金属离子对CHO细胞抗体表达及抗体电荷分布的影响

旨在深入认识金属离子在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养生产单克隆抗体过程中所发挥的作用。综合考察了不同铜离子和锌离子浓度下CHO细胞的生长、抗体的表达以及抗体的电荷分布情况。结果显示,一方面,当培养基中铜离子浓度为120 nmol/L、锌离子浓度为50μmol/L时,最有利于CHO细胞的生长和抗体的表达。过高或过低的铜离子和锌离子均对细胞的生长和活性的维持产生了不利影响。另一方面,作为碱性羧肽酶抑制剂和辅因子的铜离子和锌离子对抗体的电荷分布有着重要的影响。当培养基中铜离子浓度为50 nmol/L、锌离子浓度为50μmol/L时,最有利于减少抗体的电荷变体,提高主峰含量。过高或过低的铜离子和锌离子均导致了电荷变体的增加,主峰含量的降低。且两者的浓度和比例影响了抗体C末端赖氨酸的酶切过程,进而影响了碱性变体的含量。此外,对铜、锌离子的操作空间进行了初步的研究。金属离子在CHO细胞培养过程中对细胞的生长、抗体的表达以及抗体的电荷分布等方面都发挥着重要的作用。

酵母抽提物对CHO细胞生长及抗体表达的影响

为了深入认识酵母抽提物在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞生长及单克隆抗体表达过程中所发挥的作用,综合考察了传代培养和批式培养过程中,不同浓度酵母抽提物条件下CHO细胞生长、抗体表达以及营养物代谢的情况。传代培养过程中,低浓度(1 g/L)的酵母抽提物能够显著促进CHO细胞的生长,高浓度(5-10 g/L)的酵母抽提物则会显著抑制CHO细胞的生长;同时,传代过程中添加酵母抽提物不会影响种子细胞在批式培养中的表现。批式培养过程中,抗体比生成速率随酵母抽提物浓度的提高而升高,浓度为10 g/L时获得最高抗体产量。通过采用细胞生长阶段低浓度、产物表达阶段高浓度的添加策略,酵母抽提物在动物细胞培养过程中可发挥巨大的应用价值。

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶是一种由纳豆芽孢杆菌产生的具有强溶纤作用的碱性丝氨酸蛋白酶,具有安全性好、半衰期长、口服有效等优点。就纳豆激酶的结构、理化性质、功能、溶栓机制、酶活性测定、分离纯化以及纳豆激酶的应用现状及发展前景等方面进行了综述。

亲和层析介质性能分析及其在单抗纯化中的应用

对6种商品化蛋白A亲和层析介质进行了性能分析,包括动态载量、洗脱条件等,并对含有单抗药物Mab-HS006的实际料液进行了捕获分离,对宿主细胞蛋白及蛋白A的残留进行了分析。结果表明,Prosep Ultra Plus和Mabselect SuRe亲和介质的载量最高,而Protein A Sepharose CL-4B和r-Protein A Sepharose的洗脱条件最温和。一步层析捕获分离Mab-HS006单抗的结果表明,各种介质的纯度均可达90%以上,Prosep Ultra Plus的宿主细胞蛋白残留最高,Mabselect SuRe蛋白A的脱落最低。

确定性筛选设计优化双特异性抗体细胞培养工艺

[目的]旨在快速优化双特异性抗体细胞培养工艺参数,提高蛋白表达量,改善产品关键质量属性。[方法]应用确定性筛选实验设计研究工艺参数(接种密度、培养温度和流加策略)对细胞生长、蛋白表达及关键质量属性(电荷异质性、聚体和高甘露糖型)的影响,利用一步法找出最佳工艺条件,然后放大至2L生物反应器进行工艺验证。[结果]应用JMP软件对实验数据拟合分析找出了最佳工艺条件,接种密度:(1.3±0.2)×10^(6)cells/m L,培养温度:36.5±0.5℃,补料策略:第3 d、13 d流加初始培养体积3%,第5 d、7 d、9 d、11 d流加初始培养体积3.5%。通过2L生物反应器进行了工艺验证。活细胞密度峰值提高了11%,蛋白表达量提高了15%,质量合格。[结论]通过确定性筛选实验设计一步法快速找出了表达双特异性抗体的最佳细胞培养工艺条件,并且能在生物反应器中得到重复和验证。

抗Her-2单克隆抗体A及上市原研药生物学活性研究及评价

目的:评价抗Her-2单克隆抗体A的生物学活性并与上市原研药进行比较。方法:利用表面等离子共振技术比较抗Her-2单克隆抗体A及上市原研药的抗原-抗体结合活性;利用BT-474细胞模型测定抗Her-2单克隆抗体A对肿瘤细胞的生长抑制活性并与上市原研药进行比较;以SK-BR-3细胞作为靶细胞,NK92MI-CD16a作为效应细胞,检测抗Her-2单克隆抗体A的抗体依赖的细胞介导的细胞杀伤作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC),并与上市原研药进行比较。结果:抗Her-2单克隆抗体A抗原抗体结合活性、对BT-474细胞的生长抑制活性以及ADCC活性批间一致,并与上市原研药高度相似。结论:抗Her-2单克隆抗体A的抗原抗体生物学活性批间一致,并与上市原研药具有高度的相似性和可比性。

高密度接种和高密度冻存强化双特异性抗体细胞培养工艺

[目的]为了提高双特异性抗体生产效率,降低生产成本,对CHO细胞培养进行工艺强化研究。[方法]基于CHO细胞悬浮培养传统的补料批次生产工艺,应用高密度细胞冻存和N代高密度接种进行工艺强化,研究不同工艺对细胞生长、蛋白表达及关键质量属性的影响。[结果]将常规冻存密度1×10^(7)个/mL提高至1×10^(8)个/mL,在获得相当产量和可比产品质量的前提下,将细胞培养时间从23 d缩短至19 d;将初始接种活细胞密度从0.3×10^(6)~0.5×10^(6)cells/mL提高至3.0×10^(6)~6.0×10^(6)cells/mL;相同的培养周期内,在不影响蛋白质量的情况下最终蛋白产量从1.52 g/L提高至2.57 g/L。[结论]通过在2L生物反应器规模上对细胞培养工艺进行强化研究,缩短了4 d的细胞培养生产周期,降低了细胞污染的风险,在不影响蛋白质量的情况下,蛋白表达量提高了69%,降低了生产成本。