抗氧化能力指数(ORAC)测定原理及应用

目的介绍抗氧化能力指数测定方法的原理、应用及发展前景。方法被译为抗氧化能力指数的oxygenradicalabsorbancecapacity(ORAC)方法,是目前抗氧化研究领域中为人们所关注的一个评价方法。该方法以偶氮类化合物AAPH作为过氧自由基来源,SodiumFluorescein为荧光指示剂,维生素E水溶性类似物Trolox为定量标准,使用荧光微孔板分析仪进行分析。结果方法的专属性、线性、精密度、准确度及重复性等与其他抗氧化能力分析方法相比具有诸多显著的优点。结论该方法目前已成功应用于生物样品、植物或食品提取物和纯化合物等多种样品的体内外抗氧化能力分析,并有希望在研究氧化与疾病发生关系等方面发挥重要的作用。

丹参酮类化合物对小鼠应激性肝损伤的保护作用

目的研究4种丹参酮类化合物对拘束应激引起小鼠肝损伤的保护作用。方法采用拘束负荷法造成小鼠应激性肝损伤。应用赖氏法测定小鼠血浆中ALT活性,TBARS法测定血浆及肝组织匀浆中的MDA含量,抗氧化能力指数(ORAC)法测定血浆抗氧化能力指数,HPLC法测定血浆及肝组织匀浆中维生素C和GSH水平,以及ORAC法测定和观察丹参酮类化合物的体内和体外抗氧化活性。结果与拘束模型组相比,4种丹参酮类化合物均可明显降低应激小鼠血浆ALT水平,提高肝组织匀浆的抗氧化能力指数、维生素C和GSH水平,并降低MDA含量。4种丹参酮类化合物体外也显示出较强的抗氧化能力。在体内和体外实验中,二氢丹参酮的抗氧化作用均明显优于其他3种丹参酮类化合物。结论丹参酮类化合物对拘束应激引起的小鼠肝损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能部分来自于其抗氧化活性。

火棘果实提取物对拘束应激负荷引起小鼠肝损伤的保护作用

目的研究火棘果实提取物对拘束应激负荷下活性氧引起小鼠肝损伤的保护作用。方法采用拘束负荷方法造成小鼠应激性肝损伤模型。赖氏法测定小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,TBARS法测定血浆及肝组织匀浆中的丙二醛(MDA)水平,ORAC法测定血浆抗氧化能力指数,HPLC法测定血浆及肝组织匀浆中维生素C(VC)水平,以及ORAC方法测定火棘果实提取物和芦丁、金丝桃苷的体外抗氧化活性。结果与拘束模型组相比,火棘果实提取物可以有效降低应激负荷小鼠血浆ALT活力和血浆、肝组织匀浆中MDA水平,并显著提高血浆和肝组织匀浆的抗氧化能力指数和VC水平。火棘果实提取物及其活性成分芦丁和金丝桃苷体外显示出较强的抗氧化能力。结论火棘果实提取物对拘束应激负荷下活性氧引起的小鼠肝损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能来自于清除自由基和抑制脂质过氧化过程。

浅谈微课在中医药院校生物化学教学中的构建和应用

在医学院校生物化学教学中引入微课越来越受到学生的欢迎,正在得到广泛的推广。本文对微课在中医药院校生物化学教学中的构建和应用进行了初步的分析,在此基础上对在教学实践中如何避免微课的不足和微课应用前景进行了展望。

将翻转课堂模式应用于中医药院校生物化学教学中的思考

翻转课堂实现知识传授和知识内化两个阶段的翻转,可以提升学生学习的主动性和有效性,教师亦可随时掌握学生的学习程度。本论文通过分析高等中医药院校生物化学课目前存在的问题与实施翻转课堂的必要性,提出在生物化学课中实践翻转课堂的具体想法和实施步骤,以期为高等中医药院校生物化学教学提供参考。

金钗石斛中联苄类和酚酸类成分的抗氧化活性研究

目的研究金钗石斛体积分数60%乙醇提取物中联苄类和酚酸类成分的抗氧化活性,探讨其抗氧化活性与结构的关系。方法综合运用现代色谱学和光谱学方法对金钗石斛体积分数60%乙醇提取物中的化学成分进行分离鉴定;采用1,1-苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除法和氧自由基清除能力法两种体外活性测试方法评价分得的16个化合物的抗氧化活性。结果从金钗石斛体积分数60%乙醇提取物中分离得到3个新的联苄类化合物和13个酚酸类化合物,将它们的结构鉴定为nobilinA(1),nobilinB(2),nobilinC(3),丁香酸(syringicacid)(4),2-羟基苯丙醇(2-hydroxyphenylpropanol)(5),香草醛(vanil-lin)(6),罗布麻宁(apocynin)(7),松柏醛(coniferylaldehyde)(8),丁香醛(syringaldehyde)(9),丁香乙酮(syringylethanone)(10),对羟基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde)(11),3-羟基-4-甲氧基苯乙醇(3-hydroxy-4-methoxyphenylethanol)(12),α-羟基丁香丙酮(α-hydroxysyringylethanone)(13),二氢松柏醇(dihydroxyconiferylalcohol)(14),对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoicacid)(15),对羟基苯丙酸(p-hydroxyphenylpropionicacid)(16)。1-二苯基-2-苄基苯肼(DPPH)法活性测试中,化合物4的活性明显强于维生素C(VitC),化合物1,2,12,14显示出弱于VitC但强于2,6-二羟丁基对甲酚(BHT)的活性,化合物3和8只显示很弱的活性;氧自由基清除能力法(ORAC)法测试结果表明,化合物2～4,7～10,15显示出强于VitC的活性,化合物12,14,16活性较弱。结论金钗石斛中的联苄类和酚酸类化合物大多具有不同程度的抗氧化活性,活性的强弱与分子结构之间存在一定的相关性。

藤茶总黄酮对拘束负荷引起小鼠肝损伤的保护作用

目的研究藤茶总黄酮对拘束负荷造成小鼠肝损伤的保护作用。方法采用拘束负荷方法引起小鼠应激性肝损伤模型。赖氏法和TBARS法分别测定小鼠血浆中谷丙转氨酶活性和丙二醛含量,HPLC法测定肝组织匀浆中维生素C及谷胱甘肽水平,ORAC方法测定肝组织的抗氧化能力指数及藤茶总黄酮和二氢杨梅素的体外抗氧化活性。结果与拘束模型组相比,藤茶总黄酮可以明显提高拘束负荷小鼠肝组织匀浆的抗氧化能力指数、维生素C和谷胱甘肽水平,有效降低血浆中丙二醛含量和谷丙转氨酶水平。藤茶总黄酮及二氢杨梅素在体外显示出较强的抗氧化能力。结论藤茶总黄酮对拘束负荷引起的小鼠肝损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能部分来自于清除自由基和抑制脂质过氧化过程。

Antioxidant phenanthrenes and lignans from Dendrobium nobile

To study the antioxidant constituents from the stems of Dendrobium nobile, and to discuss theft structure-activity relationship. Compounds were isolated from a 60% ethanolic extract by various chromatographic techniques and were identified by spectral analysis. The antioxidant activities of compounds were evaluated by DPPH free radical scavenging assay. Five phenanthrenes and four lignans were obtained from the active fractions ofD. nobile. Their structures were identified as fimbriatone （1）, confusarin （2）, flavanthrinin （3）, 2,5-dihydroxy-4,9-dimethoxyphenanthrene （4）, 3,7-dihydroxy-2,4-dimethoxyphenanthrene （5）, syringaresinol （6）, pinoresinol （7）, medioresinol （8） and lirioresinol-A （9）, respectively. Compounds 2 and 6 exhibited more potent DPPH scavenging activities than vitamin C. All the above compounds were reported from this plant for the first time, and compounds 3, 4 and 9 were reported for the first time from the genus of Dendrobiurn. For all phenanthrenes and lignans, an electron-donating methoxyl group in the ortho position to the phenolic hydroxyl group exhibits enhanced antioxidant activities.

桔梗皂苷D人工抗原的合成及鉴定

目的:合成桔梗皂苷D(PlatycodinD,PD)的人工完全抗原,为制备桔梗皂苷D的单克隆抗体及建立相应的免疫学分析方法奠定基础。方法:采用高碘酸钠(NaIO4)氧化法分别合成桔梗皂苷D免疫抗原(PD-BSA)和包被抗原(PD-OVA)。用薄层色谱法鉴定人工抗原是否偶联成功;用动物免疫法测定其抗原性;并融合后筛选阳性孔。结果:薄层色谱法显示PD与BSA/OVA偶联成功;用合成的PD-BSA免疫小鼠后可使小鼠体内产生抗PD抗体,效价在1∶8000以上;融合可得出阳性孔。结论:成功合成了PD人工免疫原和包被原,可用于下一步PD单克隆抗体的制备及建立相应免疫学分析方法。

晶状体抗氧化能力指数的测定

目的:建立晶状体抗氧化能力指数的测定方法。方法:以D-半乳糖诱导小鼠高血糖模型,采用ORAC法测定小鼠晶状体的抗氧化能力指数,HPLC法测定晶状体内谷胱甘肽及维生素C含量。结果:与正常组相比,D-半乳糖诱导高血糖模型组小鼠晶状体的抗氧化能力指数、谷胱甘肽及维生素C含量均显著性下降。结论:ORAC方法可用于测定晶状体的抗氧化能力指数,其活性与晶状体中谷胱甘肽及维生素C含量相关。

基于单抗的间接竞争ELISA检测黄连解毒汤中栀子苷在小鼠体内的代谢

目的：应用自主研制的栀子苷单克隆抗体建立的间接竞争ELISA（icELISA）法，检测黄连解毒汤灌胃给药后小鼠体内栀子苷的含量，分析药代动力学参数。方法：icELISA方法学验证；小鼠给药后分17个时间点取血，10μl／只，icELISA法检测栀子苷。结果：该方法的线性范围是1．17—37．5μg／ml，最低检测限0．14～0．45μg／ml，最低定量检测限1．17μg／ml；日内和日间精密度均≤10％；回收率96．38％-103．38％；栀子苷含药血浆样品室温放置12h稳定性好。本实验测得的栀子苷在小鼠体内的达峰时间和平均滞留时间与文献报道基本～致。结论：基于栀子苷单克隆抗体的icELISA法能够高通量、快速、准确检测生物样品中栀子苷，具有良好的应用前景。

束缚应激反应对小鼠晶状体抗氧化能力指数的影响

目的探讨束缚应激反应对小鼠晶状体抗氧化能力指数的影响。方法建立小鼠束缚应激模型,采用荧光酶标仪测定晶状体的抗氧化能力指数,用高效液相-电化学检测器(HPLC-ECD)测定小鼠晶状体中谷胱甘肽含量。结果随着应激时间的延长,小鼠晶状体的抗氧化能力指数和谷胱甘肽含量与正常组相比均有不同程度下降。结论束缚应激状态下,晶状体的抗氧化能力指数和谷胱甘肽水平均相应降低,其机制可能与晶状体内的内源性抗氧化能力降低及氧自由基产生过多和蓄积有关。

贯叶连翘的化学成分及降糖活性研究

目的:研究贯叶连翘Hypericum perforatum L.的化学成分及降糖活性。方法:运用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱以及制备HPLC等多种方法对贯叶连翘地上部分95%乙醇提取物进行分离纯化,利用HR-ESI-MS、NMR等波谱技术对分离得到的化合物进行鉴定。通过体外α-葡萄糖苷酶活性抑制试验,测定化合物的降糖活性。结果:从贯叶连翘中分离得到14个化合物,分别鉴定为:北美芹素(1)、3′,4′-disenecioyl-cis-khellactone(2)、5,4′-二羟基-6,8-二甲基-7-甲氧基黄酮(3)、5,4′-二羟基-6-甲基-7-甲氧基黄酮(4)、5,7-二羟基-3-甲基色原酮(5)、5,7-二羟基-3-乙基色原酮(6)、2,4,6-三羟基苯甲酸乙酯(7)、香草醛(8)、7-hydroxy-5-methoxy-4,6-dimethylphthalidc(9)、α-生育醌(10)、豆甾醇(11)、乙酰-11-羰基-β-乳香酸(12)、阿魏酸二十六烷酯(13)、cosmosoic acid(14)。结论:其中,化合物1~4、10、12~14为首次从金丝桃属植物中分离得到,化合物5~7、9为首次从贯叶连翘中分离得到。化合物3和4表现出较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其IC_(50)值分别为490.3和549.9μmol/L,与阳性药阿卡波糖效果(IC_(50)=500.1μmol/L)相当。

高效液相色谱法测定燕麦麸皮芦丁的含量

目的:建立燕麦麸皮中芦丁的含量测定方法。方法:燕麦麸皮经甲醇提取,提取物用甲醇溶解,定容,HPLC分析条件为流动相甲醇-0.4%磷酸(45:55),流速1.0mL/min,柱温30°C,360nm波长下检测样品芦丁的含量。结果:线性方程为Y=0.0007X-0.0029,r=0.9997,线性范围0.025～0.125μg,平均回收率99.58%,RSD为1.32%。结论:本方法简单、快捷,重复性良好,可用于燕麦麸皮中芦丁含量的质量控制。

多种教学模式在中医药院校生物化学实验教学中的应用思考

目前,中医药院校生物化学实验的传统教学模式是以授课为基础的学习(LBL)教学模式与以团队为基础的学习(TBL)教学模式为主,常常导致实验教学停留在机械性操作-记录结果-撰写报告的简单循环中,学生缺乏对于实验内容的深度探究和认识,无法达到培养创新科研型人才的教学目标。在中医药院校生物化学实验教学中引入以案例为导向的学习(CBL)教学模式、以问题为中心的学习(PBL)教学模式、以资源为基础的学习(RBL-1)教学模式和以研究为基础的学习(RBL-2)教学模式,引导学生搜集资料、预习、参与实验思路设计、构想实验实际应用,激发学生对于实验原理、实验操作、实验结果的探究兴趣,可以有效提升课堂质量,培养学生创新思维,实现生物化学实验教学的最优效果,促进创新型、复合型中医药人才培养。

毛茛科中C_(20)-二萜生物碱及其生物活性研究进展

C_(20)-二萜生物碱在毛茛科中主要分布在乌头属、翠雀属和飞燕草属植物中,其化学结构类型主要分为阿替生型、光翠雀碱型、海替定型和海替生型等9种类型。生物活性研究表明该类化合物在抗肿瘤、镇痛、抗心律失常和抗炎等方面均表现出较好的活性。该文对2002年至今从毛茛科植物中报道的190个C_(20)-二萜生物碱的化学结构和生物活性进行了总结,以期对毛茛科植物中C_(20)-二萜生物碱的研究提供参考。

啤酒花中1个新的查耳酮类化合物

目的研究啤酒花Humulus lupulus的化学成分,并评价其体外抗炎活性。方法采用多种色谱技术进行分离纯化,通过高分辨质谱、核磁共振等方法对化合物进行结构鉴定,并采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型评价其体外对NO释放的抑制作用。结果从啤酒花带花果穗的95%乙醇提取部位中分离得到6个化合物,分别鉴定为2′,4-二羟基-4′,6′-二甲氧基-3′-(2-羟基-3-甲基-3-丁烯基)查耳酮(1)、tsugafolin(2)、dihydroxanthohumol(3)、4′-O-methylxanthohumol(4)、(2S,2′′S)-4′-hydroxy-5-methoxy-7,8-(2,2-dimethyl-3-hydroxy-2,3-dihydro-4H-pyrano)flavanone(5)和(2R,2′′S)-4′-hydroxy-5-methoxy-7,8-(2,2-dimethyl-3-hydroxy-2,3-dihydro-4H-pyrano)flavanone(6)。体外抗炎实验表明,化合物1和4的半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC_(50))分别为(5.83±1.76)和(10.45±2.36)μmol/L。结论化合物1为1个新的查耳酮类化合物,命名为(±)-蛇麻花素A,化合物2为首次从葎草属中分离得到。化合物1和4均具有显著的抗炎活性。

山茱萸中1个新的裂环环烯醚萜类化合物

采用大孔吸附树脂、硅胶、ODS、Sephadex LH-20和HPLC等多种技术对山茱萸化学成分进行分离纯化,综合利用HR-ESI-MS、1D和2D NMR等波谱技术鉴定化合物结构,从山茱萸水提物中分离鉴定了10个化合物,分别为(±)-cornuscone(1)、(-)-(Z)-4-hydroxy-3-methoxyphenylpropene 4-O-β-L-xylopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(2)、kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside(3)、kampferol(4)、myricetin(5)、trifolin(6)、quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside(7)、quercetin 3-O-β-D-glucuronide-6″-methyl ester(8)、quercetin 3-O-β-D-glucuronide-6″-ethyl ester(9)、pyrogallol(10)。化合物1为新的裂环环烯醚萜类化合物,命名为(±)-cornuscone,其结构中具有少见的C-1位甲基取代。选用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠RAW264.7细胞模型以评价化合物的抗炎活性,结果显示化合物1的半数抑制浓度(IC_(50))为(31.15±1.29)μmol·L^(-1),表明其抗炎活性显著优于阳性药吲哚美辛[indomethacin,IC_(50)为(48.32±1.66)μmol·L^(-1)]。

苦茶的化学成分(英文)

目的:对苦茶(Camellia assamica var.kucha Chang et Wang)叶的化学成分进行研究。方法:采用水提取,聚酰胺、Sephadex LH-20、ODS柱和HPLC等手段分离纯化,通过理化常数和谱学数据鉴定化合物的结构。结果:分离鉴定了10个化合物,其中3个为嘌呤生物碱类化合物,分别为theacrine(1),caffeine(2),theobromine(3);7个为茶多酚类,分别为(+)-catechin(4),(–)-epigallocatechin(5),(–)-gallocatechin(6),(–)-epigallocatechin3-O-gallate(7),(–)-gallocatechin3-O-gallate(8),1,2,6-tri-O-galloyl-β-D-glucose(9),gallic acid(10)。结论:化合物4～10为首次从该植物中分离得到,并首次对化合物1的核磁数据进行了全归属。

黑果枸杞果实化学成分研究

目的研究黑果枸杞（LyciumruthenicumMurr．）果实的化学成分及其对缺氧缺糖（oxygen—glueosedeprivation，OGD）损伤PCI2细胞的保护作用。方法采用D101型大孔吸附树脂、硅胶、ODS、SephadexLH-20柱色谱和制备高效液相色谱等多种色谱方法分离纯化．根据理化常数以及NMR等波谱学方法鉴定其结构，并采用MTF法测定其对OGD损伤的PCI2细胞的保护作用。结果从黑果枸杞果实的体积分数65％乙醇提取物中共分离得到了11个化合物，分别是：p．hydroxyphenethyltrans—ferulate（1），山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaempferol3-D-β-D—glucopyranoside）（2），槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（quercetin3-O-β-D—glueopyranoside）（3），紫丁香苷（syringin）（4），槲皮素（5），咖啡酸乙酯（6），p-香豆酸（7），阿魏酸（8），2，6-bis（1-phe—nylethyl）phenol（9），正三十二烷（10）和胡萝卜串（11）。结论其中化合物1～4，6，9和10为首次从该种植物中分离得到；化合物1—8对0GD损伤的PCI2细胞有一定的保护作用。