MiR-126抑制肝癌细胞增殖的实验研究

目的:研究miR-126对肝癌细胞增殖能力及成瘤能力的影响,探索其影响肝癌细胞增殖的分子基因。方法:在肝癌细胞系中过表达和下调miR-126,通过细胞计数实验、MTT实验和异种移植瘤模型检测肝癌细胞的体外增殖能力和成瘤能力;利用miRNA靶基因预测数据库结合双荧光素酶报告技术获得miR-126的下游靶基因Sirt1,Western blot检测过表达和下调miR-126后,肝癌细胞中靶基因的表达。结果:过表达/干扰miR-126显著抑制/促进了肝癌细胞的增殖能力和成瘤能力(P<0.05)。双荧光素酶报告系统实验证实:MiR-126过表达/干扰后,下游靶基因Sirt1的3'UTR区活性显著降低/增加(P<0.05)。MiR-126过表达的肝癌细胞中,Sirt1的表达显著降低,反之,miR-126干扰的肝癌细胞中,Sirt1的表达显著增加。结论:MiR-126能够抑制肝癌细胞的增殖能力和成瘤能力,可能作为抑癌性microRNA分子在肝癌中发挥作用。

临床肿瘤学教学中引入医学人类学观点的思考

目前我国肿瘤学教学模式与发达国家之间存在较大差距,缺乏完善的人文素质教育体系,难以培养出肿瘤学领域的高素质人才。探讨肿瘤学教学中缺乏医学人类学观点的问题,提出通过改进人文课程的设置,将医学人类学观点引入肿瘤学理论教学阶段之中,并提出在肿瘤学临床实践中各个方面践行医学人类学观点的方法,以改善传统的肿瘤学教学模式,提升肿瘤临床实践效果。

缺氧诱导肝癌细胞获得干细胞特性的初步实验研究

目的:观察缺氧对肝癌干细胞特性的影响。方法:用肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721建立细胞缺氧培养模型,利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;克隆形成实验检测肿瘤细胞克隆形成能力;"肿瘤球"形成实验检测肿瘤细胞自我更新能力;实时定量RT-PCR和Western blot检测干细胞相关基因Oct-4、Sox-2、Nanog mRNA和蛋白表达;采用流式细胞术检测干细胞表面标志物CD133表达。结果:缺氧条件下HepG2、SMMC-7721细胞克隆形成率显著高于常氧组(P<0.05)。缺氧条件下HepG2、SMMC-7721细胞肿瘤球形成率显著高于常氧组(P<0.05)。常氧条件下HepG2、SMMC-7721细胞中干细胞相关基因Oct-4、Sox-2、Nanog mRNA及蛋白表达水平极低,缺氧处理48 h后,其mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。缺氧条件下HepG2、SMMC-7721细胞CD133阳性表达率表达量显著增加(P<0.05)。在缺氧36 h和48 h,CD133蛋白表达水平显著增强(P<0.05)。结论:缺氧能诱导肝癌细胞干细胞特性的获得。

人参皂苷Rg3联合奥沙利铂对肝癌Hep3B细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨人参皂苷Rg3(GS-Rg3)、奥沙利铂(L-OHP)单药及联合作用对肝癌Hep3B细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法培养Hep3B细胞株,采用不同浓度GS-Rg3(12.5、25.0、50.0、100.0μmol/L)(G组)、LOHP(1.25、2.50、5.00、10.00 mg/L)(O组)单药及联合应用(L组)进行干预,并设空白对照组(C组),MTt法观察各组对Hep3B细胞株生长的抑制作用;采用流式细胞仪检测上述药物单独或联合应用对Hep3B细胞株凋亡率的影响。结果GS-Rg3、L-OHP单药及联合采用对Hep3B细胞株的抑制作用均呈明显的时间与浓度依赖关系,O组较G组抑制率高,且与O组、G组比较,L组抑制率更高(P<0.05)。与C组比较,G组、O组、L组细胞凋亡率均增高(P<0.05),O组高于G组,且C组均高于O组、G组(P<0.05)。与GS-Rg3组比较,L-OHP组对Hep3B细胞株的抑制率及诱导凋亡率均较高(P<0.05)。结论 GS-Rg3、L-OHP能够抑制肝癌Hep3B细胞株增殖并诱导凋亡,两药联合有协同作用,且西药L-OHP抗增殖效应和诱导凋亡作用,均比中药GS-Rg3强。

缺氧诱导肝癌细胞EMT转化及耐药的初步实验研究

【目的】观察缺氧对肝癌细胞侵袭转移能力的影响,并进一步探讨缺氧环境下肝癌细胞耐药机制。【方法】利用HepG2、SMMC-7721细胞建立肝癌细胞缺氧模型,利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;Transwell迁移与侵袭实验检测肿瘤细胞体外侵袭转移能力;MTT法检测肿瘤细胞活性;Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vinmentin、N-cadherin和肿瘤耐药基因ABCG2的表达;采用流式细胞术检测凋亡和细胞周期变化。【结果】缺氧培养48 h后的肝癌细胞从上皮细胞样表型转化为间质细胞样表型;缺氧条件下肝癌细胞E-cadherin表达显著下降,Vimentin和N-cadherin表达显著升高（P〈0.05）。同时,缺氧条件下肝癌细胞迁移和侵袭能力显著增强（P〈0.05）。缺氧可导致HepG2、SMMC-7721停滞于静止期（G0/G1）的细胞数显著增多,缺氧条件下肝癌细胞对cisplatin耐药性显著增加（P〈0.05）; 缺氧条件下ABCG2蛋白表达增加（P〈0.05）。【结论】缺氧能诱导肝癌细胞EMT转化而致侵袭转移,同时可导致对cisplatin耐药。

DEN和NMOR联合诱导F344大鼠肝癌形成过程中SERPINB5的表达变化

目的观察化学法诱导F344大鼠肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)形成过程中肝组织内SERPINB5蛋白的表达变化,探讨其与HCC发生、发展的关系,为肝癌早期诊断和治疗提供新的思路。方法采用复合化学法诱导50只F344雄性大鼠建立HCC模型(化学诱癌组),对照组为30只F344雄性大鼠。观察两组大鼠生长状态,每隔4周随机处死观察组10只,对照组6只大鼠,观察肝脏的肉眼和组织形态学改变,并采用免疫组化法检测肝组织内SERPINB5蛋白的表达情况。结果复合化学法诱导16周能成功诱导大鼠HCC。与对照组相比,诱导不同时间的化学诱癌组的大鼠肝组织形态学和SERPINB5蛋白的表达出现不同的改变。自第4周起,两组大鼠肝组织形态学出现差异。随着化学诱导时间的延长,化学诱癌组大鼠肝组织形态学出现不同的特征改变,第12周时,呈现典型的肝炎表现,第16周时,呈现典型的肝硬化表现,并伴有癌细胞微浸润,第20周时,癌细胞异型性更加明显,可见癌细胞大量浸润。第16周时,SERPINB5蛋白的表达量开始明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),第20周时,SERPINB5的表达明显降低(P<0.05),且与诱癌第16周比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论在大鼠肝脏组织中,SERPINB5蛋白表达呈下降趋势,表明SERPINB5与HCC的发生、发展有密切关系;SERPINB5可能是肝癌早期诊断的新分子标记及其治疗的新靶点。

SerpinB5和β-catenin在原发性肝细胞癌中的表达及

目的探讨SerpinB5和β-catenin在原发性肝细胞癌（HCC）发生和发展中的作用。方法采用免疫组织化学和实时定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法检测60例原发性HCC患者癌组织和癌旁组织中SerpinB5和β-catenin蛋白及mRNA的表达情况。结果癌组织中SerpinB5蛋白阳性表达率和SerpinB5 mRNA明显低于癌旁组织[25.0%（15/60）比63.3%（38/60）和1.12 ± 0.43比5.19 ± 0.39]，差异有统计学意义（P 〈 0.01）。癌组织中β-catenin蛋白阳性表达率和β-catenin mRNA明显高于癌旁组织[65.0%（39/60）比31.7%（19/60）和4.23 ± 0.25比1.19 ± 0.17]，差异有统计学意义（P 〈 0.01）。SerpinB5阳性表达降低与甲胎蛋白升高、肿瘤直径增大、分化程度差、TNM分期较晚、包膜侵犯及脉管癌栓有关（P〈0.01或〈0.05），β-catenin阳性表达增加与分化程度差、TNM分期较晚、包膜侵犯及脉管癌栓有关（P〈0.01或〈0.05）。相关性分析结果显示，SerpinB5与β-catenin的表达呈明显负相关（癌组织：r = -0.346, P = 0.001，癌旁组织：r= -0.258，P = 0.024）。结论SerpinB5和β-catenin的异常表达与原发性HCC的进展、恶性生物学行为密切相关，且两者在原发性HCC的发生和发展中存在协同作用。