情况，计算疾病活动指数（DAI）。在第4、6、8天各组各处死5只小鼠，分离结肠，测量其长度，行病理组织学检查，逆转录PCR和Western印迹法分别测定热休克蛋白（HSP）70、糖皮质激素受体（GR）、白细胞介素（IL）-10和肿瘤坏死因子（TNF）-α的基因和蛋白表达。结果青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637能缓解实验性结肠炎小鼠的肠道炎性反应，第3天时L组小鼠DAI积分（1．8±0.4）低于NS组（2．8±1.0），从第5天开始各治疗组DAI均明显降低。B组、L组、S组第8天时结肠长度分别为（9．0±0.6）、（9.3±0.6）、（8，8±1．1）cm，均大于NS组[（8．1±0.6）cm，P值均〈0．053。第8天时L组小鼠结肠黏膜病理组织学明显改善（组织学评分6.0±1．0）。B组和L组IL-10和HSP70表达上调，TNF-α表达下调，GR无变化。结论青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637均对溃疡性结肠炎有治疗作用，益生菌的治疗机制可能与上调HSP70和IL-10以及下调TNF-α的表达有关。

嗜酸乳杆菌胞壁粗提物及DNA对实验性结肠炎结肠上皮NF-κB表达的影响

目的:研究嗜酸乳杆菌BCW和DNA对溃疡性结肠炎小鼠结肠粘膜上皮NF-κB表达的影响。方法:雌性BABL/c小鼠40只随机分为正常组、嗜酸乳杆菌BCW组、嗜酸乳杆菌DNA组和生理盐水对照组,除正常组小鼠外,其余各组自由饮用1.5%DSS7天建立小鼠结肠炎模型,随即给予嗜酸乳杆菌BCW(20ug/10g)、嗜酸乳杆菌DNA(0.2ug/10g)和生理盐水灌肠7天,每天观察小鼠情况,实验结束时处死小鼠,去结肠组织行HE染色观测结肠炎症情况,并行结肠上皮NF-κB免疫组化。结果:饮用DSS小鼠DAI积分显著增高,结肠组织粘膜破坏、炎症细胞浸润,结肠上皮NF-κB表达增加(9.15±0.43),嗜酸乳杆菌BCW和DNA能降低小鼠DAI积分,减轻粘膜损伤,降低结肠上皮NF-κB的表达(4.67±0.56/6.03±0.60)。结论:嗜酸乳杆菌BCW和DNA能缓解急性溃疡性结肠炎,降低结肠上皮NF-κB的表达。

青春双歧杆菌和嗜酸乳酸杆菌对急性期和恢复期结肠炎小鼠Th1／Th2亚群的影响

目的分析急性期和恢复期实验性结肠炎小鼠外周血Th1／Th2亚群比例以及青春双歧杆菌和嗜酸乳酸杆菌对其影响。方法40只BABL／c小鼠自由饮用7dDSS造成急性实验性结肠炎小鼠模型，随机分为4组：阴性对照组（NS）、阳性对照组（SASP）、青春双歧杆菌组（BF0624）、嗜酸乳杆菌组（LT0637），10只／组，以及正常对照组（N）10只（未造模）。一部分在实验第8天处死采血；另一部分继续正常饮水10d，在实验第18天处死采血；分离淋巴细胞，用流式细胞术三色法测定Th1／Th2亚群比例。结果正常小鼠外周血Th1／Th2比例在0．84—0．96之间，而DSS诱导的急性结肠炎小鼠Th1／Th2比例增加，Ns组达到2．21±0．83，在恢复期同样处于较高的水平；青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌能逐渐降低实验性UC小鼠的Th1／Th2比例，特别是嗜酸乳杆菌在恢复期可以使比例达到接近正常小鼠水平。结论DSS诱导的急性期和恢复期结肠炎小鼠外周血Th1／Th2比例较正常小鼠增加，青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌能降低Th1／Th2比例，嗜酸乳酸杆菌效果更优。

四株双歧杆菌对高脂饮食大鼠肥胖形成的影响

本研究选用正常人体肠道筛选出的不同双歧杆菌株干预高脂饮食肥胖大鼠模型，为筛选双歧杆菌属中具有较好降脂、减肥效果的菌株提供理论和实验依据。

诊断学精品资源共享课的建设与实施

近几年,教育部开展了国家精品资源共享课建设工作,中南大学湘雅医院申报的本科生课程"诊断学"获得第四批国家精品课程共享课的立项资助。笔者介绍湘雅医院诊断学课程建设实施的方法及其国家精品课程共享课具体申报内容,重点介绍诊断学的课程特点、教学团队及基本资源。成功的申报在于长期的教学支持、优秀的团队协作精神、注重整体和细节、注重知识产权的保护。

诊断学教学中不同情境下的问诊训练要点

问诊是病史采集的主要手段，教学时不应局限于内科住院患者，需要对学生进行多情境的问诊训练。门诊问诊训练时，需要设计好问诊场景及时间限制，主要为重点病史采集，同时训练病历书写；急诊问诊训练时，可介绍些常用问诊准则，如SAMPLE准则；还可针对老年人群、儿童、外科患者、海洛因依赖患者等不同人群介绍问诊的侧重点。通过理论教学和见习相结合，理论授课中穿插小组讨论和角色扮演，见习中设计多情景教学，加强标准化病人的应用，合理规划课堂学时、内容分配并及时反馈。以获得最优教学效果。