鸭短喙-侏儒综合征及其病原的初步研究

2014年11月以来,我国部分地区所饲养的肉鸭发生了以雏鸭发育迟缓,上下喙萎缩,舌头外伸为特征的疾病。根据病变,暂将该病称为鸭短喙-侏儒综合征。为确定引起该病的病原,本研究从山东聊城发病鸭群采集14份病料样品,其中包括舌及各脏器组织样品。经PCR方法检测,所有发病鸭肝脏、脾脏中均可检出细小病毒,将其中5份阳性病料样品处理后接种9日龄鸭胚,分离得到1株鸭源细小病毒分离株(命名为SD株)。此外,该分离株的659 bp的Rep和VP1核苷酸序列与鹅细小病毒和番鸭细小病毒进行遗传进化分析,结果表明SD株与鹅细小病毒具有相近的遗传进化关系。将该分离株人工感染1日龄樱桃谷肉鸭,可以复制出相似病例。结果表明,从鸭短喙-侏儒综合征自然病例分离到的一株鸭源鹅细小病毒,该病毒可能与鸭短喙-侏儒综合征有关。

禽腺病毒4型PCR检测方法的建立与应用

根据禽腺病毒4型(FAdV-4)Hexon基因核苷酸序列,设计用于扩增FAdV-4的PCR引物,建立了FAdV-4 PCR检测方法。特异性和敏感性实验结果表明,该方法可扩增出954 bp的特异性核酸片段,而对禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒与禽腺病毒11型的检测结果均为阴性,对FAdV-4的最低核酸检出量为12.9 pg。该方法可用于禽腺病毒4型的临床检测与流行病学调查。

新型鸭细小病毒VP3基因克隆与原核表达

应用PCR方法扩增新型鸭细小病毒(NDPV)VP3基因,将其克隆至原核表达载体pQE1中,获得重组质粒pQE1-VP3。重组质粒pQE1-VP3经优化诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析并利用His标签抗体对表达的蛋白进行Western blot鉴定。结果表明,NDPV VP3蛋白在25℃、IPTG浓度为1.0mmol/L经诱导5h,可获得最大诱导表达量,表达蛋白的分子质量约为60ku,主要以不溶性包涵体形式存在。纯化复性后,可获得浓度为5.165 mg/mL及纯度为97%的VP3蛋白。获得的重组菌pQE1-VP3以及高纯度的VP3蛋白,为进一步研究NDPV检测方法和新型疫苗奠定了基础。

鸡心包积液-肝炎综合征研究初报

2015年6月以来，我国河南、山东、河北、辽宁、安徽、吉林等部分地区，鸡群发生了不明原因的以心包积液、肝脏肿大为特征的疾病，根据病变，暂将该病称为鸡心包积液一肝炎综合征。该病主要发生于20～30日龄的肉鸡，包括817、肉杂等，发病后4～8天为死亡高峰，病程8～15天，死亡率达20～30％。同时蛋鸡20～70日龄以及200～300日龄也有发生．但死亡率低于肉鸡。目前，该病的发病区域不断扩大，给我国养鸡业造成了巨大的经济损失。

鸭短喙——侏儒综合征研究初报

本文通过病原分离鉴定及动物回归实验,确定了鸭短喙-侏儒综合征病原为鸭细小病毒。

猪细小病毒重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立

试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的重组酶聚合酶(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法,为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPVVP2基因的保守序列,设计合成1对RPA引物探针,通过对反应时间的优化,建立38℃恒温水浴锅检测PPV的RPA方法。结果表明,所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应30min,能够特异性的检测PPV;以重组质粒pPPV-VP2作为模板,RPA的检测限为102拷贝,同本研究中应用的实时荧光定量PCR方法检测限一致,比普通PCR方法高100倍;RPA方法对疑似PPV感染临床样品的阳性检出率为82.6%,略低于实时荧光定量PCR的检出率(86.9%),明显高于普通PCR的阳性检出率(66.7%)。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速,结果确实可靠,适用于PPV的快速检测。

禽腺病毒4型hexon基因克隆与原核表达分析

应用PCR方法扩增禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAd V-4) Hexon基因,将其克隆至原核表达载体p QE1中,获得重组质粒p QE1-hexon。将重组质粒经诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析。结果,Hexon蛋白在25℃经诱导4 h、IPTG浓度为0. 8 mmol/L时可获得最大诱导表达量,表达蛋白的相对分子质量约为107 k D,主要以不溶性包涵体形式存在。纯化复性后,可得到浓度为5. 165 mg/m L及纯度为97%的Hexon蛋白。本研究获得的重组菌p QE1-hexon以及高纯度的Hexon蛋白,为进一步研究FAd V-4检测方法和新型疫苗奠定了基础。

猪皮炎肾病综合征的诊治与防控措施

猪皮炎肾病综合征(porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)是一种常见的猪传染病。该病以猪只皮肤表面出现病变(红斑、丘疹、结痂或者坏死点)和肾脏严重肿大为主要特征。病猪生长缓慢,免疫功能受到抑制,易继发其他疾病,给养猪业造成严重的损失与危害。笔者主要针对猪皮炎肾病综合征的流行病学、临床症状、病理剖检、诊断和防治措施等方面进行概述,以为该病的诊治和防控提供参考。

仔猪白痢病原菌的分离鉴定与敏感药物筛选

仔猪白痢是是由致病性溶血性大肠杆菌引起的1周龄以内初生仔猪的一种急性、高度致死性疾病。仔猪白痢潜伏期短、发病率高,尤其黄痢的死亡率高,给畜牧业造成重大损失。仔猪白痢多见于10-20日龄的仔猪,发病率较高,但致死率较低,病原亦为大肠杆菌,以腹泻、排出腥臭白色水样粪便为特征。本文进行了病原分离及药物敏感试验,

鸡心包积液-肝炎综合征的初步研究

2015年6月以来,我国部分地区所饲养的肉鸡与蛋鸡发生一种疾病,以心包积液、肝炎为特点,根据病变,暂将该病称为鸡心包积液-肝炎综合征。从不同地方的发病鸡群采集20份病料,发病鸡均能检出禽腺病毒。将阳性病料接种9日龄SPF鸡胚,获得1株禽腺病毒分离株SDSX1。对SDSX1株的hexon基因序列进行的分析表明,SDSX1株与禽腺病毒4型具有相近的遗传进化关系;用其感染1日龄SPF鸡,可复制出心包积液、肝炎的病变。上述结果表明,从鸡心包积液-肝炎自然病例分离到的一种禽腺病毒与鸡心包积液-肝炎综合征有关。

禽腺病毒4型感染病理组织学观察

将30只1日龄SPF鸡随机分为2组,其中攻毒组20只,对照组10只。攻毒组按每只0.2mL腹腔注射禽腺病毒4型(FAV-4)病毒液,对照组不做处理,隔离饲养,临床观察2周。攻毒后第3天攻毒组开始出现死亡,将死亡鸡解剖观察各器官大体病变,经聚合酶链式反应(PCR)检测为FAV-4后,采集心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏制作石蜡切片,观察病理组织学变化。结果显示,攻毒组死亡鸡只无明显临床症状而突然倒地死亡;主要剖检病变为心包积液、肝脏肿大,个别可出现脾脏肿大、肺脏淤血、肾脏肿大;病理组织学变化为肝脏、肺脏、肾脏淤血,细胞变性坏死;而对照组无任何异常症状和病理组织学变化。